105株肺炎链球菌青霉素敏感性测定及耐药性研究

目的肺炎链球茵对青霉素敏感性测定及耐药性分析；方法对青霉素敏感性的测定，采用苯唑西林纸片扩散法作初筛，抑茵环直径≥20mm，判断为对青霉素敏感，抑茵环直径≤19mm，再进一步用Etest法检测MIC来确定是否青霉素耐药；结果纸片扩散法42．9％(45／105)的肺炎链球茵抑茵环直径≥20mm，判定为青霉素敏感，Etest法35．2％(37／105)的肺炎链球茵对青霉素耐药。青霉素敏感茵株对头孢类抗茵药物普遍敏感，但对红霉素、氯霉素有较强的耐药性，尚未发现对万古霉素耐药的菌株；结论本地区PNSP的发生率占35．2％，这类菌株所致感染应避免选用青霉素类抗茵药。可首选第三代头孢，严重感染者可选用万古霉素其治疗效果较理想。

肺炎链球菌青霉素MIC与PBP变异的关系

目的探讨肺炎链球菌(Sp)青霉素抗生素最小抑菌质量浓度(MIC)与青霉素结合蛋白(PBP)1A、2B和2X变异的关系。方法用MIC法对51株Sp进行青霉素药敏试验,并提取每株Sp的DNA,分别对其PBP1A、PBP2B中编码青霉素结合区域进行PCR扩增然后测序,并用软件进行序列比对,分析PBP1A、2B保守序列的氨基酸置换。结果在所有MIC≤1 mg/L的青霉素敏感Sp(PSSP)中均未发现PBP1A突变,而在MIC>1 mg/L时多数菌株出现Thr574-(Asn)、Ser575-Thr、Gln576-Gly(、Phe)577-(Tyr)4个连续残基的置换变异和Thr371-Ser的置换。PBP2B在所有MIC≤1 mg/L的PSSP中均未发生任何突变;而当MIC分别大于1 mg/L和2 mg/L时,均出现445Thr-Ala和Glu338-Gly。结论 PBP1A、PBP2B基因突变分别可导致其表达的PBP1A、PBP2B结构异常,与青霉素(包括其他β内酰胺类抗生素)亲和力下降,继而青霉素耐药。

降低苯唑西林纸片扩散法折点值在评估肺炎链球菌非脑膜炎株对青霉素敏感性中的应用价值

目的探讨降低苯唑西林纸片扩散法(K-B法)敏感折点值在评估肺炎链球菌(SP)对青霉素敏感性中的应用价值。方法收集614株SP非脑膜炎株,用苯唑西林K-B法测定苯唑西林纸片直径,用青霉素Etest法作为测定SP对青霉素敏感性的金标准,评价不同敏感折点的苯唑西林K-B法在SP对青霉素敏感性中的检测效能。结果 614株SP非脑膜炎株中,青霉素敏感肺炎链球菌占98.05%,青霉素中度敏感肺炎链球菌占1.95%。采用标准敏感折点为≥20 mm、≥14 mm、≥7 mm时,苯唑西林K-B法的灵敏度分别为14.45%、17.11%、19.93%,而特异性均为100.00%。结论降低敏感折点值可提高苯唑西林K-B法测定SP非脑膜炎株对青霉素敏感的灵敏度,而特异性保持不变,各级医疗机构应探讨降低苯唑西林K-B法折点值的可行性。

氯霉素治疗耐青霉素链球菌性脑膜炎无效

青霉素加氯霉素常为脑膜炎的首选药物,目前耐青霉素的肺炎链球菌(PRSP)性脑膜炎患者不断增加,用氯霉素治疗PRSP性腩膜炎的效果尚不明确。因此,作者对应用青霉素加氯霉素治疗的肺炎链球菌性脑膜炎患儿进行了长达27个多月的前瞻性研究。

