非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2与核因子-κB在糖尿病牙周炎牙周组织破坏中的作用研究

目的观察糖尿病牙周炎条件下小鼠牙周组织中非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2(PTPN2)、核因子-κB(NF-κB)的表达与牙周组织破坏的关系。方法将4周龄健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(N组)、单纯牙周炎组(P组)及糖尿病牙周炎组(DP组),每组6只。采用口内接种牙龈卟啉单胞菌法在P组建立牙周炎模型,采用腹腔注射链脲佐菌素结合高脂高糖食物与口内接种牙龈卟啉单胞菌法在DP组建立糖尿病牙周炎模型。各组动物于P、DP组末次细菌接种4周后处死,通过体视显微镜观察牙槽骨形态和附着丧失面积,采用苏木精-伊红(HE)染色法观察牙周附着丧失的高度,免疫组织化学法检测牙周组织中PTPN2与NF-κB的表达强度。结果 P、DP组牙槽骨的附着丧失面积和牙周附着丧失高度均高于N组(P<0.05),PTPN2的表达量低于N组(P<0.05),而NF-κB的表达量则高于N组(P<0.01)。结论在糖尿病牙周炎的发生发展过程中,NF-κB可能有促进作用,而PTPN2可能有抑制作用;PTPN2的表达减少可能导致NF-κB表达增强而加重牙周组织破坏。

非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2在肿瘤免疫中的研究进展

非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2 (protein tyrosine phosphatase non-receptor type 2, PTPN2)作为蛋白酪氨酸磷酸酶家族成员,通过催化去磷酸化反应,在细胞信号传递中起着重要作用。PTPN2过表达与多种癌症患者预后不良密切相关,而其缺失能有效抑制肿瘤的增长、迁移,并促进细胞凋亡。在免疫系统中,PTPN2在T细胞功能以及肿瘤微环境的调节中起着关键作用。因此,PTPN2在肿瘤发展过程和肿瘤免疫中扮演了重要角色,是一个潜在抗肿瘤新靶点。目前,有多个PTPN2抑制剂或降解剂被发现,其中两个抑制剂已进入临床I期试验阶段。该文综述了PTPN2的结构特性、在抗肿瘤免疫中的功能与应用,以及当前对其抑制剂和降解剂在肿瘤治疗中的研究进展。

非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶12基因在脑胶质瘤中的表达及意义

目的基于中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)和癌症基因组图谱计划(TCGA)数据库分析非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶12基因(PTPN12)在脑胶质瘤中的表达和意义。方法回顾性分析CGGA数据库(325例)和TCGA数据库(636例)中脑胶质瘤患者的临床资料和RNA测序数据。分析不同世界卫生组织(WHO)肿瘤级别、四分型亚型、异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变状态、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化状态的患者PTPN12表达量的差异。根据PTPN12的表达量将患者分为PTPN12高表达组和PTPN12低表达组,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,比较两组患者的生存差异。采用单因素和多因素Cox回归分析法判断PTPN12对脑胶质瘤患者的预后作用。进一步通过基因本体(GO)功能富集分析及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析获得基因相关的功能以及有关的通路。结果两数据库中,PTPN12的表达量均随脑胶质瘤病理级别的升高而升高(均P<0.01);与IDH突变型比较,IDH野生型中PTPN12表达量升高(均P<0.01);MGMT启动子非甲基化者PTPN12表达量高于MGMT启动子甲基化者(均P<0.01);PTPN12在经典型、间质型、神经元型以及前神经元型中表达量的差异均具有统计学意义,间质型中表达量最高(均P<0.01)。两数据库中,PTPN12高表达者均比低表达者的生存期短(均P<0.01)。两个数据库中,多因素Cox回归分析结果均显示,PTPN12表达量为脑胶质瘤患者生存期的独立影响因素(CGGA数据库中,HR=1.433,95%CI:1.094~1.876,P=0.009;TCGA数据库中,HR=1.588,95%CI:1.018~2.477,P=0.042)。GO分析结果显示,PTPN12表达量正相关的基因更多地富集在增殖、凋亡、黏附、蛋白水解、免疫反应、血管生成、药物反应、缺氧反应、肿瘤细胞G2/M期的转化、肿瘤细胞G1/S期的转化等多个与脑胶质瘤恶性进展相关的功能上。KEGG分析结果显示,与PTPN12表达量呈正相关的基因更多地富集在肿瘤相关通路、PI3K-Akt通路、丝裂原活化蛋白激酶通路、肿瘤坏死因子通路、缺氧诱导因子1通路、p53通路、凋亡通路以及细胞周期通路上。结论不同WHO肿瘤级别的脑胶质瘤患者PTPN12表达量不同,PTPN12表达量可独立用于脑胶质瘤患者的预后判断,且与多个脑胶质瘤恶性进展相关的功能和通路有关。

