基于Nrf2-HO-1/GPX4信号轴探讨中药靛玉红衍生物E804抑制肺癌A549细胞增殖和迁移的作用机制

目的 探讨中药靛玉红衍生物E804对非小细胞肺癌(NSCLC)系A549细胞增殖和迁移的影响,并阐明Nrf2-HO-1/GPX4信号轴可能的作用机制。方法 以肺癌A549细胞为细胞模型。采用MTT和细胞划痕实验观察0、10μmol/L E804和10μmol/L E804+不同特异性抑制剂(Nec-1、CQ、Z-VAD、DFO、Fer-1和Lip-1)组细胞的增殖和迁移能力;采用DCFH-DA荧光探针法检测0、2.5、5和10μmol/LE804组细胞内活性氧(ROS)含量,比色法检测二价铁离子(Fe^(2+))含量,分光光度法检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量,微量法检测丙二醛(MDA)含量;Western blot法检测0、2.5、5和10μmol/L E804组细胞SLC7A11、Transferrin、GPX4、SLC40A1、Nrf2和HO-1蛋白表达水平。结果 与对照组(0μmol/LE804)比较,2.5、5和10μmol/L E804升高细胞内ROS、Fe^(2+)和MDA水平,降低细胞内GSH含量(P<0.01),同时降低SLC7A11、GPX4、SLC40A1、Nrf2和HO-1蛋白表达水平(P<0.01),升高Transferrin表达水平(P<0.05)。与单独使用10μmol/LE804组比较,细胞凋亡抑制剂(Z-VAD)组和细胞铁死亡抑制剂(DFO、Fer-1和Lip-1)组能够部分逆转E804对A549细胞的增殖和迁移抑制(P<0.01)。结论 E804可抑制A549细胞增殖和迁移,并诱发铁死亡,其机制可能与抑制Nrf2-HO-1/GPX4信号轴有关。

靛玉红衍生物结构与抗肿瘤活性关系预测方程的建立

目的:建立一个方程,用于预测靛玉红衍生物(主要为靛玉红-3′-肟类)的体外抗肿瘤活性。方法:采用经典的二维定量构效关系研究方法,对24个靛玉红衍生物进行计算机模拟与统计分析。结果:得到靛玉红衍生物体外抗肿瘤活性的定量构效方程,且发现,该类靛玉红衍生物的活性与脂水分配系数、偶极矩、总电荷绝对值和最大负电荷呈负相关,与分子体积呈正相关。结论:所得方程能有效预测该类靛玉红衍生物的活性,且对其类似物的设计与改造具有指导意义。

中药靛玉红衍生物E804对肺癌A549细胞增殖、凋亡和分化的影响及其作用机制

目的:探讨不同浓度靛玉红衍生物E804对非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞增殖、凋亡和分化的影响,阐明其可能的作用机制。方法:体外培养A549细胞,分为对照组(0μmol·L^(-1)E804)和不同浓度(2.5、5.0和10.0μmol·L^(-1)) E804组。采用MTT法检测各组细胞增殖率,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力,软琼脂克隆实验观察各组细胞分化及克隆形成能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白和Janus激酶1 (JAK1)/信号转导与转录激因活子3 (STAT3)信号通路相关蛋白表达水平。结果:MTT法,与对照组比较,2.5、 5.0和10.0μmol·L^(-1)E804组细胞增殖率明显降低(P<0.05或P<0.01),并呈时间和浓度依赖性。细胞划痕和软琼脂克隆法,与对照组比较,2.5、5.0和10.0μmol·L^(-1)E804组细胞迁移距离和克隆形成数减少(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组比较,2.5、5.0和10.0μmol·L^(-1)E804组细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组比较,2.5、 5.0和10.0μmol·L^(-1)E804组细胞中B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、磷酸化JAK1 (p-JAK1)和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01),Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (cleaved caspase-3)和裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9 (cleaved caspase-9)蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。结论:E804可抑制A549细胞体外增殖、迁移和分化,并诱导其凋亡,其机制可能与下调JAK1/STAT3信号通路相关蛋白表达有关。