肺炎链球菌呼吸道分离株耐药性及CXCL5基因多态性与青霉素敏感性

目的探究呼吸道肺炎链球菌分离株耐药情况及CXC趋化因子配体5(CXCL5)基因多态性与青霉素敏感性的关系。方法选取2021年6月-2023年6月遵义市第一人民医院(遵义医科大学第三附属医院)和重庆市北碚区中医院收治的82例呼吸道肺炎链球菌感染患者为研究组,84名健康体检者为对照组,分析肺炎链球菌耐药情况及CXCL5基因多态性与青霉素敏感性的关系。结果肺炎链球菌对红霉素(90.24%)、阿奇霉素(89.02%)、四环素(86.59%)、克林霉素(84.15%)耐药严重,对利奈唑胺(100.00%)、头孢吡肟(98.78%)、青霉素(90.24%)、头孢曲松(97.56%)、头孢噻肟(97.56%)、氯霉素(91.46%)较为敏感;研究组CXCL5基因rs425535位点AA、AG基因型、A等位基因分布高于对照组(P<0.05),GG基因型、G等位基因分布低于对照组(P<0.05);CXCL5基因rs425535位点AA、AG、GG基因型与A、G等位基因分布在不同青霉素敏感性患者中差异具有统计学意义(P<0.05)。结论呼吸道肺炎链球菌对红霉素、阿奇霉素、四环素和克林霉素耐药严重,对利奈唑胺、头孢吡肟、青霉素、头孢曲松、头孢噻肟和氯霉素较为敏感,呼吸道肺炎链球菌感染患者与CXCL5基因多态性有关,且CXCL5基因多态性与青霉素敏感性有一定关系。

118株肺炎链球菌的耐药性分析

目的监测该院肺炎链球菌的耐药性,为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法采集该院2010年1月至2014年12月门诊与住院感染患者痰液及咽拭子标本,培养、分离和鉴定肺炎链球菌。用法国生物梅里埃公司的ATB细菌鉴定及药敏仪进行菌种鉴定和药敏试验。结果共分离出118株肺炎链球菌,来自儿童患者肺炎链球菌70株,占59.3%,来自成人患者肺炎链球菌48株,占40.7%。分离自儿童的肺炎链球菌对青霉素不敏感率80.3%[耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)占28.6%;低耐青霉素肺炎链球菌(PISP)占57.1%],高于分离自成人的肺炎链球菌70.8%的不敏感率(PRSP占41.6%,PISP占29.2%),青霉素不敏感的菌株与青霉素敏感的菌株相比,容易表现出更多的耐药性。分离自儿童的肺炎链球菌对四环素、红霉素、克林霉素、复方磺胺甲噁唑的耐药率分别为100.0%、100.0%、87.1%、75.7%,而分离自成人的肺炎链球菌对以上4种抗菌药物的耐药率均达到100.0%。结论该院分离的肺炎链球菌对青霉素的耐药性呈上升趋势,四环素、红霉素、克林霉素和复方磺胺甲噁唑已不是治疗肺炎链球菌的有效药物。

青霉素不敏感的肺炎链球菌pbp2b基因新的变异

目的调查本地区青霉素不敏感肺炎链球菌（PNSP）的pbp2b基因和氨基酸序列的变异特点。方法2006年1—12月收集肺炎链球菌临床分离株24株，检测其对青霉素的敏感性，对青霉素不敏感肺炎链球菌的青霉素结合蛋白pbp2b基因进行PCR扩增和测序以及序列比对与生物信息学分析。结果在13株青霉素不敏感肺炎链球菌[最低抑菌浓度（MIC）≥0．1mg／L]中，均发生紧邻SSN的Thr445→Ala替换以及Glu475→Gly、Thr488→Ala／Ser的替换；而Glu332→Gly的替换也较常见，存在于12株PNSP（MIC≥0．25mg／L）；另外，在7株青霉素耐药的肺炎链球菌（MIC≥3mg／L）中，均发生了紧邻KTG之后Ala618→Gly的替换，且这7株菌属于Baek’sⅡ群，与韩国菌株J77的核苷酸及氨基酸序列一致，而菌株14，15，8，11及24的氨基酸序列出现了新的变异，已向GenBank提交序列，获得序列号：EU035970，EU056919，EU056920，EU056921，EU106886。结论本地区大多数的青霉素耐药肺炎链球菌pbp2b基因的变异序列高度相似，而青霉素中度敏感肺炎链球菌的基因序列产生新的变异。

