基于PTPN22干扰的艾灸对实验性类风湿性关节炎家兔滑膜细胞JAK1-STAT4信号通路的影响

目的:研究艾灸对实验性类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大耳白兔滑膜组织非受体22型蛋白酪氨酸磷酸酶基因(protein tyrosine phosphatase,nonreceptor type 22,PTPN22)、JAK1及STAT4表达的影响,探索慢病毒介导的PTPN22干扰对艾灸治疗实验性RA大耳白兔滑膜细胞JAK1-STAT4信号通路的影响。方法:日本大耳白兔随机分为对照组、模型组、艾灸组、PTPN22干扰组,6只/组。将FCA按0.5 mL/kg注入模型组、艾灸组及PTPN22干扰组动物双后腿膝关节腔内造模,对照组同法注入无菌生理盐水。将慢病毒介导的PTPN22 RNAi作为干预手段,艾灸组及PTPN22干扰组动物双侧“肾俞”“足三里”穴进行小艾炷灸治疗。治疗前后测量各大耳白兔左、右膝关节周长,治疗第21天行滑膜取材,采用RT-PCR法检测滑膜组织PTPN22 mRNA、JAK1 mRNA及STAT4 mRNA表达;采用Western blot法检测滑膜组织PTPN22蛋白表达情况。结果:与对照组相比,模型组大耳白兔双膝关节周长、JAK1 mRNA及STAT4 mRNA的表达升高(P<0.05),PTPN22 mRNA及蛋白的表达降低(P<0.05);与模型组相比,艾灸组大耳白兔双膝关节周长、JAK1 mRNA及STAT4 mRNA的表达降低(P<0.05),PTPN22 mRNA及蛋白的表达升高(P<0.05);与艾灸组相比,PTPN22干扰组大耳白兔双膝关节周长、JAK1 mRNA及STAT4 mRNA的表达升高(P<0.05),PTPN22 mRNA及蛋白的表达降低(P<0.05)。结论:艾灸可能通过PTPN22途径良性调控RA中JAK-STAT通路异常激活的JAK1与STAT4基因表达水平,负向调节JAK1-STAT4信号通路而达到抗炎治疗效应,其对JAK1-STAT4信号通路的调控可能是艾灸治疗RA抗炎效应实现的途径之一。

PTPN22基因多态性与儿童血小板减少性紫癜易感性的关联分析

【目的】分析非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶22（PTPN22）基因多态性与儿童血小板减少性紫癜（ITP）易感性的关联性。【方法】通过复合PCR和基质辅助激光解电离析飞行时间质谱（PCR—MALDI-TOF-MS）法对120例ITP患儿（观察组）及80例正常儿童（对照组）PTPN22基因-1123G〉C（rs2488457）测定。【结果】观察组PTPN22—1123G〉C等住基因中C频率62．50％，较对照纽的71．25％差异有统计学意义（P〈0．05）；两组基因型比较差异无统计学意义（P〉0．05）；观察组与对照组男童等位基因频率比较差异显著（P〈0．05），女童比较无显著差异（P〉0．05），两组同一性别基因型比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。【结论】PTPN22-1123G〉C多态性与儿童ITP易感性有关，C为优势等位基因，G为风险等位基因，PTPN22—1123G〉C等位基因频率分布可能与儿童性别相关。

PTPN 22基因单核苷酸多态性与免疫性血小板减少症的相关性研究进展

蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型（PTPN）22基因单核酸多态性（SNP）与多种自身免疫性疾病相关，且该基因被认为是除主要组织相容性抗原复合物（MHC）外最重要的人类自身免疫性疾病的易感基因。免疫性血小板减少症（ITP）是一种获得性器官特异性自身免疫性疾病，临床特征主要为广泛的皮肤黏膜淤点淤斑及内脏出血、血小板减少、骨髓巨核细胞发育成熟障碍等。本文聚焦于PTPN 22基因SNP与ITP的相关性研究进展，旨在探讨ITP在基因水平上的发病机制。

circ-PTPN22在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的翻译及意义

目的探讨circ-PTPN22的翻译能力及其与系统性红斑狼疮(SLE)的关系。方法2019年5月10日至2019年9月30日分别于西南医院中西医结合风湿免疫科和体检中心收集6例SLE女性患者和9例健康女性对照全血样本,分离外周血单个核细胞(PBMC),其中3例SLE和3例健康对照PBMC采用磁珠分选为T、B、NK细胞。通过circRNADb网站预测出circ-PTPN22内部核糖体进入位点(IRES)序列及蛋白序列,制备针对circ-PTPN22剪接位点处特异氨基酸序列的兔抗circ-PTPN22pro多克隆抗体,Western印迹法检测健康对照和SLE患者PBMC以及T、B、NK细胞亚群中circ-PTPN22pro的表达。将circ-PTPN22-FLAG、circ-PTPN22-NC-FLAG、circ-PTPN22-shRNA-FLAG、circ-PTPN22-shRNA-NC-FLAG重组慢病毒分别转染培养的Jurkat细胞,以正常培养的细胞作为细胞对照组,Western印迹法检测Jurkat细胞中circ-PTPN22pro蛋白表达,流式细胞仪检测circ-PTPN22对细胞活化和凋亡的影响。采用两因素重复测量方差分析和两独立样本t检验进行统计分析。结果circRNAD数据库预测显示,circ-PTPN22具有翻译能力,且Western印迹显示circ-PTPN22pro蛋白相对分子质量为20000。转染48 h后,circ-PTPN22-FLAG组circ-PTPN22pro表达明显高于circ-PTPN22-NC-FLAG组和细胞对照组。转染24、48、72 h,circ-PTPN22组白细胞介素2(IL-2)表达(22.20%±8.92%、31.10%±5.88%、53.20%±10.25%)均低于circ-PTPN22-NC组(30.90%±11.00%、51.23%±10.70%、69.67%±9.00%;F=284.881,P=0.003);circ-PTPN22-shRNA组IL-2表达(35.57%±8.79%、78.10%±10.08%、88.63%±3.89%)均高于circ-PTPN22-shRNA-NC组(26.73%±4.92%、41.03%±10.45%、41.33%±4.96%;F=293.818,P=0.003)。转染48、72、96 h后,circ-PTPN22组、circ-PTPN22-shRNA组细胞凋亡率均分别高于circ-PTPN22-NC组(F=81.287,P=0.012)、circ-PTPN22-shRNA-NC组(F=111.813,P=0.009)。SLE组PBMC中circ-PTPN22pro表达低于健康对照组,几乎不表达。SLE组T、B细胞中circ-PTPN22pro表达均显著低于健康对照组(t=3.047、4.806,P<0.05),两组NK细胞中circ-PTPN22pro表达差异无统计学意义(t=0.582,P>0.05)。结论circ-PTPN22可翻译circ-PTPN22pro蛋白,具有抑制Jurkat细胞活化功能,SLE患者PBMC中circ-PTPN22pro表达低于健康对照,提示其与SLE发生发展可能存在一定关系。