NLR VLDL TPP与CABG术后静脉桥血管狭窄类病变的关联性及联合预测价值

目的 探讨中性粒细胞与淋巴细胞比值、极低密度脂蛋白、血栓前体蛋白与冠状动脉旁路移植术后静脉桥血管狭窄类病变的关联性及联合预测分析。方法 将125例行冠状动脉旁路移植术患者根据冠状动脉造影检查结果分为狭窄组70例,非狭窄组55例,比较两组基线资料、中性粒细胞与淋巴细胞比值、极低密度脂蛋白、血栓前体蛋白,采用Pearson积矩相关分析中性粒细胞与淋巴细胞比值、极低密度脂蛋白、血栓前体蛋白与静脉桥血管狭窄程度的关系,采用多元线性回归模型分析冠状动脉旁路移植术后静脉桥血管狭窄类病变的影响因素,绘制受试者工作特征曲线分析各指标预测静脉桥血管狭窄类病变的价值,并比较不同情况中性粒细胞与淋巴细胞比值、极低密度脂蛋白、血栓前体蛋白水平患者静脉桥血管狭窄类病变发生率。结果 狭窄组高脂血症占比、中性粒细胞与淋巴细胞比值、极低密度脂蛋白、血栓前体蛋白均高于非狭窄组,冠状动脉造影距冠状动脉旁路移植时间长于非狭窄组,复查冠状动脉造影狭窄程度高于非狭窄组,术后遵医用药率低于非狭窄组,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。中性粒细胞与淋巴细胞比值、极低密度脂蛋白、血栓前体蛋白与静脉桥血管狭窄程度呈正相关(P<0.01),是静脉桥血管狭窄程度的相关影响因素(P<0.01)。受试者工作特征曲线显示,各指标联合预测静脉桥血管狭窄类病变的曲线下面积值大于单一检测(P<0.01);中性粒细胞与淋巴细胞比值、极低密度脂蛋白、血栓前体蛋白高危患者静脉桥血管狭窄类病变发生率高于低危患者(P<0.01)。结论 中性粒细胞与淋巴细胞比值、极低密度脂蛋白、血栓前体蛋白水平与冠状动脉旁路移植术后静脉桥血管狭窄类病变密切相关,对其发生风险具有一定预测价值,有望从细胞及分子学水平为静脉桥疾病治疗提供新的研究方向。

准分子激光消融术在光学相干断层扫描技术指导下治疗冠状动脉旁路移植术后静脉桥血管狭窄病变

1临床资料 患者女,65岁。因＂发作性胸痛10年＂于2016年12月17日收入河南省人民医院接受治疗。患者10年前因不稳定型心绞痛行冠状动脉造影（coronary artery angiography,CAG）提示＂三支病变＂。

自噬相关基因5下调抑制静脉桥血管狭窄

目的探讨自噬相关基因5(Atg5)在小鼠下腔静脉移植术后静脉桥血管狭窄过程中的作用。方法30只雄性C57BL/6小鼠及20只Atg5^+/-小鼠分为WT假手术组(10只),WT手术组(受体10只,供体10只),Atg5^+/-手术组(受体10只,供体10只)。复制小鼠下腔静脉移植模型。HE染色观察下腔静脉管腔面积,Real-time PCR检测下腔静脉组织中Atg5、LC3 mRNA表达;Westem-Blot检测下腔静脉组织中Atg5、LC3蛋白表达,免疫荧光共染明确平滑肌细胞中LC3表达。结果WT小鼠下腔静脉移植4周后出现管腔狭窄[(4.21±0.32)×10^4μm^2比(1.63±0.15)×10^4μum^2,P<0.05],Atg5[(0.51±0.17)×10^-3比(1.49±0.08)×10^-3]、LC3[(1.9±0.4)×10^-2比(3.8±0.9)×10^-2]mRNA表达均明显升高(均为P<0.05)。与WT小鼠相比,Atg5^+/-小鼠下腔静脉移植4周后Atg5[(0.39±0.05)比(0.16±0.08)]、LC3[(2.17±0.46)比(0.78±0.19)]蛋白表达均明显下降(均为P<0.05),平滑肌细胞中LC3蛋白表达显著下降(P<0.05),管腔狭窄明显减轻[(1.63±0.15)×10^4μm^2比(2.96±0.12)×10^4μm^2,P<0.05]。结论Atg5下调抑制小鼠下腔静脉移植术后静脉桥血管狭窄。

