非受体酪氨酸激酶-信号转导和转录激活因子信号通路作为结肠癌治疗新靶点的研究进展

癌变的结肠细胞增殖、侵袭和转移时依赖血管生成及有利的肿瘤微环境。非受体酪氨酸激酶-信号转导和转录激活因子（JAK-STAT）信号通路参与慢性炎症相关的肿瘤发生、癌细胞增殖、肿瘤血管生成、免疫逃逸、肿瘤转移多个过程，因此有望成为分子靶向治疗的新靶点。现对JAK-STAT信号通路在结肠癌发生、发展中的研究进展进行综述，并初步探讨JAK-STAT在靶向治疗及预后评估方面的应用前景。

微小RNA-338-3p调控信号转导和转录激活因子1对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药肺癌细胞株PC-9/GR中程序性死亡配体1表达和细胞凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)耐药肺癌细胞株PC-9/GR中程序性死亡配体1(PD-L1)表达和细胞凋亡的影响及相关机制。方法 体外培养PC-9细胞、PC-9/GR细胞,采用0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00μmol/L吉非替尼处理确定用药浓度;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-338-3p表达。将PC-9/GR细胞分为对照组、miR-338-3p NC组(转染miR-338-3p NC)、miR-338-3p组(转染miR-338-3p模拟物)和信号转导和转录激活因子1(STAT1)抑制剂组(转染miR-338-3p模拟物+100μmol/L氟达拉滨)。4组均添加1.00μmol/L吉非替尼,转染后qRT-PCR检测细胞中miR-338-3p表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白印迹(WB)法STAT1、p-STAT1、PD-L1、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 当吉非替尼浓度升高至1.00μmol/L时,PC-9细胞与PC-9/GR细胞增殖率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与PC-9细胞相比,PC-9/GR细胞中miR-338-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染后,qRT-PCR结果显示,miR-338-3p组、STAT1抑制剂组的miR-338-3p表达水平均高于miR-338-3p NC组、对照组,差异有统计学意义(P>0.05)。与miR-338-3p NC组相比,miR-338-3p组PC-9/GR细胞增殖率及细胞中PD-L1、Bcl-2蛋白表达水平降低,凋亡率及细胞中p-STAT1/STAT1、Bax蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与miR-338-3p组相比,STAT1抑制剂组PC-9/GR细胞增殖率及细胞中PD-L1、Bcl-2蛋白表达水平升高,凋亡率及细胞中p-STAT1/STAT1、Bax蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-338-3p可抑制EGFR-TKI耐药肺癌细胞株PC-9/GR细胞中PD-L1表达,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与激活STAT1有关。

酪氨酸激酶2/信号转导与转录激活因子3通路介导机械性软骨细胞凋亡

目的探索酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路在机械性软骨细胞凋亡过程中的作用机制。方法使用大鼠软骨细胞,分为对照组和机械性损伤组,干预后行膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙锭(PI)双染色以确定细胞凋亡程度,4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色现实细胞核形态,蛋白质印迹法(Western blot)检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达,以及JAK2蛋白、STAT3蛋白的磷酸化/非磷酸化激活比例。第二项实验中,将软骨细胞分组为机械性损伤组,以及机械性损伤+AG490组,分别检测软骨细胞凋亡比例、实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)/bcl-2相关X蛋白(bax)基因的表达比值,Western blot检测Caspase-3蛋白表达和核因子-κB(NF-κB)p65磷酸化激活比例,组间比较采用非配对t检验。结果体外培养的软骨细胞凋亡检测中,机械性损伤组的凋亡比例高于对照组[(37.5±7.9)%比(8.4±6.8)%,t=4.815,P<0.05],DAPI染色证实细胞核凋亡性改变,同时,机械性损伤组的Caspase-3蛋白表达高于对照组(倍数为14.2±7.3,t=8.390,P<0.05)。同时,机械性损伤组的JAK2蛋白及STAT3蛋白的磷酸化激活比例均高于对照组(倍数分别为2.2±1.1和1.6±0.4,t=2.886、4.652,P<0.05)。第二项实验中,机械性损伤+AG490组的凋亡比例减低显著低于机械性损伤组[减低至(11.9±3.2)%,t=5.144,P<0.05]。机械性损伤组的bcl-2/bax的基因表达比值高于对照组(比值为0.31±0.07,t=2.789,P<0.05)和机械性损伤+AG490组(比值为0.61±0.12,t=3.690,P<0.05)。机械性损伤+AG490组的Caspase-3蛋白低于机械性损伤组[变化倍数为(1.7±1.2)倍,t=8.273,P<0.05]。此时,机械性损伤组的NF-κB p65蛋白的磷酸化比例高于对照组[变化倍数为(6.7±1.4)倍,t=5.098,P<0.05]和机械性损伤+AG490组[变化倍数为(3.3±0.2)倍,t=2.875,P<0.05]。结论JAK2/STAT3信号通路介导了机械性软骨细胞凋亡,JAK2特异性抑制剂AG490可通过抑制NF-κB p65活化调控凋亡反应。