靛玉红衍生物抗结肠癌的作用机制研究

研究靛玉红衍生物FT2对HCT-116结肠癌细胞的作用机制研究。方法:通过细胞毒性研究MTT实验测定其对结肠癌细胞的抑制效果。以0.5 μg/ml以及1.0 μg/ml的FT2作用于细胞16 h后,检测相关Ros、Fe2+、GSH、MDA含量的变化,并通过WB实验对铁死亡相关蛋白Xc-表达含量进行分析。结果:FT2干预后,HCT-116细胞中Ros、Fe2+、MDA含量均有上升,而GSH被消耗减少,而且FT2可以降低细胞中Xc-蛋白含量的表达,进而引起铁死亡。结论:我们的数据表明FT2可诱导结肠癌细胞铁死亡,并在Xc-相关通路中发挥作用。

靛玉红衍生物PHⅡ-7通过抑制c-fos表达抗乳腺癌耐药株MCF-7/ADR增殖

目的:探讨靛玉红衍生物PHⅡ-7抗乳腺癌耐药株MCF-7/ADR增殖作用的初步机制。方法:MTT法检测PHⅡ-7的体外杀伤活性;RT-PCR法、Western blot法检测基因、蛋白表达水平;构建干扰c-fos的短发夹RNA真核表达载体,转染MCF-7/ADR细胞,并建立稳定转染的细胞系;采用细胞计数法绘制生长曲线探讨c-fos表达下调对乳腺癌细胞增殖的影响。结果:PHⅡ-7剂量依赖性地抑制乳腺癌敏感株MCF-7及耐药株MCF-7/ADR增殖;c-fos在耐药株MCF-7/ADR表达明显高于敏感株MCF-7;PHⅡ-7明显抑制c-fos的表达;shRNA显著抑制了c-fos蛋白表达,细胞增殖也被显著抑制。结论:靛玉红衍生物PHⅡ-7浓度依赖性地抑制乳腺癌耐药株MCF-7/ADR增殖,其作用可能与抑制原癌基因c-fos有关。

6BIO通过JAK1-STAT3信号转导通路抑制小鼠B16恶性黑色素瘤细胞的增殖

目的研究（2’Z，3’E）-6-溴靛玉红-3’-肟衍生物（6BIO）对小鼠B16恶性黑色素瘤细胞增殖能力的影响。方法免疫组化法检测6BIO处理不同时间（24、36、48h）后B16细胞增殖指数Ki67的表达；Western blot法检测6BIO处理不同时间（1、6、12、24h）后B16细胞中磷酸化JAK激酶1蛋白（p-JAK1）和磷酸化信号转录子和转录激活子3蛋白（p-STAT3）的表达。结果6BIO处理不同时间后B16细胞增殖指数Ki67的表达均呈时间依赖性降低（P〈0．01）。6BIO能够时间依赖性抑制B16细胞中p-JAK1和p—STAT3蛋白的表达（P〈0．01）。结论6BIO能够通过抑制JAK1-STAT3信号转导通路抑制小鼠B16恶性黑色素瘤细胞的增殖。

新合成的7-氮杂异靛蓝抑制A549细胞增殖的作用及可能机制

研究新合成的N^1-(正-丁基)-7-氮杂异靛蓝(N^1-(n-butyl)-7-azaisoindigo,7-AI-b)抑制人非小型肺癌细胞A549的增殖,初步探索其抗肿瘤的机制。以不同浓度的7-AI-b作用于A549,MTT检测与相差显微镜观察相结合,分析7-AI-b对细胞增殖的影响;MDC染色和Western印迹检测自噬标志蛋白(LC3)的表达,研究药物处理后细胞是否发生了自噬。PI单染,流式检测细胞周期的变化;Fluo-3-AM荧光探针检测细胞中Ca^(2+)的含量。结果发现,7-AI-b以时间和剂量依赖性方式抑制细胞的增殖;MDC染色后,自噬小泡增多,LC3的总表达量增加,且由LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转变量升高。流式细胞检测发现细胞被阻滞在G_0/G_1期;同时,药物处理后,细胞内Ca^(2+)出现了超载。由此,新合成的7-AI-b有很好的抑制肿瘤细胞增殖的作用,其机制与引起细胞周期阻滞、诱导细胞自噬有关,胞内Ca^(2+)超载也参与了该作用。