非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶-11通过低氧诱导因子-1α调控破骨细胞分泌和骨吸收

目的 探讨人破骨细胞中非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶11（PTPN11）的表达及其作用机制.方法 收集不同年龄组健康志愿者（青年组28例：20~45岁;中年组33例：46~60岁;老年组31例：61~80岁）外周血单个核细胞,诱导成破骨细胞.将细胞分为对照组、空白组、Adv-PTPN11转染组.利用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测PTPN11、低氧诱导因子-1α（HIF-1α） mRNA的表达,利用Western blot检测PTPN11、HIF-1α蛋白的表达,噻唑蓝（MTT）法测定细胞存活,利用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定基质细胞衍生因子-1（SDF-1）、白细胞介素（IL）-6、巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）、B细胞激活因子（BAFF）分泌量,同时检测骨吸收.结果 与青年组（mRNA：4.468±1.441,蛋白：1.000±0.055）和中年组（mRNA：4.673±1.469,蛋白：1.021±0.076）比较,老年组破骨细胞中PTPN11 mRNA（7.510±1.941）和蛋白（1.556±0.123）表达明显上升.破骨细胞转染Adv-PTPN11后24、48、72h存活率比较差异无统计学意义.Adv-PTPN11转染组HIF-1α mRNA和蛋白的表达量明显高于对照组和空白组.Adv-PTPN11转染组SDF-1[（94.2±10.3）ng/ml]、IL-6[（25.1±3.2）ng/ml]、MIP-1α[（31.2±3.9）ng/ml]、BAFF[（39.8±3.7）ng/ml]表达量增高,同时骨陷窝数量和面积也增加.HIF-1α抑制剂YC-1处理则抑制破骨细胞中SDF-1[（73.8±7.5）ng/ml]、IL-6[（17.9±2.5）ng/ml]、MIP-1α[（19.8±1.6）ng/ml]、BAFF[（23.5±2.7）ng/ml]表达及骨吸收.结论 PTPN11可通过HIF-1α影响破骨细胞细胞因子表达和骨吸收.

非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶在类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞中的表达

目的探讨非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶（PTPN）在类风湿性关节炎（RA）患者中的表达及其临床意义。方法选取本院住院RA患者32例和健康对照29例，抽取外周血，Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞。利用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）和Western blot法检测蛋白酪氨酸磷酸酶（PTPs） mRNA及蛋白的表达水平。同时检测外周血炎性因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α及生化指标红细胞沉降率（ESR）、C反应蛋白（CRP）的水平，并计算病情活动性指标DAS28评分，统计学分析PTPs的表达水平与炎性因子、生化指标、DAS28评分间的关系。结果与对照组比较，RA患者PTPN1、PTPN2、PTPN3、PTPN4、PTPN7、PTPN9、PTPN13的表达量下降，PTPN11（2.530±0.743，对照组1.000±0.034）和PTPN14（2.269±0.548，对照组1.000±0.057）表达明显上升。PTPN11的表达水平与TNF-α水平[（5.95±1.57） ng/ml，r=0.669，P=0.000]、CRP含量[（28.58±6.72） mg/L，r=0.795，P=0.000]、DAS28评分[（4.20±0.73）分，r=0.703，P=0.000]间具有显著正相关。PTPN14表达水平与TNF-α水平（r=0.633，P=0.000）和CRP含量（r=0.435，P=0.013）明显相关，但与DAS28评分（r=0.033，P=0.856）之间无明显相关。结论PTPs在RA患者外周血单个核细胞中差异化表达，其中PTPN11与RA炎性因子、CRP含量和DAS28评分呈正相关。