CXCL5基因多态性与呼吸道肺炎链球菌感染及青霉素敏感性的相关性研究

目的探讨CXCL5基因多态性与呼吸道肺炎链球菌感染及青霉素敏感性的相关性。方法选择2019年1月—2021年1月在青海大学附属医院就诊的112例呼吸道肺炎链球菌感染患者和同期120名健康体检者作为研究对象。选择CXCL5的2个SNP位点rs352046和rs425535,用片段分析技术对SNP位点进行基因分型;采用VITEK2 Compact药敏卡AST-GP68对肺炎链球菌进行药敏试验。结果CXCL5基因rs352046位点GG、GC、CC基因型在病例组中分别为58、35、19例,在健康对照组中分别为80、28、12例,基因型分布在两组中差异无统计学意义(χ^(2)=5.596,P=0.061),而两组间的基因频率差异有统计学意义(χ^(2)=8.858,P=0.008)。rs425535位点GG、GA、AA基因型在病例组中分别为63、32、17例,在健康对照组中分别为95、20、5例,两组基因型分布和等位基因频率差异均有统计学意义(χ^(2)分别为15.538,20.320;P<0.001)。rs352046位点GG、GC和CC基因型携带者的CRP水平分别为(27.65±3.25)、(36.83±4.23)和(48.25±4.86)mg/L,GC和CC基因型携带者的CRP显著高于GG基因型,CC基因型携带者的CRP显著高于GC基因型(P<0.05);rs425535位点GG、GA和AA基因型携带者的CRP水平分别为(31.52±3.64)、(33.29±2.95)和(44.62±4.35)mg/L,AA基因型携带者的CRP显著高于GG和GA基因型(P<0.05)。CXCL5基因rs352046位点基因型分布和基因频率在青霉素不敏感和敏感肺炎链球菌感染患者中的差异无统计学意义(χ^(2)=0.465,P=0.793);rs425535位点基因型分布和基因频率在青霉素不敏感和敏感肺炎链球菌感染患者中的差异有统计学意义(P<0.05)。结论CXCL5基因多态性与肺炎链球菌感染及青霉素敏感性有关。

温州地区青霉素不敏感肺炎链球菌临床分离株的血清分型及耐药性分析

目的评价青霉素的体外药敏试验的检测方法,探讨青霉素不敏感肺炎链球菌(penicillin-nonsusceptible Streptococcus pneumoniae,PNSP)临床分离株的主要血清型、耐药特性及流行特征。方法从温州市中西医结合医院WHONET5.6分析系统筛选出2013-2017年肺炎链球菌1 006株,用E-test法确认青霉素的体外抗菌活性,荚膜肿胀试验进行血清型分型,用VITEK-2 Compact全自动细菌分析仪药敏系统判定药物敏感性,分析不同血清型对常用抗菌药物的耐药率。结果筛选获得602株PNSP菌株,不敏感率59.84%;进一步经E-test法复核,仅86株PNSP,不敏感率8.55%,两种检测方法比较差异具有统计学意义(χ^2=588.100,P<0.001);年龄以<5岁儿童为主;主要血清型分别为19A、19F、23F、6B、4、14,以19A、19F为主,分别占32.56%和23.26%;不同血清型PNSP对喹诺酮类、万古霉素和利奈唑胺具有高度的敏感性,19F和19A对β-内酰胺类药物耐药率较高;6B和23F对β-内酰胺类药物耐药率较低。结论肺炎链球菌血清流行病学分布的研究对于制订疫苗使用策略有着至关重要的意义,应及时监控PNSP血清流行病分布和耐药性变化。

