一例混合诺如病毒感染的非典型肠致病性大肠埃希菌鉴定与分析

目的对1例混合感染诺如病毒食源性急性胃肠炎患者的非典型肠致病性大肠埃希菌(aEPEC)进行病原检测分析,为疾病防治提供基础资料。方法对患者粪便标本开展诺如病毒核酸检测,并进行沙门菌、副溶血性弧菌、致泻大肠埃希菌和志贺菌的分离培养和鉴定,对分离到的菌株进行毒力基因分型鉴定、药敏试验及全基因组测序分析。结果该患者检测到aEPEC和GⅡ型诺如病毒,药敏试验显示该菌株对氨苄西林、氨苄西林-舒巴坦、四环素、链霉素均耐药。菌株染色体大小为4.13 Mbp,GC含量50.7%,N50为187 kb,contig 77个。预测编码蛋白质基因4540个、tRNAs 69个、rRNAs 3个、tmRNAs 1个,为ST4119型。经数据库比对,该菌株存在197个毒力基因、55个耐药基因,β内酰胺类、四环素类和氨基糖苷类的耐药表型与耐药基因携带情况一致。并与挪威GCF_002951855.1株具有较高的序列相似性。结论该患者可能由于aEPEC和诺如病毒混合感染导致腹泻,且aEPEC的基因分析和药敏实验均提示存在多种抗生素耐药,建议在食源性疾病监测中开展多病原筛查技术以提高检测的精确度和可靠性。

福建省非典型肠致病性大肠埃希菌的分子特征研究

目的研究福建省非典型肠致病性大肠埃希菌(aEPEC)菌株的毒力基因特征和菌株间的遗传相似度;结合菌株的背景资料分析不同的分子特征对aEPEC流行的影响。方法运用PCR技术进行系列的相关毒力基因扩增;同时运用脉冲场凝胶电泳分子分型技术,对福建省2010-2012年分离的aEPEC菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果分离30株实验菌株毒力基因的检测呈阳性的分别为:b112153.3%(16),yiaA36.7%(11),set/ent、nleB、nleE均为30%(9),lpfAR141 23.3%(7),efa/lifA20%(6),ehxA3.33%(1);其余毒力基因均未检出;93.3%(28)菌株不同程度地携带有相关的毒力因子。29株菌按照100%的相似度分为15个PFGE型别(P1-P15);其中存在4组不同的PFGE簇(I-Ⅳ),相同PFGE簇的病例在发病的时间和地区上有聚集性,同时相同簇内菌株的毒力基因谱也表现相同。结论 b1121、yiaA和EHEC毒力岛OI-122相关基因(efa1/lifA,nleB,nleE,set/ent)在福建省aEPEC菌株中携带率较高。非典型肠致病性大肠埃希菌的毒力谱表现为多样性,基因组也呈现遗传多态性;同时PFGE分析发现福建省存在由aEPEC新发病原菌引起的聚集性病例。

江苏省某监测点家畜来源肠致病性大肠埃希菌分离株分子特征分析

目的分析江苏省某监测点家畜来源肠致病性大肠埃希菌分离株分子特征,进而评估其潜在的致病性,为感染性腹泻的监测与防控提供依据。方法采用全基因组测序技术对江苏省某监测点分离的家畜来源的37株肠致病性大肠埃希菌(EPEC)菌株进行特征性分析。结果本地家畜来源的EPEC均为非典型EPEC(aEPEC),其血清型多样,携带多种与腹泻相关的毒力基因,有9种ST型且具有区域性流行特征,eae基因包含有5种亚型,β1为优势亚型,其在腹泻病人中也最为常见。结论aEPEC对公众健康构成潜在威胁,应在感染性腹泻的监测工作中,加强对家畜粪便及养殖环境的监测。