蛋白酪氨酸磷酸酶受体J在非小细胞肺癌中的研究进展

非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌的常见类型,随着现代医学技术的发展,癌症的诊断和治疗已进入“精准医学”的发展阶段,然而肺癌患者5年生存率依然很低。蛋白酪氨酸磷酸化参与肿瘤发生发展过程,蛋白酪氨酸磷酸酶受体J(PTPRJ)作为酪氨酸磷酸酶家族中的一员,通过对蛋白的去磷酸化作用抑制NSCLC发病的多种机制,包括抑制肿瘤细胞的增殖、迁移、调控肿瘤发生的上游信号通路等,是新的肿瘤抑制因子。同时,在临床上,PTPRJ具有独立预测NSCLC患者死亡风险的能力,与患者肿瘤分期和临床特征相关,是NSCLC预后评估和治疗的新工具。

蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12负性调控心脏HERG钾通道电流

目的研究蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12(PTPN12)对心脏HERG钾通道电流的调控作用。方法(1)质粒构建和基因转染:PCR技术构建各种质粒,应用脂质体将各种质粒转染HEK293细胞,经G418筛选获得稳定表达的细胞株;(2)应用抗PTPN12抗体进行Western blotting分析检测PTPN12的表达;(3)细胞电生理检测:应用膜片钳技术检测单独表达HERG组(HEK293/HERG细胞)、PTPN12过度表达组(将pCDNA3.1-PTPN12-RFP转染HEK293/HERG细胞)、PAO处理组(PTPN12/HERG组基础上加入抑制剂PAO)、herg突变组(将pCDNA3.1-PTPN12-RFP转染HEK293/HERGY327A-Y700A-Y845A细胞株)的HERG钾通道电流。结果(1)成功构建herg突变质粒和pCDNA3.1-PTPN12-RFP质粒,并获得稳定表达的细胞株;(2)共转染pCDNA3.1-PTPN12-RFP质粒的HEK293/HERG细胞在荧光显微镜下可观察到PTPN12-RFP在细胞中的表达,Western blotting可检测到PTPN12的表达;(3)PTPN12过度表达组脉冲电流密度明显低于对照组(P<0.01),PAO处理组和herg突变组电流密度明显高于PTPN12/HERG组(P<0.01)。结论 PTPN12对心脏HERG钾通道电流具有明显负性调控作用,其可能机制是PTPN12减弱了HERG钾通道酪氨酸磷酸化程度。这一发现有助于更深刻理解HERG钾通道调控机制和长QT综合征发病机制。

蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12与心脏HERG钾通道相互作用

目的鉴定HERG钾通道的相互作用蛋白,并进一步研究该相互作用蛋白对HERG钾通道的功能调控。方法 (1)应用酵母双杂交技术,构建含有HERG氨基末端的诱饵载体,将转染有诱饵载体的酵母菌AH109与预转染有人类cDNA文库的Y187酵母菌进行双杂交,初步筛选出HERG的相互作用蛋白;(2)应用免疫共沉淀技术进一步验证酵母双杂交所筛选蛋白与HERG之间的相互作用;(3)GSTpull-down分析:应用GST-HERGT-NT融合蛋白和谷光苷肽-琼脂糖4B小球从大鼠心肌裂解物中沉淀蛋白质,应用抗PTPN12抗体对沉淀物进行WesternBlot分析;(4)免疫荧光组织化学分析:应用抗PTPN12和抗HERG的抗体和荧光标记二抗显示PTPN12及HERG的亚细胞定位,应用激光共聚焦显微镜观察。结果 (1)酵母双杂交筛选发现蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12(Proteintyrosinephosphatasenonreceptortype12,PTPN12)与HERG氨基末端存在相互作用;(2)免疫共沉淀分析发现抗HERG的抗体能够沉淀HERG和PTPN12复合物;(3)GSTpull-down分析发现GST-HERG-NT能够将PTPN12沉淀,而GST蛋白则不能沉淀PTPN12;(4)免疫荧光组织化学分析发现PTPN12和HERG两个蛋白共定位的地方主要出现在细胞膜。结论 PTPN12与HERG氨基末端相互作用,这一发现将有助于更加透彻地理解HERG通道特性多样性的分子基础和LQTS的发病机理。

蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22基因rs2488457位点多态性与溃疡性结肠炎的相关性