活化转录因子3在再狭窄静脉桥血管中的表达

目的探讨再狭窄静脉桥血管与正常大隐静脉中活化转录因子3(ATF3)的表达以及机械牵张刺激对内皮细胞ATF3表达的影响。方法选择2017年7月首都医科大学附属北京安贞医院因静脉桥血管再狭窄需行二次冠状动脉旁路移植术(CABG)的患者及因冠状动脉粥样硬化性心脏病需行CABG患者各1例,CABG术中收集狭窄的静脉桥血管及患者自身正常的大隐静脉,每例样本分为3份,分别用于制成石蜡切片、制成冰冻切片、提取RNA。应用免疫组织化学法检测再狭窄静脉桥血管与正常大隐静脉血管ATF3的表达,应用实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白质印迹法检测正常人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及机械牵张刺激HUVEC中ATF3的表达。结果经免疫组织化学观察发现,ATF3在再狭窄静脉桥血管比正常人大隐静脉桥血管表达增高,且在内皮层表达明显增高。实时荧光定量聚合酶链反应检测经机械牵张刺激的HUVEC中ATF3表达高于正常HUVEC[(95±4)比(66±6)],差异有统计学意义(P=0.002)。经免疫印迹法检测经机械牵张刺激HUVEC中ATF3表达高于正常HUVEC[(0.43±0.03)比(0.15±0.02)],差异有统计学意义(P<0.001)。结论 ATF3可能在静脉桥血管再狭窄内皮功能失调过程中发挥重要作用。

冠状动脉旁路移植术后大隐静脉桥血管再狭窄机制及防治策略研究新进展

冠状动脉旁路移植术(coronary artery bypass grafting,CABG)是当前医治冠心病最有效的措施之一[1],然而术后10年内静脉桥血管发生再狭窄甚至闭塞的概率高达50%[2],因此评估CABG疗效的最主要目标之一是桥血管的通畅程度。目前国内外CABG采用最多的移植血管是乳内动脉(internal mammary artery,IMA)和大隐静脉(saphenous vein,SV)。

冠状动脉旁路移植术后静脉桥血管通畅率的研究进展

冠状动脉旁路移植术（coronary artery bypass grafting,CABG）是现今治疗冠心病最有效的手术方法之一[1],术后5～10年内约25％～50％的桥血管会发生再狭窄或者闭塞[2],评价CABG疗效的最主要指标之一是桥血管近、远期的通畅率.国内外CABG采用最多的移植血管是乳内动脉（internal mammary artery,IMA）和大隐静脉（saphenous vein,SV）.由于IMA长度受限以及冠心病患者大多为多支冠状动脉病变,所以自体SV仍然是CABG术中最常用的桥血管移植材料[3].如何提高静脉桥血管的远期通畅率已经成为CABG术后的一个研究热点.本文对近年来有关静脉桥血管通畅率的研究做简要综述.

活化转录因子3基因Cas9编辑慢病毒载体的构建及鉴定

目的:构建靶向活化转录因子3(ATF3)在CRISPR/Cas9技术编辑的慢病毒载体。方法:针对ATF3基因设计并合成三条对应的向导(gRNA)序列和一条无意义序列,向导RNA序列与双酶切U6-EF1a-Cas9-FLAG-P2A-EGFP载体链接,DNA测序鉴定重组载体。荧光/绝对定量法测定慢病毒浓度。共转染人微血管静脉内皮细胞(HMEC)后,实时定量荧光PCR检测ATF3mRNA表达,验证HMEC细胞中是否含有ATF3基因及其是否有突变。对照病毒和三个靶点慢病毒分别感染Cas9蛋白稳定株,感染后混合克隆进行抽提基因组DNA,将得到PCR产物进行错配酶法进行酶切,对于筛靶中阳性的PCR产物一组序列与野生型对比。Westernblot检测ATF3蛋白表达,验证转染效果。定量PCR检测ATF3mRNA的改变。结果:测序表明ATF3在Cas9编辑下慢病毒载体构建成功。HMEC倒置荧光显微镜荧光视野和明视野进行对比,感染可达到80%转染率,GFP持续稳定表达。Westernblot结果显示,ATF3蛋白表达有明显下调(P<0.05)。结论:本研究成功构建了ATF3Cas9编辑慢病毒载体,为进一步研究ATF3在静脉桥血管再狭窄中早期内皮功能失调作用机制及基因治疗提供了实验依据。

靶向Egr-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

目的构建靶向人早期生长反应因子(early growth response-1,Egr-1)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体。方法针对Egr-1基因设计并合成1条Egr-1过表达序列和4条干扰序列,过表达序列与双酶切Ubi-MCS-3FLAG载体连接,干扰序列与双酶切hU6-MCS-CMV-EGFP连接,DNA测序鉴定重组载体。共转染人脐静脉血管内皮细胞后(OE-RNAi-1,OE-RNAi-2,OE-RNAi-3,OE-RNAi-4)Western blot检测Egr-1蛋白表达,筛选有效干扰靶点,实时定量荧光PCR检测Egr-1mRNA,验证干扰效果。结果测序表明Egr-1过表达及RNAi慢病毒载体构建成功;Western blot结果显示,OE-RNAi-4组Egr-1蛋白表达抑制率最高(P<0.05);实时荧光定量PCR验证结果显示,OE-RNAi-4组Egr-1mRNA表达受到明显抑制(P<0.05)。结论本研究成功构建了靶向Egr-1基因RNAi慢病毒载体,为进一步研究Egr-1在静脉桥血管再狭窄中早期内皮功能失调作用机制及基因治疗提供了实验依据。