儿童肺炎链球菌分离株青霉素、红霉素耐药性与耐药相关基因研究

目的了解苏州地区儿童肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae,Sp)临床分离株青霉素、红霉素耐药的状况。方法对呼吸道感染患儿痰标本中分离到的26株Sp进行青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟、红霉素E test药敏试验,和与青霉素、红霉素耐药相关的pbp2B、ermB、ermA/B、mefA基因PCR检测,测得pbp2B基因产物进行测序并与SpR6株(青霉素敏感株,登录号:NC003098)序列比较。结果(1)pbp2B基因突变15株(58%),均为点突变,突变类型有A型11株(73%)、B型2株(13%)、C型1株(7%)、D型1株(7%);(2)11株无突变菌中青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟敏感株分别为9株(82%)、10株(91%)、11株(100%)、11株(100%);15株突变菌中青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟不敏感株分别为13株(87%)、11株(73%)、1株(7%)、1株(7%);11株A型突变株对青霉素均不敏感,10株对二代头孢不敏感;(3)ermB基因阳性9株(35%)、ermA/B基因阳性16株(62%)、mefA基因阳性7株(27%)、erm或(和)mef基因阳性21株(81%);(4)erm或(和)mef基因阳性株红霉素最低抑菌浓度为2～>256mg/L。结论pbp2B基因突变是本地区Sp青霉素耐药机制的主要遗传学基础之一;突变株中,A类突变率最高,表现对青霉素、二代头孢不敏感;ermA、ermB和mefA3种红霉素耐药基因单独或共同表达?

肺炎链球菌青霉素结合蛋白基因pbp2x新的变异与青霉素及头孢噻肟耐药

目的调查研究肺炎链球菌临床分离株的pbp2x基因和氨基酸序列的变异特点，探讨本地区的肺炎链球菌对青霉素及头孢噻肟的耐药机制。方法2006年1月-2007年2月收集肺炎链球菌临床分离株34株，进行青霉素及头孢噻肟药敏试验，对青霉素不敏感的肺炎链球菌（PNSP）的青霉素结合蛋白pbp2x基因进行PCR扩增和测序，并进行BLAST分析。结果有12株PNSP（青霉素及头孢噻肟MIC≥0．5mg／L）发生了2个重要位点的氨基酸的替换：第一个保守基序STMK内Thr338→Ala及第三个保守基序KSG之前的Leu546-Val氨基酸替换。另外，菌株15发生了第二个保守基序SSN之前的His394→Leu氨基酸替换，而且本研究首次发现了紧邻第一个保守基序STMK后，Met342→Ile位点的氨基酸替换。有17个菌株的pbp2x基因的核苷酸及氨基酸序列出现了新的变异，已向GenBank提交，获得序列号：EU044831、EU089706-EU089709、EU106881-EU106884、EU124672。结论本地区大多数PNSP的pbp2x核苷酸及氨基酸变异序列高度相似，提示肺炎链球菌对青霉素及头孢噻肟的耐药与pbp2x基因变异相关。

今日青霉素

半个世纪以来,肺炎球菌、链球菌、淋病双球菌及脑膜炎双球菌一直是青霉素的主要抑制对象。由于金黄色葡萄球菌对青霉素有抗药性。所以对青霉素敏感的化脓性球菌中不包括金黄色葡萄球菌。1983年淋病双球菌对青霉素的抗药性达到高峰,以后下降。尽管已经鉴定某些肺炎球菌菌株对青霉素敏感性降低(最低抑菌浓度】0.1～2mg/l)。

2005—2009年温州育英儿童医院下呼吸道感染患儿肺炎链球菌耐药性分析

目的分析下呼吸道感染儿童肺炎链球菌(SP)对常用抗生素的药敏情况。方法采用回顾性分析方法,收集2005年1月至2009年12月温州医学院附属育英儿童医院住院患儿痰培养SP阳性且临床诊断为下呼吸道感染(包括支气管炎、毛细支气管炎、肺炎等)病例的药敏资料,分析其肺炎链球菌对常用抗生素的耐药。结果共检出643株SP,5年间SP对各种抗生素的不敏感率(中介率+耐药率)较高的前10位的药物依次为:红霉素99.3%、阿奇霉素98.6%、氯林可霉素98.3%、复方磺胺甲口恶唑95.0%、头孢克洛94.6%、头孢呋辛94.1%、四环素93.6%、青霉素93.2%、美罗培南87.4%、头孢噻肟77.9%,无耐万古霉素菌株。青霉素敏感SP组与青霉素不敏感SP组对红霉素、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢克洛、头孢曲松、阿莫西林/棒酸、阿莫西林、美罗培南的耐药性比较均P<0.05,对氯林可霉素、氨苄青霉素、四环素、复方磺胺甲口恶唑、环丙沙星、壮观霉素、左氧氟沙星和阿奇霉素等抗菌药物均P>0.05。红霉素敏感SP组与红霉素不敏感SP组对氯林可霉素、青霉素、四环素、阿奇霉素的耐药性比较均P<0.05,对头孢菌素、复方磺胺甲口恶唑、环丙沙星、阿莫西林/棒酸、左氧氟沙星、阿莫西林、氯霉素和美罗培南等抗菌药物均P>0.05。结论温州医学院附属育英儿童医院所在地区下呼吸道感染患儿SP耐药形势严峻,不同药物呈不同程度逐年增高趋势,应引起临床足够重视。