目的:本实验探讨蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22基因(protein tyrosine phosphatase nonreceptor type22,PTPN22)启动子区-1123G/C及外显子10区+788G/A多态性与湖北汉族溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的相关性,研究UC患者肠黏膜PTPN22mRNA表达.方法:收集165例UC患者和300名健康对照者,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测PTPN22基因-1123G/C和+788G/A位点多态性.实时定量PCR方法测定肠黏膜PTPN22mRNA表达.结果:UC患者PTPN22基因-1123G/C位点"CC+CG"基因型和C等位基因频率显著高于正常对照组(66.7%vs53.3%,P=0.005,OR=1.75,95%CI:1.18-2.60;41.5%vs33.5%,P=0.015,OR=1.41,95%CI:1.07-1.86),且与广泛性结肠炎相关(P=0.029).与缓解期UC患者比,活动期UC患者肠黏膜PTPN22mRNA的水平显著增高(P=0.005).UC患者PTPN22基因-1123G/C基因型与肠黏膜PTPN22mRNA的水平无关.UC组+788G/A基因型频率与对照组比,差异无统计学意义.结论:PTPN22基因启动子区-1123G/C位点C等位基因频率与湖北汉族UC相关,活动期UC患者肠黏膜PTPN22mRNA水平增高,提示PTPN22基因在UC遗传免疫发病机制中可能起重要作用.

高水平蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22．6mRNA的表达在克罗恩病中的临床意义

目的：检测蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22（PTPN22）基因选择性剪切亚型PTPN22．6 mRNA 在克罗恩病（CD）患者外周血单核细胞（PBMCs）中的表达水平，研究 PTPN22．6 mRNA 表达状况与 C 反应蛋白（CRP）和红细胞沉降率（ESR）的关系及其临床意义。方法采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）方法分析50例 CD 患者和35例对照组 PBMCs 中PTPN22．6 mRNA 表达。分别采用速率散射比浊法和全自动红细胞沉降系统分析仪测定 CRP 和ESR 水平。结果与对照组比较，CD 患者 PBMCs 中 PTPN22．6 mRNA 的表达量升高（P ＜0．05）。活动期 CD 患者 PBMCs 中 PTPN22．6 mRNA的表达量显著高于缓解期 CD 患者（P ＜0．05）。CD 患者 PBMCs 中 PTPN22．6 mRNA 表达量与 CRP 和 ESR 浓度呈正相关（r ＝0．356，P ＜0．01；r ＝0．512， P ＜0．01）。疾病行为与 CD 患者PBMCs中 PTPN22．6 mRNA 表达水平相关，梗阻型 CD 患者 PBMCs中 PTPN22．6 mRNA 表达量显著高于非狭窄非穿透型和穿透型 CD 患者（P ＜0．05）。结论CD 患者 PBMCs 中 PTPN22．6 mRNA 表达水平升高，高水平 PTPN22．6 mRNA 的表达不仅与梗阻型疾病行为和疾病活动状态相关，而且与 CRP 和 ESR 呈正相关，提示 PTPN22．6可能在 CD 免疫学发病中起重要作用。

蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型11对人类果蝇相关基因钾通道的调控作用

目的由人类果蝇相关基因(Human ether-a-go-go-related gene,HERG)编码的钾通道电流的改变可引起长QT综合征,HERG钾通道受到蛋白酪氨酸激酶和磷酸酶的调节,且蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12(protein tyrosine phosphatase non-receptor type 12,PTPN12)具有负性调控HERG钾通道的作用。文中旨在探讨PTPN11对HERG钾通道电生理特性的影响。方法应用PCR技术,构建携带pc DNA3.1-PTPN11-EGFP的质粒;利用脂质体Lipofectamine2000,将各质粒转染进入HEK293细胞;应用膜片钳技术,分别检测对照组(pc DNA3.0-HERG-EGFP单独转染HEK293细胞)、PTPN11过表达组(pc DNA3.0-HERG与pc DNA3.1-PTPN11-EGFP共转染HEK293细胞)以及抑制剂组(pc DNA3.0-HERG与pc DNA3.1-PTPN11-EGFP共转染HEK293细胞基础上加入蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂正钒酸钠)的HERG钾通道的脉冲电流最大电流密度、尾电流最大电流密度及去激活时间常数Tau等。结果成功构建了pc DNA3.1-PTPN11-EGFP质粒。在荧光显微镜下可观察到各组中带有增强型绿色荧光蛋白的质粒表达。膜片钳检测发现,PTPN11过表达组的脉冲电流最大电流密度[(31.85±5.54)p A/p F]、尾电流最大电流密度[(73.82±11.31)p A/p F]较对照组[(45.92±3.18)、(108.43±7.98)p A/p F]均降低(P<0.05);而抑制剂组脉冲电流、尾电流最大电流密度[(48.08±4.32)、(120.06±8.02)p A/p F]较对照组与PTPN11过表达组均明显增大(P<0.05)。PTPN11过表达组去激活时间常数Tau[(622.16±46.49)ms]较对照组[(440.70±49.49)ms]明显升高(P<0.05)。结论 PTPN11对心脏HERG钾通道的电流具有负性调控作用,而酪氨酸磷酸酶抑制剂能逆转PTPN11过表达的HERG钾通道电流的减小,这一发现为应用HERG钾通道的某些调控酶作为治疗长QT综合征的治疗思路提供了一定的理论基础。