c-Myc调控葡萄糖转运蛋白4激活酪氨酸激酶/信号转导与转录激活因子促进三阴性乳腺癌机制研究

目的探讨c-Myc调控葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)激活酪氨酸激酶(JAK)/信号转导与转录激活因子(STAT)信号通路促进三阴性乳腺癌(TNBC)进展机制。方法通过生信分析GLUT4、c-Myc关联性及GLUT4与乳腺癌临床病理特征间关系。收集三阴性乳腺癌患者临床样本,免疫组织化学检测GLUT4和c-Myc表达水平。构建敲除c-Myc的MDA-MB-231细胞株,通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测GLUT4表达水平。构建敲除GLUT4和同时敲除GLUT4及c-Myc的MDA-MB-231细胞株,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测增殖,流式细胞仪检测凋亡,Transwell检测迁移和侵袭。Western blot进一步分析c-Myc调控GLUT4对JAK/STAT的影响。正态分布计量资料比较采用独立样本t检验,多组资料组间比较采用方差分析。结果生信分析结果显示,在乳腺癌中GLUT4明显下调(P<0.01)且与乳腺癌TNM分期、病理分级、PAM50分型等相关。免疫组织化学评分结果显示,c-Myc在TNBC癌组织中表达显著高于癌旁组织(7.233比4.567,t=4.551,P<0.01),而GLUT4显著低表达(4.800比7.933,t=5.702,P<0.01)。在MDA-MB-231细胞中敲除c-Myc,RT-qPCR结果显示,c-Myc敲除组GLUT4表达量高于阴性对照组(2.486±0.273比1.070±0.140,F=55.005,P<0.01),Western blot结果显示,c-Myc敲除组GLUT4表达量高于阴性对照组(0.691±0.041比0.431±0.055,F=29.027,P<0.01)。构建GLUT4低表达的MDA-MB-231细胞株,RT-qPCR结果显示,GLUT4沉默组表达量低于阴性对照组,差异有统计学意义(0.507±0.076/0.137±0.025/0.317±0.085比1.150±0.200,F=45.016,P<0.01)。CCK-8结果显示,组细胞存活率高于阴性对照组(128.614±13.780比95.875±9.130,F=26.927,P<0.01),继续敲除c-Myc后细胞存活率低于阴性对照组(70.977±5.906比95.875±9.130,F=26.927,P<0.01)。流式细胞术结果显示,同时敲除GLUT4及c-Myc后细胞凋亡高于阴性对照组(12.170±1.283比3.263±0.691,F=102.946,P<0.01)。Transwell结果显示,敲除GLUT4后细胞迁移数高于阴性对照组[(237.333±14.364)个比(156.667±10.693)个,F=91.074,P<0.01]、侵袭数高于阴性对照组[(257.000±9.539)个比(152.333±5.132)个,F=90.437,P<0.01],细胞迁移侵袭能力增强,而同时敲除c-Myc和GLUT4后细胞迁移数低于阴性对照组[(67.000±14.177)个比(156.667±10.693)个,F=91.074,P<0.01]、侵袭数低于阴性对照组[(91.667±13.650)个比(152.333±5.132)个,F=90.437,P<0.01],细胞迁移侵袭能力减弱。Western blot结果显示,敲除GLUT4后c-Myc(0.814±0.060比0.447±0.028)、p-JAK2(0.629±0.038比0.380±0.030)、p-STAT3(0.698±0.029比0.288±0.016)表达量均高于相应阴性对照组(F=17.541,P<0.01),而继续敲低c-Myc后,GLUT4表达量高于单纯敲低GLUT4组(0.618±0.029比0.529±0.049,F=68.772,P<0.05),p-JAK2(0.510±0.033比0.629±0.038)、p-STAT3(0.410±0.050比0.698±0.029)表达量低于单纯敲低GLUT4组(F=68.772,P<0.01)。结论在三阴性乳腺癌中,c-Myc可抑制GLUT4表达并通过调控JAK/STAT信号通路影响肿瘤细胞的增殖侵袭和凋亡。

虎杖苷调节酪氨酸激酶3/信号转导因子和转录激活因子3信号通路对膝骨关节炎大鼠软骨退变的影响

目的探究虎杖苷调节酪氨酸激酶3/信号转导因子和转录激活因子3(JAK3/STAT3)信号通路对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨退变的影响。方法采用随机数字表法将50只大鼠分为假手术组、模型组、虎杖苷低剂量组、虎杖苷高剂量组、虎杖苷高剂量+Colivelin(JAK3/STAT3激活剂)组,每组大鼠各10只。改良Mankin评分评价软骨退变程度;酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTX-Ⅰ)、Ⅱ型胶原CTX(CTX-Ⅱ)水平;苏木精-伊红(HE)染色和番红O-固绿染色观察关节软骨组织形态学改变;原位末端转移酶标记法(TUNEL)观察大鼠软骨细胞凋亡情况;蛋白质印迹法(Western blot)检测大鼠关节软骨组织基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13、JAK3、STAT3蛋白。组间比较采用单因素方差分析。结果与假手术组比较,KOA模型组大鼠软骨严重退变,软骨表面膜样结构被显著破坏,与模型组比较,虎杖苷高剂量组大鼠软骨退变程度和软骨表面膜样结构破坏程度显著减轻;虎杖苷高剂量组大鼠Mankin评分、血清IL-1β、IL-6、TNF-α、CTX-Ⅰ、CTX-Ⅱ水平、细胞凋亡率、软骨组织MMP-3、MMP-13、磷酸化JAK3(p-JAK3)/JAK3、p-STAT3/STAT3蛋白相对表达显著低于模型组[(5.30±1.13)分比(12.90±2.36)分、(11.49±1.57)pg/ml比(28.61±3.85)pg/ml、(3.18±0.52)pg/ml比(7.59±1.16)pg/ml、(6.23±1.14)pg/ml比(16.83±1.94)pg/ml、(15.78±1.71)pg/ml比(28.53±3.65)pg/ml、(10.86±1.39)pg/ml比(19.61±2.37)pg/ml、(6.76±0.78)%比(21.83±1.84)%、(0.41±0.03)比(0.74±0.06)、(0.81±0.07)比(1.24±0.11)、(0.46±0.04)比(0.87±0.08)、(0.57±0.05)比(1.05±0.09),t=9.185、13.021、10.970、14.897、10.003、10.071、23.846、15.556、14.749、14.496、14.743,P<0.05];激活剂Colivelin可部分逆转虎杖苷对KOA大鼠软骨的保护作用。结论虎杖苷通过抑制JAK3/STAT3信号通路可降低炎性反应,进而改善膝骨关节炎大鼠软骨退变。

