基于数据非依赖型采集蛋白质组学分析劳力性热射病大鼠血浆蛋白的变化

目的采用数据非依赖型采集(DIA)蛋白质组学技术分析劳力性热射病(EHS)大鼠血浆蛋白表达的变化。方法取SPF级雄性SD大鼠10只,随机分为正常对照组(CON组,n=5)和EHS组(n=5),EHS组造模前1周完成温度遥测胶囊植入术,术毕恢复7 d后大鼠在人工气候舱内(温度40℃,相对湿度70%)跑步,监测核心温度达到42.5℃时视为发生EHS。停止跑步后采血进行DIA定量蛋白质组学分析。结果以表达倍数>1.5倍且P<0.05为筛选标准,共筛选出625个上调差异表达蛋白(DEPs)和8个下调DEPs。亚细胞定位注释表明,DEPs主要位于细胞外和细胞质;基因本体论(GO)注释显示,DEPs分子主要功能为蛋白质结合;京都基因与基因组百科全书(KEGG)注释显示,DEPs主要参与免疫反应、能量代谢等信号通路;同源蛋白簇(COG)注释显示,DEPs主要发挥翻译后修饰、蛋白质周转和伴侣功能。蛋白结构域富集分析显示,DEPs结构域主要集中在免疫球蛋白结构域、血小板反应蛋白1型结构域和补体Clr样EGF样结构域;GO富集分析显示,DEPs主要参与血液凝固和纤维蛋白凝块形成、纤溶酶原激活、急性炎症反应的调节等过程;KEGG富集分析显示,DEPs主要参与补体和凝血级联、免疫和细胞黏附分子等信号通路;Reactome通路富集分析显示,DEPs主要参与先天免疫系统、中性粒细胞脱颗粒和血小板活化等信号通路;蛋白互作网络分析发现,参与补体和凝血级联通路的蛋白网络互作较多,且以上调蛋白Fgg、Plg和Serpinc1为主。结论EHS明显改变大鼠血浆中蛋白表达谱,主要涉及免疫系统异常激活、炎症反应失控和凝血功能紊乱的信号通路。

D-最优混料设计优化格列吡嗪pH非依赖型缓释片的处方

目的通过D-最优混料设计优化格列吡嗪pH非依赖型缓释片的处方。方法以HPMC K4M、HPMC K100LV、MgO、乳糖、无水Ca HPO4的用量为影响因素,分别以缓释片在2、8、24 h的药物累积释放率,在pH 6.8及pH 1.2溶出介质中释药行为的相似性(f2)为评价指标,选用最佳的数学模型定量描述评价指标和影响因素之间的关系;以设定的目标值,通过D-最优混料设计试验预测最优处方,再对最优处方进行验证。采用不同的释药模型对体外释药数据进行拟合,确定药物释放的机制;采用酸碱指示剂法表征缓释片内部pH值。结果数学模型拟合及回归分析结果表明,5个影响因素和4个指标之间存在可信的定量关系;优化处方的体外释放的实验值与预测值经验证非常接近,误差在可接受范围内(指标Y1除外)。优化处方制得的缓释片,药物释放不受pH影响;药物释放机制由扩散与骨架溶蚀共同作用;缓释片内部pH表征结果表明,缓释片内部能在较长时间保持pH>6.2的水平。结论 D-最优混料设计可用于格列吡嗪pH非依赖型缓释片处方的优化,所建立的数学模型具有准确的预测性。

香芹酚对雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞株的凋亡诱导作用及其分子机制

目的:探讨香芹酚(carvacrol,CV)对雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞株的抗增殖、诱导凋亡作用及相关分子机制。方法:采用不同浓度的CV(0、10、20、40、80、100μmol/L)体外处理DU145细胞24 h或48 h;采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同浓度CV对DU145细胞增殖的抑制率;采用Hoechst染色法及流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)检测凋亡相关基因及蛋白表达水平。结果:CV对前列腺癌DU145细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈剂量及时间依赖性;Hoechst染色法及Annexin V-FITC/PI双染法检测结果显示,不同浓度香芹酚处理DU145后,细胞凋亡程度及比率均明显增加;RT-PCR及Western blotting检测结果显示,随着CV浓度的增加,DU145细胞中Bcl-2表达水平降低,而Bax及Caspase3表达水平升高,细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)在细胞质中的释放增加(P<0.05)。结论:CV能够抑制DU145细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制与调控Bcl2家族蛋白和Caspase3的表达以及Cyt C的释放等有关,CV在雄激素非依赖型前列腺癌的治疗中具有潜在的应用价值。