非受体蛋白质酪氨酸磷酸酶14在胆管癌组织的表达及临床意义

目的检测非受体蛋白质酪氨酸磷酸酶14(PTPN14)蛋白在胆管癌组织中的表达,探讨PTPN14与胆管癌临床病理特征间的关系,并分析PTPN14的表达与胆管癌患者预后的关系。方法用免疫组织化学染色检测胆管癌组织及癌旁组织中PTPN14蛋白的表达;利用统计学分析软件分析PTPN14蛋白与胆管癌患者临床病理特征之间的关系;利用生存分析曲线分析PTPN14蛋白与胆管癌患者术后5年生存率的关系。结果 PTPN14蛋白在胆管癌组织中的阳性表达率为49.1%,在癌旁组织中的阳性表达率为75.4%;PTPN14蛋白的表达与胆管癌临床分期及分化程度密切相关,与胆管癌患者性别、年龄无显著相关性;PTPN14蛋白阳性表达的胆管癌患者术后5年生存率显著高于阴性表达的患者。结论 PTPN14在胆管癌组织低表达,且PTPN14低表达与胆管癌的良性临床病理特征及总体生存率呈负相关。

受体型蛋白酪氨酸磷酸酶Q的研究进展

研究表明,从基础代谢到细胞生长、分化、增殖等几乎每一细胞事件都与蛋白质酪氨酸磷酸化过程密切相关[1-4]。这一过程分别受蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinases,PTKs）和蛋白酪氨酸磷酸酶（protein tyrosine phosphatases,PTPs）共同调控。PTKs能特异地使蛋白质上的酪氨酸残基磷酸化,而PTPs能使磷酸化的酪氨酸残基去磷酸化,两者相互协调,

受体型蛋白酪氨酸磷酸酶在大鼠肝星状细胞表达及在肝纤维化发生中的意义

目的:受体型蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPRJ)在多种组织包括肝内表达。目前认为其作为一种潜在抑癌基因对于细胞增殖及迁徙具有抑制作用。文章通过观察PTPRJ在大鼠肝星状细胞中的表达及功能,探讨PTPRJ在肝纤维化发生中的意义。方法:四氯化碳(CCl4)皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,用Western技术检测PTPRJ在肝纤维化组织中的表达变化,采用Percoll梯度离心法分离培养原代大鼠肝星状细胞,采用细胞免疫荧光法观察PTPRJ表达情况,RT-PCR法测定其mRNA在肝星状细胞体外活化过程中的表达变化。结果:免疫荧光及RT-PCR显示肝星状细胞中PTPRJ表达呈阳性;在CCl4诱导的实验性大鼠肝纤维化模型中随着不同时间段纤维化程度加重,PTPRJ表达减少;原代大鼠肝星状细胞体外培养自活化过程中,RT-PCR测定的PTPRJ表达逐步减少。结论:PTPRJ在原代肝星状细胞中表达为阳性,并在肝星状细胞活化及肝纤维化过程中表达减少,提示PTPRJ可能对于肝纤维化发生发展起负性调控作用。