EGFR-TKI通过cGAS-STING信号通路对肺癌小鼠放疗远隔效应的影响

目的探讨表皮生长因子受体酪氨酸激活抑制剂(EGFR-TKI)通过环鸟苷酸-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子(cGAS-STING)信号通路对肺癌小鼠放疗远隔效应的影响。方法取部分对数生长期肺癌细胞(LLC1细胞)随机分为对照组和辐照组,对照组正常培养不干预,辐照组给予4 Gy的辐照量,2 Gy/min,每次辐照2 min,24 h后用实时聚合酶链反应检测细胞中cGAS-STING信号通路相关基因MB21D1、TMEM173、TBK1、IRF3、IRF5、IRF7、IFNAR1、IFNAR2、MX1、MX2、IFIT1、IFIT mRNA。将100μL对数生长期LLC1细胞悬液注射至小鼠腹股沟处皮下,制备双侧皮下荷瘤模型,将成瘤小鼠随机分为对照组、8 Gy组、EGFR-TKI组、8 Gy+EGFR-TKI组,每组3只。对照组不干预;8 Gy组给予8 Gy辐照3次,定位辐照小鼠左边瘤体;EGFR-TKI组给予EGFR-TKI灌胃1 mg/g,给药3次;8 Gy+EGFR-TKI组既进行辐照又给药干预。干预17 d后取小鼠右侧瘤体。用Western blotting法检测肿瘤组织中cGAS、STING、p-STING、Ⅰ型干扰素(IFN-1)蛋白,用免疫组化法检测肿瘤细胞增殖核抗原(ki67)及肿瘤微环境相关蛋白CD4、CD8、表皮生长因子受体(EGFR)、叉头状转录因子p3(Foxp3)、钙网蛋白(CRT)及主要组织相容性复合体(MHC)。结果与对照组比较,辐照组LLC1细胞MB21D1、TMEM173、TBK1、IRF3、IRF5、IFNAR1、IFNAR2、MX1、MX2、IFIT1、IFIT mRNA相对表达量高(P均<0.05),IRF7 mRNA相对表达量低(P<0.05)。干预17 d后,与对照组比较,各干预组肿瘤体积小、肿瘤重量低、ki67蛋白相对表达量低(P均<0.05),且8 Gy+EGFR-TKI组肿瘤体积、肿瘤重量、ki67蛋白相对表达量最低(P均<0.05)。与对照组比较,EGFR-TKI组cGAS、STING、p-STING、IFN-1蛋白相对表达量差异无统计学意义(P均>0.05);8 Gy组STING、IFN-1蛋白相对表达量差异无统计学意义(P均>0.05),cGAS、p-STING蛋白相对表达量高(P均<0.05);8 Gy+EGFR-TKI组cGAS、STING、p-STING、IFN-1蛋白相对表达量高(P均<0.05)。与8 Gy+EGFR-TKI组比较,8 Gy组和EGFR-TKI组cGAS、IFN-1、STING蛋白相对表达量低(P均<0.05)。与对照组比较,各干预组CD4、CD8、MHC蛋白相对表达量高(P均<0.05),EGFR、Foxp3、CRT蛋白相对表达量低(P均<0.05)。与8 Gy组比较,8 Gy+EGFR-TKI组CD4、CD8、MHC蛋白相对表达量高(P均<0.05),EGFR、CRT蛋白相对表达量低(P均<0.05)。与EGFR-TKI组比较,8 Gy+EGFR-TKI组CD4、CD8、MHC蛋白相对表达量高,EGFR、Foxp3、CRT蛋白相对表达量低(P均<0.05)。结论EGFR-TKI通过激活cGAS-STING信号通路改善肿瘤微环境的免疫功能,从而增强肺癌小鼠放疗远隔效应。