兔源肠致病性大肠埃希菌全基因组测序及毒力和耐药基因分析

目的揭示一株从腹泻实验兔中分离到的肠致病性大肠埃希菌ILAREc-01的基因组特征、毒力基因和耐药基因分布情况。方法采用高通量测序法对基因组序列进行测定,采用VFDB、ARDB、CAZy、SWISS-PROT、COG、CARD、KEGG、T3SS等8个数据库对基因组中的基因功能进行预测,并且对ILAREc-01菌株进行了遗传进化分析。结果ILAREc-01基因组中编码5249个基因;CARD数据库分析表明ILAREc-01菌株具有7类耐药机制的59个耐药基因;通过VFDB数据库分析,在ILAREc-01中注释了553个毒力基因,并发现了肠细胞脱落位点毒力岛(LEE);ILAREc-01与FORC028、E2865和110512株具有较高的同源性。结论本研究进行了兔源肠致病性大肠埃希菌ILAREc-01的全基因组测序,完成了毒力基因和耐药基因的注释,并开展了遗传进化分析,为揭示该病原的致病机制和科学防控实验兔大肠埃希菌病提供了数据支撑。

肠外致病性大肠埃希菌多重耐药性及氨基糖苷类耐药基因分析

目的检测临床分离猪、鸡源肠外致病性大肠埃希菌的耐药性,分析其携带的氨基糖苷类耐药基因,以指导临床用药,探究细菌对氨基糖苷类抗生素的抗性机制。方法应用K-B法测定分离株对19种常用抗生素的耐药情况。用双纸片法检测产ESBLs菌株并进行基因分型。用PCR和测序方法检测氨基糖苷类抗性基因aadA1,aadA2,strA-strB,aadB,aacC2,aac(3)-IV,aph(3′)-Ia,aph(3′)-IIa。结果临床分离株表现多重耐药性,对头孢菌素类药物和阿米卡星的敏感性最高(63%～97%),93%的菌株耐药谱值≥10。共检测到两株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株,基因型属TEM-1+CTX-M-14。耐药菌株与相应的氨基糖苷类耐药基因符合率高(≥74%)且序列保守。结论猪、鸡源肠外致病性大肠埃希菌呈多重耐药性,其对氨基糖苷类抗生素的抗性机制以产生针对该类抗生素的修饰酶为主。

北京解放军总医院肠致病性大肠埃希菌的流行及耐药现状

目的了解北京解放军总医院临床腹泻标本中分离的肠致病性大肠埃希菌(enteropathogenic Escherichia.coli,EPEC)的分布和耐药情况,为临床治疗提供重要依据。方法采用Vitek MS质谱仪或Vitek 2compact GN进行细菌鉴定,并用肠致病性大肠埃希菌诊断血清进行血清型凝集,药敏实验采用纸片扩散法(K-B法)或Vitek 2 compact全自动细菌鉴定药敏仪,按CLSI2016-M100的标准进行药敏结果分析。结果 2008~2016年解放军总医院自临床腹泻标本分离到EPEC菌株82株,检出率为2.10%;EPEC的病例主要来自门急诊患者(28.05%),各年龄段均有检出。EPEC的血清型主要是O86:K61(B7)17株(20.73%),未检出O11:K55(B4)、O126:K71(B16)、O119:K69(B14)、O114:K90(B)血清型。EPEC对哌拉西林、氨苄西林-舒巴坦、头孢噻肟耐药比较严重,耐药率在70.00%左右;未检出耐碳青霉烯类抗生素的EPEC,对哌拉西林/他唑巴坦敏感率达到97.56%。结论 EPEC是引起腹泻病的一种重要致病菌,血清型较分散,耐药较严重,临床抗生素的选择应以药物敏感性试验为依据,哌拉西林/他唑巴坦可作为EPEC的经验用药选择。

肠致病性大肠埃希菌的直接基因鉴定

目的 测定腹泻儿童的肠致病性大肠埃希菌 (EPEC)的bfpA和eaeA基因鉴定EPEC。 方法 用聚合酶链反应直接从粪便标本中和传统方法分离后获得的菌株中测定bfpA和eaeA基因。 结果 主要的血清型为O12 4K72 ,bfpA和eaeA基因存在于血清学凝集的 2 3株EPEC菌株中 ;直接从粪便标本中和传统方法分离后获得的菌株中测定bfpA和eaeA基因的结果有显著性差异 (P <0 0 1) ,两种基因的检出率有显著性差异 (P <0 0 5 )。

