青鳉p53基因克隆、结构分析及同源重组载体构建

应用“Long PCR”技术 ,用 6对 p5 3引物从青胚胎干细胞基因组DNA中扩增出 6个相互重叠的片段 ,其中最大的片段长达 4 5kb ,这 6个PCR片段覆盖了整个 p5 3基因。序列分析表明青p5 3基因长约 8 7kb ,由 11个外显子和 10个内含子组成。结构比较表明 ,青 p5 3基因在大小上与人和小鼠 p5 3基因存在较大差异。青p5 3基因的内含子 1仅为 0 85kb ,而人和小鼠p5 3基因的内含子 1则分别长达 10kb和 6kb ;青 p5 3基因的外显子 3(86bp)明显大于人和小鼠 p5 3基因的外显子 3(2 2bp) ;外显子 4 (170bp)比人 (2 80bp)和小鼠 (2 6 0bp)的外显子 4小 ;内含子 10 (3 5kb)则比人和小鼠内含子 10 (0 7kb和 0 9kb)大得多。用SVTK neo基因作正选择标记基因 ,用SVTK tk基因作负选择标记基因 ,用青 p5 3基因组片段作同源序列 ,构建了鱼类 p5 3基因同源重组载体。将此载体转染青胚胎干细胞 ,并经G4 18和Ganc药物选择后证明上述正、负选择标记基因在干细胞中能够有效表达 ,并提供对G4 18的抗性和对Ganc的敏感性。

吡虫啉的生物效应研究

应用不同的生物材料对新型杀虫剂的生态效应进行了研究。吡虫啉对泽蛙蝌蚪、黑斑蛙蝌蚪及青鱼的急性毒性表明 ,吡虫啉属于低毒农药。蚕豆根尖微核试验结果呈阴性 。

青鳉鱼早期胚胎中外源DNA的复制行为的研究

利用显微注射技术将外源ＤＮＡ与标有生物素的ｄＡＴＰ一起导入处于１细胞期的青鱼（Ｍｅｄａｋａ）受精卵细胞质中，鱼卵在２５℃孵化一天至胚孔封闭期，从胚胎细胞质中提取ＤＮＡ，经分子杂交发现外源ＤＮＡ在胚胎中可进行复制。ＤＮＡ样品再经核酸电镜分析，发现了几种类型的复制分子，并发现多复制叉及成熟前复制现象。由此认为外源ＤＮＡ可以多种方式在青鱼早期胚胎细胞质中进行复制。