苦豆碱调节IL-6/JAK1/STAT3信号通路对结直肠癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:探讨苦豆碱(ALO)调节IL-6/酪氨酸激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路对结直肠癌(CRC)细胞行为的影响。方法:SW480分为CK组(正常培养的SW480细胞)、ALO低剂量组(ALO-L组,0.2 mmol/L)、ALO中剂量组(ALO-M组,0.4 mmol/L)、ALO高剂量组(ALO-H组,0.8 mmol/L)、ALO-H+激活剂(IL-6激活剂重组人IL-6蛋白)组(0.8 mmol/L+100 ng/ml)。CCK-8、平板克隆实验检测SW480细胞增殖;流式细胞术检测SW480细胞凋亡;Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、IL-6、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达。将自然杀伤细胞NK-92MI分别与上述5组细胞共培养,并依次命名为CK共培养组、ALO-L共培养组、ALO-M共培养组、ALO-H共培养组、ALO-H+激活剂共培养组,检测共培养细胞上清液中TNF-α、IFN-γ水平及共培养体系中NK-92MI的免疫杀伤率。结果:与CK组相比,ALO-L组、ALO-M组、ALO-H组OD_(450)值、克隆形成率、PCNA、IL-6、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达降低,细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,且呈剂量依赖性(P<0.05);与ALO-H组相比,ALO-H+激活剂组SW480细胞OD_(450)值、克隆形成率、PCNA、IL-6、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达升高,细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低(P<0.05);ALO-L共培养组、ALO-M共培养组、ALO-H共培养组上清中TNF-α、IFN-γ水平、NK-92MI细胞免疫杀伤率高于CK共培养组,且呈剂量依赖性(P<0.05);与ALO-H共培养组相比,ALO-H+激活剂共培养组上清中TNF-α、IFN-γ水平、细胞免疫杀伤率降低(P<0.05)。结论:ALO可能通过抑制IL-6/JAK1/STAT3信号通路抑制SW480细胞增殖、免疫逃逸,促进细胞凋亡。

IL-6/JAK2/STAT3信号通路在电针调控胰岛素抵抗模型大鼠骨代谢中的作用

目的研究电针对胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)大鼠骨代谢及炎症状态的影响。方法8只大鼠按照随机数字表单列为空白组,另外32只大鼠给予高脂饲料喂养8周以建立IR大鼠模型,选取造模成功的24只大鼠,随机分为模型组、假电针组、电针组,每组8只,空白组、假电针组不做干预,电针组选取“中脘”“关元”、“足三里”、“丰隆”4穴进行电针治疗,假电针组选取上述4穴旁边的皮下后不进行电针治疗,各组均治疗8周。在治疗前后,测量各组大鼠的体质量(body mass,BM)、空腹血糖(fasting blood-glucose,FBG)及餐后血糖水平(postprandial blood-glucoser,PBG)、葡萄糖输注速率(glucose infusion rate,GIR);各组大鼠血清中Ⅰ型胶原氨基端前肽(N-terminal propeptide of typeⅠcollagen,P1NP)、β-Ⅰ型胶原C末端肽(C-terminal telopeptides of typeⅠcollagen,β-CTX)含量用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测;大鼠骨组织的骨密度(bone mineral density,BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(trabecularNumber,Tb.N)和骨小梁分离度(trabecularSeparation/Spacing,Tb.Sp)采用微计算机断层扫描技术(micro CT)检测;骨组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、Janus蛋白酪氨酸激酶2(Janus Protein Tyrosine Kinase2,JAK2)、信号转导与转录活化因子3(Signal Transducers and Activators of Transcription 3,STAT3)mRNA及蛋白的表达分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测。结果治疗前与空白组相比,模型组、假电针组、电针组大鼠BMD、PBG值明显升高(P<0.01或P<0.05),GIR明显降低(P<0.01);治疗结束后,与空白组相比,电针组大鼠BM、FBG、PBG、β-CTX、IL-6、JAK2、STAT3 mRNA及蛋白浓度明显升高(P<0.01),GIR、P1NP、BMD、BV/TV、Tb.N和Tb.Sp明显降低(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠的BM、PBG、β-CTX、IL-6、JAK2、STAT3 mRNA及蛋白浓度均明显降低,BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Sp、GIR均明显升高(P<0.05或P<0.01);假电针组大鼠BM、PBG、JAK2 mRNA、STAT3蛋白表达明显降低(P<0.05),而P1NP、β-CTX、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Sp、IL-6、STAT3 mRNA、IL-6、JAK2蛋白表达均无统计学差异(P>0.05)。结论电针能够通过调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路降低机体炎症反应改善胰岛素抵抗,并能一定程度的降低机体破骨细胞活性,减少骨吸收。

PIM1基因对急性髓系白血病U937细胞增殖、凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:探讨PIM1基因对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡的影响,以及对JAK2/STAT3通路的调控作用。方法:收集初诊成人AML患者和单纯缺铁性贫血患者的骨髓单个核细胞,荧光定量PCR检测PIM1 mRNA表达。将AML细胞系U937细胞分为:U937组(U937细胞正常培养)、Si-PIM1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、Si-NC组(U937细胞转染不含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、CoA1组(U937细胞中加入浓度为20μmol/L的JAK2激活剂CoA1)、Si-PIM1+CoA1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA低表达的腺病毒载体并加入浓度为20μmol/L的CoA1)。培养24 h。荧光定量PCR和蛋白印迹法检测U937细胞PIM1 mRNA和蛋白、JAK2/STAT3通路、细胞周期、凋亡相关蛋白表达;噻唑蓝法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率。结果:AML患者骨髓单个核细胞中PIM1 mRNA表达水平高于单纯缺铁性贫血患者(P<0.05)。与U937组相比,Si-PIM1组细胞PIM1 mRNA和蛋白、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Cyclin D1、CDK2蛋白、细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例降低(均P<0.05),p27、Caspase-3蛋白、G0/G1期、凋亡率升高(均P<0.05),而CoA1组上述指标的变化情况与Si-PIM1组正好相反,CoA1可逆转Si-PIM1对U937细胞的作用效果。U937组、Si-PIM1+CoA1组、Si-NC组U937细胞上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低PIM1基因表达可抑制U937细胞增殖、促进凋亡,缓解ALM进程,且上述作用可能与抑制JAK2/STAT3通路活化有关。