238株肠致病性大肠埃希菌的血清型与耐药性分析

为了解本地区小儿感染肠致病性大肠埃希菌（EPEC）的发病情况，我们对我院近期分离到的238株EPEC进行了血清学分型和耐药性分析，现报告如下。

肠致病性大肠埃希菌EPEC Deng致病岛基因进化特点

目的分析肠致病性大肠埃希菌(EPEC)致病岛(PAIs)基因进化特点。方法 EPEC Deng分离自我国婴幼儿腹泻患者粪便标本,鉴定该菌株血清型并进行药敏试验;采用Illumina 2000仪器对菌株进行全基因序列测序,PHAST软件定位菌株原噬菌体(prophages,PPs)在染色体中的位置,MUMmer软件进行共线性分析,构建系统发育树,了解同源基因进化规律。应用PAI_finder软件对基因组进行PAIs预测,了解PAIs核心区域(LEE)和核心基因同源进化规律,并进行遗传多态性分析。结果 EPEC Deng菌株归属O119∶H6,药敏结果显示该菌株对环丙沙星、左氧氟沙星及氨苄西林耐药,对其余的抗菌药物均敏感。基因组(染色体)序列大小为5 025 482 bp(GC含量为50.52%),质粒序列大小为207 564 bp(GC含量为49.50%)。共找到17个PPs,系统发育树分析发现,EPEC Deng株基因组与O26∶H11、O111∶H同源性较高;EPEC Deng株PAIs和核心基因均与RDEC-1和O26∶H413/89-1株具有高同源性;遗传多样性分析结果显示,紧密素(eae)及其受体(tir)多态性丰富,π值均>0.10,Ⅲ型分泌系统(TTSS)分泌蛋白相对稳定。结论此研究明确了EPEC Deng株基因组及PAIs的进化特点,有助于了解了本土分离的EPEC基因特点。

肠致病性大肠埃希菌血清型分布及耐药性分析

目的了解临床病例中肠致病性大肠埃希菌的主要血清型及对抗菌药物的耐药性。方法肠致病性大肠埃希菌的鉴定使用血清学的方法,药敏试验采用K-B法,WHONET5.4软件分析药敏结果。结果1082例标本检出肠致病性大肠埃希菌67例,检出率为6.19%,共分离到7种血清型。在分离到的菌株中,ESBLs的检出率达52.2%。结论肠致病性大肠埃希菌是引起小儿腹泻的一种重要致病菌,应重视对肠致病性大肠埃希菌的检测,根据药敏结果选用合适药物。

黑天鹅嗜水气单胞菌与肠致病性大肠埃希菌混合感染的诊断

对北京麋鹿生态实验中心2只死亡的黑天鹅进行了临床分析、病理剖检及实验室检查,结果发现病变主要集中在心脏、肝脏和十二指肠,在肝脏等实质器官中分离到嗜水气单胞菌与肠致病性大肠埃希菌,在动物栖息环境的水体中也检测到致病菌存在,结合临床症状、流行病学分析、病理变化和病原检测结果等综合分析,确诊为嗜水气单胞菌与肠致病性大肠埃希菌混合感染。

泉州市某区食品中致泻性大肠埃希菌的检测情况

目的 分析泉州市某区集贸摊点和超市食品中致泻性大肠埃希菌携带情况。方法 选择2021年1—12月从泉州市鲤城区超市以及集贸摊点采集的100份食品样本作为研究对象,严格按照GB 4789—2016《食品安全国家标准食品微生物检验致泻性大肠埃希菌检验》对所有标本开展致泻性大肠埃希菌微生物检验以及毒力基因检测,统计最终的检测结果。比较不同食品类型的致泻性大肠埃希菌检出率差异。结果 100份检测样本当中,总共20份检出致泻性大肠埃希菌,检出率为20.00%;其中包含产肠毒性大肠埃希菌(entero toxigenic Escherichia coli,ETEC)共6株,占比为30.00%;肠致病性大肠埃希菌(entero pathogenic Escherichia coli,EPEC)共5株,占比为25.00%;肠出血性大肠埃希菌(entero hemorrhagic Escherichia coli,EHEC)共5株,占比为25.00%;肠侵袭性大肠埃希菌(entero invasive Escherichia coli,EIEC)共4株,占比为20.00%。牲畜肉类、生禽肉类、凉拌类、海产类以及蔬菜类食品的致泻性大肠埃希菌检出率依次为38.89%、45.00%、5.00%、10.00%、4.55%,其中牲畜肉类、生禽肉类的致泻性大肠埃希菌检出率高于其他食品类型(P <0.05)。分离获得的致泻性大肠埃希菌20株内,出现EHEC的O157共5株;血清凝集予以H7鉴定,其中共有5株EHEC的O157:H7鉴定血清凝集,1株O157在羊肉上分离获得,SLT2、hly、eaeA毒力基因均在H7菌中携带,其他O157共4株,4种毒力基因均为阴性。结论 严格按照有关标准开展微生物检验能有效检出食品中的大肠埃希菌以及致泻性大肠埃希菌毒力基因,有关部门应该要加强卫生监督的力度,确保人民群众的食品安全。