受体型蛋白酪氨酸磷酸酶R基因多态性与重性抑郁障碍的关联分析

目的探讨受体型蛋白酪氨酸磷酸酶R（PTPRR）基因多态性与重性抑郁障碍（MDD）及其内表型的关联性。方法收集中国北方汉族MDD患者517例（MDD组）和健康志愿者455人（对照组）,采用时间飞行质谱技术检测研究对象PTPRR基因的11个单核苷酸多态性（SNPs）位点的多态性,采用UNPHASED软件进行等位基因、基因型、单倍型及数量性状分析。结果单位点分析显示,等位基因频率和基因型分布在MDD组和对照组间差异无统计学意义（校正后P〉0.05）;单倍型分析显示,三位点单倍型rs1398599（C）-rs2175711（A）-rs4489789（T）（P=0.0023,OR=1.334,95%CI=1.104~1.612）和四位点单倍型rs11178391（C）-rs1398599（C）-rs2175711（A）-rs4489789（T）（P=0.0063,OR=1.281,95%CI=1.059~1.549）均显著增加MDD发病风险;数量性状分析显示,SNP rs2203231的等位基因和基因型分别与韦氏记忆量表（WMS-R）的心智原始分（P=0.0038,P=0.0024）和心智量表分（P=0.0057,P=0.0038）以及图片原始分（P=0.0027,P=0.0015）和图片量表分（P=0.0035,P=0.002）显著相关。结论 PTPRR基因rs2203231多态性可能与MDD患者的长时记忆和短时记忆功能障碍相关联。

蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型6对心脏HERG钾通道的调控作用

目的旨在阐明蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型6(tyrosine protein phosphatase non-receptor type 6,PTPN6)是否对心脏HERG钾通道电流具有调控的作用。方法聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术构建pcDNA3.1-PTPN6-EGFP质粒;应用脂质体Lipofectamine2000将各种质粒转染进入HEK293细胞;应用膜片钳技术分别检测对照组(pcDNA3.0-HERG单独转染HEK293细胞)、PTPN6过度表达组(pcDNA3.0-HERG和pcDNA3.1-PTPN6-EGFP共转染HEK293细胞)以及抑制剂组(pcDNA3.0-HERG和pcDNA3.1-PTPN6-EGFP共转染HEK293细胞,并加入蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂正钒酸钠)的HERG钾通道的脉冲电流最大电流密度、尾电流最大电流密度以及去激活时间常数Tau等。结果成功构建了pcDNA3.1-PTPN6-EGFP质粒,测序结果表明基因序列正确,荧光显微镜下可观察到HEK293细胞中绿色荧光蛋白表达;全细胞膜片钳电生理检测发现,PTPN6过度表达组的脉冲电流最大电流密度[(36.42±2.76)pA/pF]、尾电流最大电流密[(84.73±7.18)pA/pF]均较对照组[(45.92±3.18)pA/pF、(108.43±7.98)pA/pF]显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);而抑制剂组脉冲电流最大电流密度、尾电流最大电流密度[(47.10±2.96)pA/pF、(110.52±7.87)pA/pF]均较PTPN6过度表达组明显增大,差异有统计学意义(P<0.05);PTPN6过度表达组失活时间常数Tau[(785.59±90.05)ms]较对照组[(440.7±49.49)ms]明显延长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PTPN6过度表达能使HERG钾通道的电流密度降低,且这一作用能被酪氨酸磷酸酶抑制剂逆转,提示PTPN6能通过催化HERG钾通道去磷酸化而发挥负性调控HERG钾通道电流的作用。

蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型23在肝细胞癌组织中的表达及其与TACE治疗疗效的关系

【目的】探讨蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型23(PTPN23)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其与经肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗疗效的关系。【方法】选择在两院接受救治的102例HCC患者作为研究对象,用蛋白质免疫印迹法检测HCC组织中PTPN23蛋白表达水平,用实体瘤疗效评价标准的修订标准(mRECIST)评价TACE治疗疗效。分析HCC组织中PTPN23水平与TACE治疗疗效的关系。【结果】102例HCC患者经TACE治疗后18例(17.65%)完全缓解,33例(32.35%)部分缓解,21例(20.59%)疾病稳定,30例(29.41%)疾病进展。治疗无效组(30例)患者PTPN23蛋白水平为0.80±0.18,明显低于治疗有效组(72例)的1.07±0.23,且差异有统计学意义(P<0.05)。PTPN23评价TACE治疗疗效的ROC曲线下面积、敏感度和特异度分别为0.819、70.00%和79.17%。多因素Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径≥5cm、PTPN23<0.90是TACE治疗疗效的独立危险因素(P<0.05)。【结论】检测HCC组织中PTPN23表达水平有助于判断TACE治疗疗效,HCC组织中PTPN23表达水平低是影响TACE治疗疗效的独立危险因素。

