老龄心房颤动犬模型肺静脉肌袖细胞起搏电流在异丙肾上腺素作用下的变化

背景:心房颤动是老年人常见的心律失常疾病,有研究表明肺静脉肌袖细胞起搏电流能增加快速心律失常特别是心房颤动发生的风险。目的:观察异丙肾上腺素对老龄犬肺静脉肌袖细胞起搏电流的作用。方法:选择14只老龄健康犬,7只快速起搏10周制备心房颤动模型,其余未经快速起搏处理的犬作对照。分离各组肺静脉肌袖细胞,利用全细胞膜片钳在电压钳模式下记录起搏电流。结果与结论:在0.1～10.0μmol/L的浓度范围内异丙肾上腺素均使细胞膜起搏电流电流升高,且作用呈现出浓度依赖性,半数有效量为1.7μmol/L(95%可信区间为1.2～2.6μmol/L)。房颤组肺静脉肌袖细胞给予1.0μmol/L异丙肾上腺素时,起搏电流显著增加,在-120mV的测试电位时,使其电流密度升高(P<0.01)。1.0μmol/L异丙肾上腺素使房颤组肺静脉肌袖细胞起搏电流的稳态激活曲线向正方向移动,使半激活电压下降,更接近静息电位,同时也使激活曲线斜率(P<0.01)。结果证实,异丙肾上腺素可能通过升高肺静脉肌袖细胞起搏电流促进心房颤动的发生。

老龄房颤犬模型静脉肌袖细胞分离及起搏电流记录

背景:电生理改变是老化心脏表现的主要特征之一。目的:构建老龄房颤犬模型,观察静脉肌袖细胞动作电位和起搏电流的特征。设计、时间及地点:分组对照动物实验,于2005-03/2007-12在解放军总医院实验动物中心和老年心血管病研究所完成。材料:7～9岁健康杂种老龄犬12只,体质量15～20kg,雌雄兼有。台氏液成分(mmol/L):NaCl135,KCl5.4,CaCl21.8,MgCl21,NaH2PO40.33,HEPES10,葡萄糖10,pH用NaOH调至7.4。方法:取老龄犬6只,快速起搏8周制备房颤模型,余6只犬未经快速起搏处理作对照。分离静脉肌袖细胞,利用全细胞膜片钳在电流钳模式下记录动作电位,在电压钳模式下记录起搏电流。主要观察指标:老龄犬肺静脉肌袖细胞动作电位的特征、起搏电流、起搏电流的Ⅰ～Ⅴ曲线及起搏电流稳态激活的特征。结果:约82.6%的老龄犬静脉肌袖细胞记录到自动除极和自发性动作电位,而未经快速起搏处理犬的细胞约有40%记录到工作心肌动作电位特征。在-120mV时,房颤模型细胞起搏电流的电流密度为(-2.66±0.4)pA/pF,而对照组细胞的电流密度为(-1.24±0.21)pA/pF。从Ⅰ～Ⅴ曲线可见,起搏电流的电流密度具有电压依赖性特征,且病理模型犬的肺静脉肌袖细胞起搏电流电流随超极化电位增加更为明显。在-120mV时,房颤犬静脉肌袖细胞电流的半激活电压为(-84.3±4.9)mV,激活曲线斜率为(+12.1±2.6)mV,而未处理细胞的半激活电压为(-98.0±7.2)mV,激活曲线斜率为(+9.5±1.8)mV,明显向更正的电位方向移动,提示老龄房颤犬静脉肌袖起搏电流更易激活。结论:老龄房颤犬静脉肌袖细胞更易出现自动除极电位,起搏电流的密度更高,起搏电流激活也更容易,提示起搏电流可能参与老年房颤异位起搏的发生。

兔肺静脉肌袖心肌细胞动作电位的特性

目的研究兔肺静脉肌袖心肌细胞(PVC)动作电位的特性,并与左房心肌细胞(LAC)进行比较。方法采用全细胞膜片钳技术,进行电流钳制。用800 pA×8 m s的刺激脉冲连续刺激5次,刺激间隔为1 s。引出并记录动作电位。结果PVC动作电位的幅度与LAC的无显著性差异,但前者具有较长的平台期,因而,动作电位时程(APD)较LAC的明显延长,并可以诱发出延迟后除极(DAD)。另外,PVC与LAC的动作电位均具有刺激次数依赖性,但前者更加明显。在APD延长的基础上,PVC可诱发出第二平台反应,表明其具有产生EAD的明显倾向。结论触发活动可能在肺静脉肌袖致心律失常机制中起重要作用。

兔肺静脉肌袖心肌细胞TRPC3离子流的特性

目的采用TRPC3通道特异性阻断剂证实兔肺静脉肌袖细胞(PVC)与左房心肌细胞(LAC)上存在TRPC3通道,并进行比较,探讨TRPC3通道在由PVC起源的心律失常中可能的作用。方法酶解法分离PVC和LAC,采用全细胞膜片钳制技术,分别记录总背景电流(I BG)。用TRPC3通道特异性阻断剂吡唑类复合2-氨基-3甲基-5-氰基吡啶(Pyr3)确定该离子流中存在I TRPC3。结果研究发现,加入Pyr3灌流后LAC和PVC I BG电流密度均减少,被抑制的离子流部分即为I TRPC3,且PVC I TRPC3电流密度比LAC明显减小(-0.122 5±0.084 8 pA/pF vs-0.330 1±0.086 3 pA/pF,-60 mV,n=10,P<0.05;0.254 8±0.089 8 pA/pF vs 0.670 4±0.124 7 pA/pF,+60 mV,n=10,P<0.05)。结论 PVC和LAC存在TRPC3通道,且两者I TRPC3电流密度的差异与PVC动作电位时程较长有关。

兔肺静脉心肌细胞动作电位及TRPC3类通道电流特性

目的兔心房和肺静脉上的非选择性阳离子通道与TRPC3非常相似,本实验通过对兔肺静脉肌袖心肌细胞(PVC)和心房肌细胞(LAC)动作电位及TRPC3类通道电流特性的研究,进一步探讨TRPC3类通道在早后除极(EAD)中的作用及起源于肺静脉的阵发性房颤的电生理机制。方法采用全细胞膜片钳技术分别记录PVC和LAC的动作电位及非特异性阳离子流,同时加用胰岛素,观察胰岛素对动作电位及电流的影响。结果 PVC动作电位时程较LAC的明显延长,并可以诱发第二平台反应,加用胰岛素后PVC和LAC动作电位时程均明显缩短。通过加用GdCl3,我们在PVC和LAC上可记录到非选择性阳离子流,且PVC的电流密度较LAC的小;而如果我们加用胰岛素,PVC和LAC的电流密度均增加,且PVC的电流密度较LAC增加的少。结论 PVC较LAC的动作电位时程(APD)明显延长,表明其具有产生EAD的明显倾向,进而可能导致快速性心律失常的发生,胰岛素可明显的缩短动作电位时程。PVC的电流密度较LAC的明显减小,PVC和LAC存在的复极离子流的差异构成了两者动作电位差异的基础;胰岛素可使电流密度增加,可初步判定PVC和LAC上存在的TRPC3类通道为TRPC3。