肠外致病性大肠埃希菌毒力与耐药的相关性分析

目的:通过检测不同来源肠外致病性大肠埃希菌(ExPEC)多种毒力因子基因检出情况及耐药情况,初步探讨两者相关性,了解Ex PEC毒力与耐药相互关系。方法:187株分离自尿液及其他部位的菌株,分别检测其毒力因子基因的存在情况及耐药情况,χ~2检验比较不同来源菌株毒力因子基因检出率及耐药率有否差异,Logistic回归模型分析菌株毒力因子检出率与菌株耐药率相关性。结果:ExPEC中毒力基因kpsMT Ⅱ、pap C、PapEF、papG allele II(Internal)、papA、cnf1、sfa/focDE、K5和rfc在非尿液来源比尿液来源检出率更高;尿液来源环丙沙星、左旋氧氟沙星和哌拉西林/他唑巴坦的耐药情况均显著高于非尿液来源菌株;Logistic回归模型分析表明共有11种毒力基因与其相对应的抗菌药物耐药有相关性,其中9种毒力基因抑制菌株耐药发生,1种毒力基因促进菌株耐药发生,另有1种毒力基因在不同药物中有相反作用。结论:ExPEC由于受到环境与抗菌药物的选择压力不同,其毒力因子检出情况及耐药情况也会有差异,ExPEC毒力因子与菌株耐药情况关系密切。

邵阳市检出产H_2S肠致病性大肠埃希菌O_(128):K_(67)

在邵东牛马司矿区污染的生活饮用水和腹泻病人粪便中检出产H2S肠致病性大肠埃希菌(EPEC)O128:K67型,是引起牛马司矿区急性腹泻流行的主要病因,该菌为G-、生化反应、血清学鉴定、噬菌体裂解试验等符合埃希菌属的定义,药敏试验对多种抗生素耐药。致病性大肠埃希菌产H2S生化变异提示我们在注意生化反应典型的致病菌分离与鉴定时,应注意生化变异菌株的检查。

肠致病性大肠埃希菌EspB基因的体外诱导表达研究

目的:研究肠致病性大肠埃希菌(enteropathogenic E.coli,EPEC)EspB基因的体外诱导表达情况,获得纯化的EspB蛋白。方法:体外构建重组质粒pET-28a-EspB,转化BL21感受态细菌培养,提取重组质粒并行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定。重组质粒pET-28a-EspB经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹试验(Western blot)分析。pET-28a-EspB表达产物再次经纯化,获得的纯化蛋白进一步经SDS-PAGE和蛋白质Western blotting分析验证。结果:经双酶切和测序验证pET-28a-EspB重组质粒构建成功。pET-28a-EspB重组质粒经IPTG诱导后,在诱导表达不同时间点,培养菌液、沉淀和上清中均有良好的蛋白表达。经SDS-PAGE和蛋白质Western blotting分析验证我们获得了纯化的EspB蛋白。结论:体外可成功诱导EPECEspB蛋白稳定高效表达并获得纯化EspB蛋白产物。

1株与致病性大肠埃希氏菌O114∶K90(B)交叉凝集的阪崎肠杆菌

目的对从奶粉中食源性致病菌考核样中检出的与致病性大肠埃希氏菌O114∶K90(B)发生交叉凝集的阪崎肠杆菌进行鉴定和分析。方法依据食品安全(或食品卫生)国家标准食品微生物学检验部分相关章节,对考核样分离到的菌株采用血清学和生化反应进行检验。结果从考核样中初步检出的血清学凝集结果疑似为致病性大肠埃希氏菌O114∶K90(B),经全面的细菌生长特性实验、全自动细菌鉴定系统,最终鉴定为阪崎肠杆菌。结论在肠道致病菌的鉴定中,即便血清学反应符合的菌株也要结合全面的生化反应结果和生长特性再做出最终的判断。