肺炎链球菌pbp2B基因突变与耐药表型关系的研究

肺炎链球菌主要通过青霉素结合蛋白基因突变，从而改变细胞壁上高相对分子质量青霉素结合蛋白（PBP）的结构，降低了其对抗生素分子的亲和性而产生对青霉素等B内酰胺类抗生素的耐药性。我们对分离自本院的30株肺炎链球菌（青霉素敏感4株，中介5株，耐药21株）用聚合酶链反应（PCR）扩增p6p2B基因，对PCR产物直接进行DNA测序，并与青霉素敏感的SpR6株序列（GenBank登录号NC003098）相比较。

苏州地区儿童肺炎链球菌临床分离株4种抗生素的耐药基因分子流行病学研究

目的了解苏州地区儿童肺炎链球菌(SP)青霉素、红霉素、四环素和万古霉素耐药基因的流行状况。方法从2002年9月至2003年4月苏州大学附属儿童医院就诊呼吸道感染患儿痰标本中分离SP;对分离到的31株菌进行4种抗生素药敏试验和pbp2B、ermA/B、mefA、tetM、vanA、vanB等7种基因的聚合酶链反应(PCR)检测;将pbp2BPCR产物进行测序,并与SPR6株(青霉素敏感株,登录号:NC003098)pbp2B序列比较。结果31株菌中:(1)青霉素敏感株38.7%(n=12),不敏感株61.3%(n=19),pbp2B基因突变株64.5%(n=20);(2)红霉素敏感株9.7%(n=3),耐药株80.6%(n=25),中介株9.7%(n=3),红霉素不敏感率90.3%,检出ermA/B基因71%(n=22),mefA基因32.1%(n=10),ermA/B和/或mefA基因87.1%(n=27);(3)四环素敏感株9.7%(n=3),耐药株80.6%(n=25),中介株9.7%(n=3),四环素不敏感率90.3%,检出tetM基因株90.3%(n=28);(4)万古霉素敏感株100%(n=31),不敏感率0%,31株菌均未检出vanA、vanB基因。结论苏州地区的SP临床分离株对青霉素、红霉素、四环素具多重高耐药性,对万古霉素具高敏感性之特征。青霉素、红霉素、四环素的耐药相关基因检测提供了该菌耐药的遗传学证据。

95株小儿呼吸道感染肺炎链球菌的耐药性研究

目的:分析本院儿科患者下呼吸道感染肺炎链球菌的耐药情况,指导临床合理用药。方法:对本院2007年9月～2009年12月从儿科分离的95株肺炎链球菌用K-B纸片法检测其对青霉素等5种抗生素的敏感度,对耐苯唑西林的菌株用E-test法检测青霉素和头孢曲松的MIC值。结果:95株肺炎链球菌对红霉素、克林霉素高度耐药,耐药率分别为97.9%,96.8%,对左氧氟沙星几乎敏感,未检出耐万古霉素菌株。75株耐苯唑西林菌株用E-test法测试青霉素不敏感率为58.9%(56株),头孢曲松敏感率为98.7%(74株)。ermB基因介导的红霉素耐药菌株92株,占98.9%,mefE基因介导的红霉素耐药仅1株(1.1%)。结论:我院分离的肺炎链球菌耐药严重,PNSP检出率较高(58.9%),对红霉素、克林霉素高度耐药,临床应尽量减少此类药物的经验性用药,依据药敏结果选择抗菌药物进行治疗。