负显突变体细胞因子信号转导抑制物-1增强干扰素-γ体外抗柯萨奇病毒活性

目的病毒性心肌炎(VM)细胞模型JAK/STAT1信号通路的特异性内源抑制物细胞因子信号转导抑制物-1(SOCS1)及其负显突变体SOCS1(dnSOCS1)对IFN-γ抗CVB3活性影响。方法构建pEGFP-C1-SOCS1及pEGFP-C1-dnSOCS1的真核表达载体,以脂质体法转染至心肌细胞后,加用IFN-γ刺激细胞并感染病毒,采用荧光显微镜检测心肌细胞中SOCS1和dnSOCS1表达,同时利用Westernblot法测定不同条件下STAT1表达水平并测定病毒滴度。结果与转染dnSOCS1组比较,转染SOCS1组病毒滴度高,而心肌细胞存活率低,心肌细胞搏动时间短。另外在dnSOCS1组磷酸化STAT1的表达更明显。结论dnSOCS1可增强IFN-γ体外抗病毒活性。SOCS1可为我们治疗VM提供一个新的治疗靶点。

氧化苦参碱和苦参碱通过调控酪氨酸激酶-信号转导及转录激活因子信号通路对肝癌细胞SMMC-7721增殖凋亡的影响

目的观察苦参碱和氧化苦参碱对肝癌细胞SMMC-7721增殖凋亡及酪氨酸激酶（JAK）-信号转导及转录激活因子（STAT）通路的影响。方法应用苦参碱和氧化苦参碱干预肝癌细胞SMMC-7721，通过噻唑蓝（MTT）法检测对苦参碱和氧化苦参碱肝癌细胞增殖的影响，采用双荧光染色观察苦参碱和氧化苦参碱干预肝癌SMMC-7721细胞凋亡率的变化，并以反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测苦参碱和氧化苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞STAT3、STAT5 mRNA的影响。结果（1）随着苦参碱和氧化苦参碱药物浓度和作用时间增加，细胞增殖抑制率上升，苦参碱和氧化苦参碱作用各时间组的细胞增殖抑制率与作用浓度呈显著正相关（r＝0.851～0.989），苦参碱和氧化苦参碱各浓度组不同作用时间比较细胞增殖抑制率差异有统计学意义。（2）在双荧光检测中，活细胞被吖啶橙（AO）染成绿色，凋亡细胞则被溴乙锭（EB）染成橘红色。苦参碱2.5 mg/ml作用48 h组凋亡率为52.1%，氧化苦参碱2.5 mg/ml作用48 h组凋亡率为29.6%，这说明相同浓度苦参碱比氧化苦参碱作用显著（χ2＝9.100，P＝0.003）。（3）不同浓度苦参碱和氧化苦参碱作用于肝癌SMMC-7721细胞后，STAT3、STAT5 mRNA表达量均明显下降，与用药前比较差异有统计学意义。STAT3、STAT5 mRNA在对照组细胞中的表达是0.76±0.06和0.72±0.04，在苦参碱1.0 mg/ml组的表达是0.50±0.04和0.43±0.03，在苦参碱2.5 mg/ml组的表达是0.25±0.03和0.22±0.04，在氧化苦参碱1.0 mg/ml组的表达是0.64±0.03和0.60±0.06，在氧化苦参碱2.5 mg/ml组的表达是0.49±0.06和0.41±0.06。相同浓度苦参碱和氧化苦参碱比较，苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞STAT3、STAT5 mRNA的影响更显著，差异有统计学意义。结论苦参碱和氧化苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞增殖、促进其凋亡，其机制可能与下调STAT3、STAT5的基因表达，抑制细胞信号转导通路有关。