非依赖型糖尿病全血低切变率粘度值的临床意义

目的:为了探讨非依赖型糖尿病全血低切变率粘度值测定的临床意义。方法:对91例非依赖型糖尿病血液流变学低切率粘度值进行了检测,并对其结果及形成机制进行了分析讨论。结果:91例非依赖型糖尿病低切变率粘度值和对照组相比有显著性差异,p<0．01。结论:非依赖型糖尿病全血低切变率粘度增高,可造成微血管循环障碍,是非依赖型糖尿病易形成心梗、脑梗及其他微血管病的一种重要因素。

低剂量沙利度胺联合DP方案治疗雄激素非依赖型前列腺癌

目的观察低剂量沙利度胺联合DP方案治疗雄激素非依赖型前列腺癌的临床疗效及毒副反应。方法 36例雄激素非依赖型前列腺癌患者随机分为2组,每组18例。治疗组给予低剂量沙利度胺联合DP方案,对照组仅给予DP方案治疗。治疗后评价疗效及毒副反应。结果治疗组与对照组中位生存期分别为20.3个月、17.5个月(P<0.05)。结论低剂量沙利度胺联合DP方案治疗雄激素非依赖型前列腺癌能延长患者生存期。

钙非依赖型磷脂酶A_(2)介导心肌缺血再灌注损伤

目的:探讨钙非依赖型磷脂酶A_(2)(Ca^(2+)-independent PLA_(2),iPLA_(2))在小鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法:采用CRISPR方法构建iPLA_(2)基因敲除(iPLA_(2)^(-/-))小鼠,通过结扎C57BL/6JNifdc小鼠的左冠状动脉前降支建立心肌缺血再灌注模型,采用蛋白质印迹法检测iPLA_(2)蛋白的表达;全自动生化分析仪检测血清心肌酶的活性;间接免疫荧光标记法检测CD68的表达。结果:野生型小鼠心肌缺血再灌注中,缺血45 min再灌注3 h时iPLA_(2)蛋白的表达最高。与野生型心肌缺血再灌注小鼠比较,iPLA_(2)^(-/-)小鼠心肌缺血再灌注损伤得到改善,表现为血清乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶的漏出减少和CD68阳性细胞数减少。结论:iPLA_(2)蛋白的高表达是小鼠心肌缺血再灌注损伤的重要原因,iPLA_(2)可能是治疗心肌缺血再灌注损伤的潜在靶点。

烤瓷冠修复对非依赖型糖尿病患者牙周状况的影响

目的:研究非依赖型糖尿病患者经牙周基础治疗后,进行烤瓷冠修复对牙周情况的影响。方法:选择非依赖型糖尿病与非糖尿病患者各一组,经牙周基础治疗,对比两组在烤瓷冠修复前、修复后半年及1年的口腔菌斑指数(PLI)、牙龈指数(GI)、探诊出血指数(BI)、探诊深度(PD)和临床附着丧失(AL)5项指标。结果:统计学分析,两组病人牙周情况在修复前、修复后半年及1年均无显著性意义。结论:经良好的牙周基础治疗与口腔健康维护,烤瓷冠修复对糖尿病患者牙周情况影响甚微。

非胰岛素依赖型糖尿病患者对低血糖认知现状调查及影响因素分析

目的通过调查非胰岛素依赖型糖尿病患者对于低血糖认知情况,为医务人员给本型糖尿病患者精准制订健康教育计划及落实健康教育措施提供科学依据。方法采用自行设计的“非胰岛素依赖型糖尿病患者低血糖认知情况问卷”,对2020年6—8月于某中医药大学第一附属医院内分泌科住院的84例非胰岛素依赖型糖尿病患者进行面对面的问卷调查,其中80例问卷应答有效。结果80例患者对低血糖相关知识,认知相对不足。性别、文化程度、低血糖病史是2型糖尿病患者低血糖认知的影响因素(P<0.05)。结论临床上应为糖尿病患者制订全面、个性化的健康教育计划,进行低血糖的预防、临床表现、治疗护理、应急处理等多方面的健康知识宣教,以避免或降低低血糖发生率。并做到发生低血糖后,能及时识别并采取有效措施,降低低血糖对患者造成的伤害,提高患者的生活质量。

