非传统型前折叠束RPB5交互因子在肝癌HepG2细胞中的生物学功能及其分子机制

目的 探讨非传统型前折叠束RPB5交互因子（URI）对肝癌HepG2细胞生物学功能的影响及其分子机制.方法 设计并构建URI真核表达和URI shRNA干扰载体,转染肝癌HepG2细胞并筛选稳定转染细胞株.采用CCK-8实验和软琼脂克隆形成实验检测各组细胞的增殖能力和体外锚定非依赖性生长的能力,采用流式细胞仪检测γ射线照射后各组细胞的细胞周期和细胞凋亡,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达量.结果 成功构建了URI表达质粒和干扰质粒,并获得相应的稳定转染细胞株.HepG2组、pCDNA3.1-URI-HepG2组和pGPU6-URIi-HepG2组细胞转染第7天相对于第1天的增殖促进率分别为（588.78±32.12）％、（959.33±58.80）％和（393.93±39.70）％,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.HepG2组、pCDNA3.1-URI-HepG2组和pGPU6-URIi-HepG2组的克隆数分别为（43±7）个、（85±5）个和（20±4）个,差异有统计学意义（P＜0.05）.γ射线照射后,pCDNA3.1-URI-HepG2组细胞凋亡和G2/M期阻滞较HepG2组明显降低（P＜0.05）,pGPU6-URIi-HepG2组细胞凋亡和G2/M期阻滞较HepG2组明显升高（P＜0.05）.Western blot结果显示,HepG2细胞的URI、Bax和Bcl-2蛋白相对表达水平分别为0.92±0.03、1.11±0.13和0.82±0.01,pCDNA3.1-URI-HepG2组细胞的URI、Bax和Bcl-2蛋白相对表达水平分别为1.79±0.12、0.48±0.01和2.20±0.30,pGPU6-URli-HepG2组细胞的URI、Bax和Bcl-2蛋白相对表达水平分别为0.50±0.04、1.52 ±0.20和0.38±0.01.pCDNA3.1-URI-HepG2组细胞凋亡相关蛋白Bax表达水平低于HepG2组,Bcl-2蛋白表达水平高于HepG2组;pGPU6-URIi-HepG2组细胞Bax蛋白表达水平高于HepG2组,Bcl-2蛋白表达水平低于HepG2组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 URI能够通过促进细胞增殖和抵抗细胞凋亡来促进肝癌细胞的生长.而干扰URI表达后,肝癌细胞的增殖能力被抑制,细胞抵抗γ射线照射的能力降低,URI可能成为肝癌治疗的新靶点。

URI1蛋白生物信息学分析及在人体组织中的表达

目的分析人非经典前折叠素RPB5相互作用因子1(URI1)蛋白的特性、结构和变异体,观察URI1蛋白在人组织中的表达。方法通过多种网络分析工具,预测和分析URI1的基本特性及结构。用人组织微阵列免疫组化染色方法检测其在多种组织/细胞中的表达。结果 URI1编码1个535个氨基酸的蛋白质,该蛋白质性质不稳定,无跨膜片段,N末端无信号肽,非分泌型蛋白质,其mRNA在组织中广泛表达。URI1具有11个潜在的泛素化位点,其中6个为高度可信,5个为中度可信。有48个潜在的磷酸化位点(35个在丝氨酸位、11个在苏氨酸位、2个在酪氨酸位)。在第287氨基酸位有一糖基化位点,在第291、371氨基酸位也可能发生糖基化修饰,未发现乙酰化位点。蛋白质结构预测α螺旋(H)占39.63%,N端具有1个PFD功能域。URI1在多种组织/细胞广泛表达并存在明显差异表达,与基于高密度微阵列技术的BioGPS mRNA表达谱数据吻合。结论用生物信息学技术预测了URI1蛋白的结构和功能,为URI1蛋白的相关研究提供了信息。

URI的病理生理学作用研究进展

非传统型前折叠素RPB5交互因子(URI)作为前折叠蛋白家族的成员,广泛参与生物体内转录调节、凋亡调控及保护DNA完整性等多种生理病理学过程。它的基因表达、调控因素、功能以及与疾病的关系,尤其是它在肿瘤发生发展过程中的重要作用广受关注。而URI抗辐射作用的发现,也为研究辐射相关疾病提供了新的思路和设想。作者主要对URI的病理生理学作用研究进展作一综述。

URI在胃癌组织的表达及对顺铂诱导的胃癌细胞凋亡的影响

目的:探讨癌蛋白非经典前折叠素RPB5相互作用因子(unconventional prefoldin RPB5 interactor,URI)在胃癌组织中的表达及其临床意义,分析URI对顺铂诱导的胃癌细胞凋亡的影响。方法:采用免疫组化辣根过氧化物酶法检测胃癌组织芯片中URI的表达,并分析其与临床特征的相关性;体外培养胃癌MGC-803细胞和SGC-7901细胞,运用Hiperfect转染试剂分别在两类胃癌细胞株中转染URI siRNA片段构建URI基因敲低细胞株,并用荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证敲低效果;将细胞分为空白组、siRNA URI干扰组以及顺铂诱导下的未转染组、无关序列组和siRNA URI干扰组,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:胃癌组织芯片检测结果显示,胃癌组织胞质中URI的表达量显著高于癌旁组织(P<0.05),胞核中URI的表达量虽比癌旁组织增高,但无显著性差异。URI的表达量与胃癌患者生存期、临床分期等无显著相关性。URI基因敲低后两类细胞株顺铂诱导的凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:URI可能作为一种凋亡抑制因子在胃癌的发生中起作用。