针加灸对阿尔茨海默病大鼠海马区蛋白酪氨酸激酶-2/信号转导和转录激活因子-3信号通路的影响

目的:通过观察针加灸对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马区蛋白酪氨酸激酶-2(JAK2)、信号转导和转录激活因子-3(STAT3)、细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS3)的影响,探讨针加灸治疗AD的作用机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、治疗组,每组15只。采用双侧海马注射5!L Aβ1-42法(1!L/min)制备AD大鼠模型。治疗组予针刺加艾灸"百会"、双侧"肾俞"穴进行治疗,15min/次,每日1次,5次为1个疗程,共治疗4个疗程,每个疗程期间休息2d。治疗结束后Morris水迷宫实验检测各组大鼠记忆和空间探索能力,免疫组化法和Western blot法分别测定各组大鼠海马区JAK2、STAT3、SOCS3的阳性细胞数及蛋白表达水平。结果:与对照组和假手术组比较,模型组大鼠平均逃避潜伏期明显延长(P<0.01),跨越原平台次数和在安全象限平台停留时间明显缩短(P<0.01);与模型组比较,治疗组大鼠平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),跨越原平台次数和安全象限平台停留时间明显延长(P<0.01)。与对照组和假手术组比较,模型组大鼠海马区JAK2、STAT3阳性细胞数及蛋白表达明显增多(P<0.01),SOCS3阳性细胞数及蛋白表达明显减少(P<0.01);与模型组比较,治疗组大鼠海马区JAK2、STAT3阳性细胞数及蛋白明显减少(P<0.01),SOCS3阳性细胞数及蛋白表达明显增多(P<0.01)。结论:JAK2/STAT3信号通路和负反馈因子SOCS3均参与了AD发病的病理过程,针灸可能通过上调SOCS3来抑制JAK2/STAT3信号通路,降低其活化,减少慢性炎性反应发生发展,从而提高AD大鼠学习记忆能力,达到治疗AD的作用。

表皮生长因子受体基因沉默介导酪氨酸激酶/信号转导与转录激活因子信号通路对胶质瘤细胞凋亡的调控机制

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因介导酪氨酸激酶(JAK)/信号转导与转录激活因子(STAT)信号通路对胶质瘤细胞凋亡的调控机制。方法收集甘肃省人民医院2017年1月至2019年6月胶质瘤患者手术切除的胶质瘤组织及瘤旁组织。细胞进行细胞分组与转染,分成7组:Blank组、NC组、oe-EGFR组、小干扰RNA(siRNA)-EGFR组、Gefitinib组、NSC 228155组和siRNA-EGFR+NSC 228155组。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)法检测胶质瘤组织和转染后各组细胞中EGFR、JAK1、STAT3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax) mRNA和蛋白的表达。噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术分别检测各组细胞转染后细胞增殖与凋亡。两组间比较采用Student’st检验,多组间比较应用单因素方差分析。结果胶质瘤组织中的EGFR、JAK1、STAT3、bcl-2 mRNA(EGFR:t=13.630,P<0.01;JAK1:t=16.650,P<0.01;STAT3:t=17.420,P<0.01;bcl-2:t=17.010,P<0.01)和蛋白(EGFR:t=15.590,P<0.01;JAK1:t=11.680,P<0.01;STAT3:t=9.295,P<0.01;bcl-2:t=13.960,P<0.01)表达量显著高于癌旁组织,而Bax mRNA(t=21.480,P<0.01)和蛋白(t=10.950,P<0.01)表达量显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(均P<0.05)。Blank组和NC组组间差异无统计学意义(均P>0.05);siRNA-EGFR组和Gefitinib组Bax mRNA(F=48.300,P<0.01)和蛋白(F=28.330,P<0.01)表达量显著高于NC组,而EGFR、JAK1、STAT3、bcl-2 mRNA(EGFR:F=138.000,P<0.01;JAK1:F=234.300,P<0.01;STAT3:F=106.300,P<0.01;bcl-2:F=186.500,P<0.01)和蛋白(EGFR:F=63.540,P<0.01;JAK1:F=61.720,P<0.01;STAT3:F=54.660,P<0.01;bcl-2:F=77.480,P<0.01)表达量显著低于NC组,细胞增殖能力明显低于NC组(24 h:F=23.650,P<0.01;48 h:F=44.450,P<0.01;72 h:F=32.160,P<0.01),而细胞凋亡明显高于NC组(F=50.810,P<0.01),差异有统计学意义(均P<0.05);oe-EGFR组和NSC 228155组各因子和指标趋势逆转,差异有统计学意义(均P<0.05);而siRNA-EGFR+NSC 228155组各因子和指标与NC组相比差异无统计学意义(均P>0.05)。结论沉默EGFR表达,抑制JAK/STAT信号通路的激活,有助于抑制胶质瘤细胞增殖,并促进细胞凋亡。

