人参对胃癌SGC-7901侧群细胞裸鼠移植瘤生长及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨人参对胃癌SGC-7901侧群(SP)细胞裸鼠移植瘤生长及Bcl-2、Bax表达的影响。方法分选SP和非侧群(NSP)细胞;熬制人参汤剂,制备人参含药血清;Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax表达;建立裸鼠移植瘤模型,绘制瘤体生长曲线,计算抑瘤率;免疫组化法检测瘤体Bcl-2、Bax的表达。结果 SP细胞生理盐水(NS)组移植瘤体积明显大于NSP细胞NS组(P<0.05),NS组移植瘤体积明显大于相应人参组,差异有统计学意义(P<0.01),SP细胞人参组移植瘤体积与NSP细胞人参组差异无统计学意义;SP组和NSP组人参的抑瘤率分别为43.04%、31.55%;Western blot及免疫组化显示人参可抑制移植瘤Bcl-2、诱导Bax的表达,与相应NS组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 SP细胞的成瘤能力较NSP细胞强,人参可以抑制裸鼠移植瘤的生长,机制可能与诱导细胞凋亡相关。

K562细胞株侧群细胞中部分白细胞分化抗原的表达

背景:白血病侧群细胞表型的研究对于理解肿瘤细胞的异质性和起源、分子标记和靶向治疗等都有积极意义。目的:鉴定人慢性粒细胞白血病细胞株K562中是否存在侧群细胞,并观察侧群细胞亚群与非侧群细胞亚群中部分白细胞分化抗原的表达差异。方法:采用流式细胞术检测K562细胞株中是否存在侧群细胞;并进一步分析K562侧群细胞和非侧群细胞两亚群间CD34+、CD34+CD38-、CD34+CD38+、HLA-DR+细胞的表达情况。结果与结论:经Hoechst33342染色,流式细胞仪分析结果显示在K562中存在侧群细胞,这部分细胞比例少,为(2.7±0.5)%;统计学分析侧群细胞和非侧群细胞亚群中CD34+、CD34+CD38-细胞表达率差异有显著性意义,而CD34+CD38+细胞表达率和HLA-DR+细胞表达率差异均无显著性意义;侧群细胞和非侧群细胞相比在分化抗原表达上有异质性。

青蒿素对胃癌SGC-7901侧群细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的:研究青蒿素对胃癌SGC-7901侧群(side population,SP)细胞裸鼠移植瘤以及相关凋亡蛋白的影响。方法:应用流式细胞术分选出SP细胞和非侧群(non-side population,NSP)细胞;取裸鼠20只,随机分为SP细胞生理盐水(NS)组、SP细胞青蒿素组、NSP细胞生理盐水(NS)组、NSP细胞青蒿素组。建立SP、NSP细胞裸鼠移植瘤模型,分别予以青蒿素、生理盐水灌胃,每天1次,连续32 d,并测量瘤体长短径,计算瘤体体积,绘制移植瘤生长曲线;称取瘤体重量,计算抑瘤率;采用免疫组化技术检测各肿瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达。结果:SP细胞、NSP细胞生理盐水组移植瘤体积明显大于SP细胞、NSP细胞青蒿素组(P<0.05);NSP细胞NS组移植瘤体积小于SP细胞NS组(P<0.05);SP细胞及NSP细胞组青蒿素的抑瘤率分别为53.35%、47.09%。免疫组化结果可见青蒿素可诱导移植瘤中Bcl-2的表达,抑制Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达;与生理盐水组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NSP细胞的成瘤能力弱于SP细胞;青蒿素能够抑制裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与诱导细胞凋亡相关。

EGFR抑制剂对人结肠癌细胞株HT29中CD44^+细胞及侧群细胞作用的研究

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂对人结肠癌细胞株HT29中CD44^+细胞及侧群(SP)细胞的作用机制。方法应用Hoechst33342染色、流式细胞仪检测HT29中CD44^+细胞以及SP细胞比例和成瘤性,并对不同浓度EGFR抑制剂吉非替尼作用后球囊形成及SP细胞比例、不同化疗药物处理后CD44^+细胞比例进行分析与比较。结果空白对照组HT29中SP细胞比例为(3.82±0.08)%,经维拉帕米阻断后降为(0.34±0.03)%,吉非替尼10、15μmol/L作用48h后HT29中SP细胞比例明显降低(均P<0.01),5-氟尿嘧啶(5-FU)作用48h后SP细胞比例变化不大(P>0.05)。与空白对照组比较,吉非替尼7.5、10、15μmol/L作用24、48h后CD44^+细胞比例均明显降低(均P<0.05);且随着吉非替尼的浓度增大,CD44^+细胞比例逐渐降低(P<0.05)。与空白对照组比较,多烯紫杉醇、顺铂作用24、48h后CD44^+比例均明显增大(均P<0.05)。随着时间延长,加入不同浓度的吉非替尼对球囊形成均具有抑制作用。结论 EGFR抑制剂对人结肠癌细胞株HT29中CD44^+细胞及SP细胞具有生长抑制作用,且可抑制球囊形成。

顺铂在喉肿瘤细胞转化为干细胞样肿瘤细胞作用的初步探讨

目的:探讨喉癌Hep-2细胞株经流式分选后的非侧群细胞经化疗药物顺铂诱导转变为干细胞样肿瘤细胞的可能机制。方法:喉癌Hep-2细胞株经流式细胞仪荧光活化细胞分选系统分选后,获得的非侧群分别加入头颈部常用化疗药物——顺铂(实验组)和生理盐水(对照组)培养48h,再次上流式细胞仪检测两组侧群细胞比例;并通过RT-PCR及Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测两组细胞的干细胞样标记β-catenin、notch-1的基因和蛋白的表达情况。结果:实验组非侧群细胞经顺铂(终浓度1μg/ml)作用48h后,侧群细胞比例为(17.16±0.18)%,对照组则为(10.05±1.20)%,两组差异有统计学意义(t=5.844,P<0.01)。荧光定量RT-PCR示经顺铂处理实验组的β-catenin、notch-1mRNA较对照组显著增多;Western blot示实验组细胞中β-catenin、notch-1蛋白表达量较对照组显著增加(t=5.155,P=0.031;t=5.977,P=0.004)。结论:非侧群细胞经化疗药物顺铂诱导后可分化为干细胞样肿瘤细胞。其可能机制是通过wnt/β-catenin、notch转导通路异常诱导非侧群细胞转化为干细胞样肿瘤细胞。