2-DG对雄激素非依赖型前列腺癌细胞多西紫杉醇化疗敏感性的作用

目的探讨2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）对多西紫杉醇（Doc）诱导雄激素非依赖型前列腺癌PC3和DU145细胞凋亡的增敏作用及其可能的机制。方法采用MTr法检测Doe与2-DG单用或合用对细胞增殖的抑制作用，计算q值反映联合用药效果；流式细胞技术（FCM）检测细胞凋亡率；ATP检测试剂盒检测细胞内ATP含量的变化；免疫印迹Western印迹技术检测泛素蛋白酶体系统（UPS）功能的内源性蛋白ubiquitinatedprotein（Ub）、hspT0的表达。结果2-DG能抑制PC3及DU145细胞的增殖，呈剂量、时间依赖性，但诱导凋亡作用不明显；Doc0．1、0．5、2．5nmolfL对PC3细胞及DU145细胞作用48h的增殖抑制率分别为10．71％、25．32％、56．46％及12．28％、23．94％、63．43％。联用2-DG1．0g／L后增殖抑制率为：27．15％、58．74％、87．95％及29．53％、59．41％、90．48％，Doc与2-DG联用后可明显增加其抑制率，两药有协同作用（q值均〉1．15）；Doc0．5nmol／L与2-DG1．0g／L联合作用PC3细胞及DUl45细胞48h的凋亡率为：46．49％及53．64％，明显高于Doc0．5nmol／L单独作用的凋亡率：21．30％及18．92％（均P〈0．05）；2-DG1．0g／L分别作用PC3和DU145细胞0、12、24、48、72h后，ATP检测试剂盒测ATP相对浓度为13．75、11．23、10．19、9．81、9．02和15．00、12．59、11．38、10．54、10．37；同时Western印迹检测发现ub及HspTO蛋白出现聚集。结论2-DG可增强雄激素非依赖型前列腺癌细胞对Doc化疗的敏感性；其机制可能与下调细胞内ATP浓度导致蛋白酶体功能抑制有关。

钙非依赖型磷脂酶A_2对过氧化氢诱导胰岛微血管内皮细胞凋亡的影响

目的用过氧化氢(H_2O_2)诱导大鼠胰岛微血管内皮细胞(IMECs)凋亡,观察钙非依赖型磷脂酶A_2(iPLA_2)对其凋亡的影响。方法 siRNA技术抑制IMECs iPLA_2表达,DNA ladder法检测H_2O2诱导后的DNA片段,Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡率,DIOC_6(3)染色检测细胞线粒体膜电位。结果 (1)siRNA-iPLA_2可明显抑制IMECs内iPLA_2 mRNA的表达。(2)H_2O_2诱导后细胞DNA片段化程度随诱导时间的增加而增多,抑制iPLA_2表达后细胞的梯状条带明显增亮。(3)干扰组和未干扰组、干扰阴性对照组相比凋亡率明显升高(P均<0.01)。(4)与未干扰组比较,干扰组细胞线粒体膜电位明显下降(P<0.1)。结论抑制iPLA_2表达可促进H_2O_2诱导的IMECs凋亡。

沉默钙非依赖型磷脂酶A2β基因对间歇性高糖诱导胰岛微血管内皮细胞凋亡的影响

目的 通过小分子干扰（siRNA）技术沉默大鼠胰岛微血管内皮细胞（IMECs）的钙非依赖型磷脂酶A2（iPLA2）基因,研究不同葡萄糖浓度对IMECs iPLA2表达的影响及其与细胞凋亡之间的关系.方法 通过分离纯化大鼠胰岛,获取IMECs细胞,采用随机数余数分组法将其分为正常糖组（5 mmol/L）、恒定高糖组（28 mmol/L）及间歇高糖组（每24小时轮换培养于5mmol/L或28 mmol/L葡萄糖）;通过实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测葡萄糖浓度分别为恒定的5 mmol/L、28 mmol/L以及每24小时轮换的5 mmol/L或28 mmol/L培养条件下的IMECs iPLA2的基因表达;合成iPLA2的RNA干扰序列并转染至IMECs中,通过RT-PCR验证其是否转染成功;采用细胞DNA片段化检测和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V/PI）流式细胞仪检测不同葡萄糖浓度条件下IMECs的凋亡.组间两两比较采用LSD检验,凋亡率采用随机区组设计的两因素ANOVA分析.结果 RT-PCR检测显示各组细胞iPLA2基因表达逐渐减弱,依次为1.90±0.23、0.90±0.05及0.23±0.03,且各组间差异有统计学意义（P＜0.05）.成功合成并转染iPLA2 siRNA后,IMECs间歇性葡萄糖培养组较正常糖组及恒定高糖组DNA片段化更为明显,间歇高糖组流式细胞凋亡率较正常糖组升高,差异有统计学意义（44.9±2.7比3.1±1.0,P＜0.05）.结论 间歇性高糖环境可抑制IMECsiPIA2基因表达,且通过小分子干扰技术抑制iPLA2基因表达能够促进细胞的凋亡,提示iPLA2表达减弱可能参与了间歇性高糖诱导的IMECs凋亡过程.