他克莫司激活JAKs/STATs信号通路对川崎病小鼠血管内皮功能及心肌细胞凋亡的影响

目的:观察他克莫司通过激活酪氨酸激酶(JAKs)/信号转导因子和转录激活因子(STATs)信号通路对川崎病小鼠血管内皮功能及心肌细胞凋亡的影响。方法:选取健康级小鼠40只,适应性喂养1周后分为正常组、模型组、阿司匹林组、他克莫司组,每组10只小鼠。除正常组10只小鼠外,其余30只小鼠均建立川崎病模型。建模成功后,正常组和模型组分别采用相应体积的0.5%羧甲基纤维素钠水溶液灌胃,阿司匹林组采用阿司匹林50 mg/kg灌胃,他克莫司组采用他克莫司40 mg/kg灌胃。应用超声心动图测定小鼠心脏功能,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测川崎病小鼠血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达,采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠病理组织,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测小鼠心肌细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测JAK2、STAT3蛋白表达。结果:正常组小鼠心脏舒张功能正常、无障碍产生;模型组小鼠出现心脏舒张功能障碍,左室舒张末期内径(LVEDD)增加,左室射血分数(LVEF)降低;他克莫司组LVEF有所提升,LVEDD相对减少;阿司匹林组心脏舒张功能略微缓解,LVEF、LVEDD等略显改善。与正常组比较,模型组TNF-α、IL-6、VEGF表达升高(P<0.05);与模型组比较,他克莫司组TNF-α、IL-6、VEGF表达降低(P<0.05);与他克莫司组比较,阿司匹林组TNF-α、IL-6、VEGF表达升高(P<0.05)。正常组小鼠心肌纤维排列整齐,细胞排列有序紧密,细胞核呈卵圆形,细胞质鲜红;模型组小鼠心肌纤维排列紊乱且心肌组织断裂和溶解,间质纤维化和组织坏死,细胞排列紊乱,出现水肿和坏死等,细胞核大小不均匀并有炎性浸润;他克莫司组心肌断裂组织及溶解现象有所缓解,细胞核排列趋于整齐,分布趋于有序、紧密;阿司匹林组心肌纤维排列紊乱现象有所缓解,部分区域仍有溶解及断裂现象。与正常组比较,模型组小鼠心肌细胞凋亡率升高(P<0.05);与模型组比较,他克莫司组小鼠心肌细胞凋亡率降低(P<0.05);与他克莫司组比较,阿司匹林组小鼠心肌细胞凋亡率升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组JAK2、STAT3蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,他克莫司组JAK2、STAT3蛋白表达升高(P<0.05);与他克莫司组比较,阿司匹林组JAK2、STAT3蛋白表达降低(P<0.05)。结论:他克莫司可改善川崎病小鼠心脏功能及内皮功能,减轻心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调控JAK2/STAT3信号通路有关。

miR-373调控JAK3/STAT6信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞M2极化对肺癌细胞的影响

目的:探究miR-373调控JAK3/STAT6信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)M2极化对肺癌细胞的影响。方法:利用佛波酯及IL-4诱导M2-TAMs分化;将miR-NC和miR-373分别转染M0/M2-TAMs并检测M2-TAMs特征性基因mRNA和miR-373水平;将M0/M2-TAMs与A549、H1299细胞共培养;CCK-8、划痕实验、Transwell实验分别检测肺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力;双荧光素酶实验验证miR-373与JAK3的调控关系;RT-qPCR检测细胞JAK3、STAT6 mRNA水平;Western blot检测细胞Ki67、MMP-2/9、p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6水平。30只裸鼠尾静脉注射已转染慢病毒的A549细胞悬液;检测裸鼠肺组织病理变化;RT-qPCR检测肺组织JAK3、STAT6 mRNA水平;Western blot检测CD31、VEGFA、M2-TAMs特征性基因及pJAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平。结果:成功诱导M2-TAMs中CD206及IL-10、Mrc1、Arg1、Ym1、Fizz1、CCL2 mRNA表达增加;与M2+miR-NC组相比,M2+miR-373组IL-10、Mrc1、Arg1、Ym1、Fizz1、CCL2 mRNA和Ki67、MMP-2/9蛋白表达明显降低,A549、H1299细胞增殖、侵袭和迁移能力明显降低(P<0.05);JAK3、STAT6 mRNA和p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平明显降低(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-373组裸鼠肺部病理损伤明显缓解;M2-TAMs特征性基因蛋白水平明显降低;JAK3、STAT6 mRNA和p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论:miR-373通过抑制JAK3/STAT6信号通路抑制TAMs向M2极化,从而抑制肺癌细胞增殖、侵袭、转移和血管生成。

酪氨酸激酶-信号转导和转录激活因子信号通路参与神经病理性疼痛的研究进展

背景神经病理性疼痛（neuropathic pain，NP）是一种最常见的、最棘手的慢性疼痛之一。酪氨酸激酶信号转导和转录激活因子（janus kinases-signal transducer and activators of transcription, JAKs-STATs）信号通路是介导细胞反应的重要信号通路系统，近年有研究表明JAKs-STATs信号通路参与NP。目的探讨JAKs-STATs信号通路参与NP的机制。内容分别从JAKs-sTATs信号通路生物学特性、JAKs-STATs信号通路对NP调节机制的研究现状进行综述。趋向为更好地治疗NP提供理论依据。

基于JAK-STAT信号通路探讨首乌益智胶囊对血管性认知障碍神经保护机制

目的探讨首乌益智胶囊治疗血管性认知障碍(VCI)的功效及作用机制。方法随机将SD大鼠分为假手术组、VCI模型组、尼莫地平组、首乌益智胶囊组,通过Morris水迷宫实验观察空间学习及记忆能力,透射电镜观察海马神经元细胞结构,Western印迹检测海马区p-Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK2)、JAK2、p-信号转录与转录激活因子(STAT)3、STAT3蛋白表达。结果水迷宫实验显示,与尼莫地平组相比,首乌益智胶囊组逃避潜伏期显著缩短,过站台次数显著增加(P<0.01)。透射电镜观察发现,与尼莫地平组比较,首乌益智胶囊组神经元结构更加完整,胞质内细胞器更加丰富。Western印迹检测发现,与模型组及尼莫地平组相比,首乌益智胶囊组海马区p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白表达显著提高(P<0.01,P<0.05)。结论首乌益智胶囊通过调节JAK-STAT信号通路保护大鼠海马神经元免受缺血再灌注损伤,抑制神经元凋亡,从而改善VCI大鼠的学习与认知能力。