受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O（PTPRO）在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学SP法和图像分析技术检测40例肝癌组织和10例正常肝组织中PTPRO基因蛋白的表达；westernblot法检测10例正常肝组织和10例肝癌组织中PTPRO蛋白的表达。结果（1）免疫组化结果显示，40例肝癌组织中PTPRO蛋白免疫组化阳性反应颗粒的平均光密度（0．1749±0．0152）明显低于正常肝组织（0．3523±0．0027），差异有显著性（P〈0．05）；PT-PRO蛋白的表达与肝癌的组织分化有关（P〈0．05），与肿瘤直径的大小、性别无明显相关（P〉0．05）；（2）western blot法结果显示，条带灰度扫描PTPRO在肝癌组织中的表达水平（0．1381±0．0004）明显低于正常肝组织（0．4410±0．0026），差异有显著性（P〈0．05）。结论PTPRO的表达缺失与肝癌的发生、发展和预后可能有关。

酪氨酸蛋白磷酸酶非受体6型蛋白对胶质瘤干细胞成瘤的影响

目的通过研究酪氨酸蛋白磷酸酶非受体6型蛋白(PTPN6)在胶质瘤干细胞(GSC)成瘤方面发挥的作用,探索新的肿瘤治疗相关标志物或治疗靶点,从而为临床胶质瘤的靶向治疗提供依据。方法利用Sun Brain数据库的数据,对PTPN6在正常脑组织和多形性胶质母细胞瘤(GBM)组织中的表达水平进行分析,比较二者表达水平的差异,并利用TCGAGBMLGG数据库比较不同级别胶质瘤组织中PTPN6表达水平的差异;根据TCGA-GBM数据库以及Rembrandt数据库的数据进一步分析PTPN6表达水平的高低与脑胶质瘤患者预后之间的关联。通过低氧培养条件对GSC及其分化后的肿瘤细胞进行培养,对比分化前和分化后的GSC细胞中PTPN6表达水平的差异;在GSC中敲低PTPN6,观察敲低后对肿瘤球形成的影响;利用免疫荧光技术检测GSC中PTPN6的细胞定位。结果PTPN6基因在GBM组织中的表达水平(mRNA)要高于正常脑组织(P<0.01);PTPN6 mRNA表达水平随胶质瘤恶性程度的增高而升高(Ⅲ级与Ⅱ级比较,P<0.05;Ⅳ级与Ⅱ级比较,P<0.01;Ⅳ级与Ⅲ级比较,P<0.01);PTPN6 mRNA高表达患者的生存期显著低于低表达患者(P<0.01)。低氧培养的GSC中PTPN6表达水平明显提高,并且增加水平与低氧时间呈正相关;在GSC中敲低PTPN6显著抑制了肿瘤球的形成;PTPN6在GSC中定位于细胞核。结论PTPN6在GSC中的高表达是胶质瘤细胞生长的一个相关因素,提示高水平PTPN6有利于GSC成瘤。

受体型酪氨酸磷酸酶D在乳腺癌干细胞特性中的影响

目的探讨受体型酪氨酸磷酸酶D(protein tyrosine phosphatase receptor type D,PTPRD)对乳腺癌干细胞特性的影响。方法采用小RNA干扰技术下调PTPRD在乳腺癌细胞系MDA-MB231中的表达;用乳腺球成球实验检测干细胞的自我更新能力;用全克隆形成实验检测细胞全克隆形成能力;用流式细胞技术检测CD44^+/CD24^-细胞比例;用小鼠成瘤实验分析乳腺癌细胞在小鼠中的成瘤能力;用免疫磁珠法分选CD44^+/CD24^-干细胞群及非干细胞群,用免疫荧光技术检测PTPRD在干细胞及非干细胞中的表达;用Western blot法检测蛋白表达。结果 PTPRD下调促进干细胞标记分子ALDH1及OCT-4的表达。乳腺癌干细胞中PTPRD表达显著低于非干细胞(P <0. 05)。PTPRD下调后,乳腺癌细胞的乳腺球形成数(147±3. 51)显著高于对照组(106±12. 5)(P <0. 05);全克隆形成比例[(35. 9±3. 4)%]显著高于对照组[(11. 2±5. 3)%](P <0. 05); CD44^+/CD24^-细胞的比例[(2. 88±1. 2)%]显著高于对照组[(0. 6±0. 4)%];乳腺癌细胞在裸鼠中成瘤能力显著上调(P <0. 05)。结论乳腺癌干细胞中PTPRD低表达,PTPRD可抑制乳腺癌干细胞的自我更新能力。