尿白蛋白指数对非胰岛素依赖型糖尿病监测的实用价值

如何简便地对非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)患者的病情及早期肾功能损害进行估价,从而指导治疗,是临床研究课题。本文应用尿白蛋白指数(Albuminindox·AI),试就其在这一方面的临床意义进行评价,兹报告如下:

应用于蛋白质组学的数据非依赖型质谱采集方法及相关算法研究

蛋白质组学研究中的数据非依赖型(Data;Independent;Acquisition;DIA)质谱采集方法;是指质谱在采集样品的二级质谱图时,按照设定的方法,采集所有母离子的碎片信息,而不是依赖与先前采集的数据进行母离子的挑选。与传统的数据依赖型(Data Dependent Acquisition,DDA)采集模式相比,DIA方法具有重复性好,蛋白质覆盖率高,定量准确性高等特点。基于这些特点,DIA方式正越来越多的受到重视。由于DIA方法采集到的数据,没有直接的母离子-子离子对应关系,因此,相较于DDA方法的数据处理流程,其数据处理流程更复杂,面临的问题也更多。基于此,对目前应用于DIA模式下的质谱数据采集方法和相应的数据处理算法进行了研究。

木糖醇治疗非胰岛素依赖型糖尿病121例

用木糖醇治疗121例非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)患者,结果表明有较好的降血、尿糖及糖化血清蛋白的效果。降血糖显效率为54.5％(66/121),有效率达84.3％(102/121),显效率高于D860对照组,有效率两组间无显著差异。并发现木糖醇具有较好的护肝降血清转氯酶作用。日剂量37.2g,连服21天,未发现明显毒副作用,仅见10％左右患者于服药第1周内出现胃肠道反应,主要表现为渗透性腹泻、上腹不适、便次增多、恶心等,继续服用都适应性自愈。结果提示,木糖醇可作为NIDDM的一种辅助降糖药,特别适合于轻、中型及合并有轻度肝功异常和便秘或伴肥胖的NIDDM患者,对于重型NIDDM患者可与其它降糖药物联合应用。

血清尿酸水平与非胰岛素依赖型糖尿病患者发生脑梗死有关

目的 探讨血清尿酸水平与非胰岛素依赖型糖尿病 (NIDDM)患者发生脑梗死的关系。方法 对正常人组、非NIDDM脑梗死组、NIDDM无脑梗死组、NIDDM脑梗死组 (全部受试者无肾病 )进行血清尿酸、肌酐、血脂、纤维蛋白原等测定。结果 NIDDM脑梗死组血清尿酸水平明显高于其他三组 (P <0 0 1) ,经多因素Logistic回归分析 ,OR =1 93,OR 95 %CI为 1 2 9～ 2 83。结论 血清尿酸水平升高是NIDDM患者发生脑梗死的独立危险因素之一。

非胰岛素依赖型糖尿病危险因素的研究

在沈阳市九家医院选择了６７例符合诊断标准的Ⅱ型糖尿病病人，并在同一医院１∶１选择性别相同，年龄在±３岁的非糖尿病病人作为对照，经条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ分析，结果表明：糖尿病组在家族史、肥胖、嗜甜食等１４个因素明显高于对照组，提示这些因素在糖尿病的发生中可能起重要作用。

常见型非胰岛素依赖型糖尿病患者的葡萄糖激酶基因分子扫查

对３０例起病于４５岁或以前及／或伴糖尿病家族史的中国人常见型非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者，进行葡萄糖激酶基因（ＧＣＫ）编码区及拼接区分子扫查。就扫查中发现的突变／变异，进一步在５６例ＮＩＤＤＭ者及１３４例非糖尿病患者中筛查，确认其频率。结果表明：①分子扫查未见ＧＣＫ编码区及拼接区突变，提示此类突变不是中国人常见型ＮＩＤＤＭ主要病因。②中国人常见型ＮＩＤＤＭ中，尤其是起病早及伴有明显糖尿病家族史者，可伴ＧＣＫ内含子１ｂ变异，此种变异未见于非糖尿病患者（４．７％比０％，Ｆｉｓｈｅｒ确切Ｐ值＝０．０２２）。此变异是否影响ＧＣＫ表达尚待阐明。

农村非胰岛素依赖型糖尿病危险因素的病例对照研究

目的 了解农村非胰岛素依赖型糖尿病的危险因素 ,为社区干预对策的制定提供依据。方法 对 10 9例农村非胰岛素依赖型糖尿病 (NIDDM )患者进行 1∶2配比病例对照研究。结果 条件Logistic回归分析显示 :糖尿病家族史、体重超重、高血压史、喜荤食是NIDDM的危险因素 ,OR值分别为14 96、2 16、2 47、2 43。各因素的人群病因分值分别为2 4 74%、2 8 0 5 %、13 12 %、17 78%。结论 应加强对该人群NIDDM的干预工作 ,减少其危险因素或降低危险因素的程度 。