JAK/STAT信号转导通路与多发性骨髓瘤

多发性骨髓瘤(MM)是一种血液系统恶性肿瘤,其发病机制涉及骨髓瘤细胞与骨髓微环境间的相互作用、细胞因子的作用以及遗传学异常等方面,目前尚缺乏有效的治疗措施。酪氨酸蛋白激酶/信号传导及转录激活因子(JAK/STAT)信号通路与MM的发生、发展及治疗密切相关。研究JAK/STAT信号通路的组成分子和活化方式,探究该通路信号分子与MM发病以及疾病进展之间的关系将为进一步了解MM的发病机制提供帮助,同时有利于寻找新的药物治疗靶点。

活性维生素D通过维生素D受体调控细胞因子信号转导抑制分子、酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3通路在糖尿病肾脏疾病中作用的研究

目的探讨活性维生素D(VitD)通过维生素D受体(VDR)调控细胞因子信号转导抑制分子(SOCS)、酪氨酸激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路在DKD中的作用及可能机制。方法构建DKD小鼠及沉默VDR基因的DKD小鼠模型,随机分为DKD组、低浓度VitD3干预组(L⁃VitD3)、高浓度VitD3干预组(H⁃VitD3)、慢病毒转染沉默VDR基因表达组(Lenti⁃shVDR)、低浓度VitD3+慢病毒转染组(Lenti⁃shVDR+L⁃VitD3)、高浓度VitD3+慢病毒转染组(Lenti⁃shVDR+H⁃VitD3)。饲养期间每天观察小鼠一般行为学变化,每3~4 d监测BG及体重,第1、4、8周测24小时尿蛋白(24 hUP),HE染色观察肾脏病理改变,Western blot法检测肾脏组织中JAK2、磷酸化JAK2(p⁃JAK2)、STAT3、p⁃STAT3、SOCS1和SOCS3蛋白表达水平。结果与DKD组比较,L⁃VitD3、H⁃VitD3组体重、BG和24 hUP降低(P<0.05),H⁃VitD3组BG和24 hUP低于L⁃VitD3组(P<0.05),Lenti⁃shVDR组24 hUP升高(P<0.05)。DKD组肾小球增大伴系膜基质增生,L⁃VitD3、H⁃VitD3组病变减轻;与DKD组比较,Lenti⁃shVDR组肾小球病变加重,Lenti⁃shVDR+L⁃VitD3、Lenti⁃shVDR+H⁃VitD3组病变较Lenti⁃shVDR组稍减轻。与DKD组比较,L⁃VitD3、H⁃VitD3组p⁃STAT3、SOCS1和SOCS3蛋白表达均降低(P<0.05);JAK2蛋白表达在L⁃VitD3组降低(P<0.05)。与DKD组比较,Lenti⁃shVDR组JAK2、p⁃STAT3、SOCS1和SOCS3蛋白表达均增加(均<0.01)。与Lenti⁃shVDR组比较,Lenti⁃shVDR+H⁃VitD3组JAK2、p⁃STAT3、SOCS1和SOCS3蛋白表达降低(P<0.01)。结论VitD可降低DKD小鼠尿蛋白,改善肾脏病理损伤,延缓肾损害。JAK2/STAT3/SOCS途径可能参与DKD进展,沉默VDR基因后可减弱活性VD对JAK/STAT通路激活的影响,提示活性VitD调控SOCS和JAK/STAT通路可能通过特异性受体VDR介导。

lncRNA ARAP1-AS2通过JAK2/STAT3信号通路对小鼠糖尿病肾病的影响

目的探讨lncRNA锚蛋白重复和pH结构域/反义RNA(ARAP1-AS)2通过酪氨酸激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路对糖尿病肾病的影响及其机制。方法将MPC-5细胞分为对照组、高糖组、高糖+pcDNA3.1组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2组、高糖+AG490组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2+AG490组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测MPC-5细胞凋亡率;Western印迹检测细胞增殖核抗原KI67、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3、酪氨酸激酶(JAK)2、磷酸化(p)-JAK2、信号转导和转录激活因子(STAT)3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ARAP1-AS2和突触孔蛋白(Synaptopodin)、结蛋白(Desmin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA的表达水平。结果与对照组比较,高糖诱导的MPC-5细胞的存活率及KI67表达水平明显降低,细胞凋亡率及Caspase3表达水平明显升高,Synaptopodin mRNA表达水平明显降低,Desmin mRNA、Vimentin mRNA表达水平明显升高,p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3表达水平明显升高,ARAP1-AS2表达水平明显降低(P<0.05);过表达ARAP1-AS2后,高糖诱导的MPC-5细胞的存活率及KI67表达水平明显升高,细胞凋亡率及Caspase3表达水平明显降低,Synaptopodin mRNA表达水平明显升高,Desmin mRNA、Vimentin mRNA表达水平明显降低,p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3表达水平明显降低(P<0.05)。JAK2/STAT3信J号通路抑制剂AG490增强了ARAP1-AS2对高糖诱导的足细胞增殖、凋亡及Synaptopodin、Desmin、Vimentin表达的影响。结论过表达lncRNA ARAP1-AS2可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路促进MPC-5细胞存活,抑制高糖诱导的足细胞损伤。