一种从非变性聚丙烯凝胶中回收小片段DNA的方法

利用高分辨率的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、纯化特异性小片段DNA的首选方法,也是开展后续多种分子生物学试验的前提。本试验比较了改良煮沸法(液氮研磨+煮沸+低温浓缩)、煮沸法及直取法回收小片段DNA,以回收样品模板进行第二次PCR扩增,结果表明:改良方法回收的DNA的纯度高,特异性好,回收率与经典煮沸法相当。在保证回收产物的特异性时,用低温浓缩法替代乙醇/醋酸钠共沉淀也具有可行性及一定的创新性。

一种快速有效检测SSR标记的非变性聚丙烯酰胺凝胶的银染方法

聚丙烯酰胺凝胶银染法是一种具有高分辨率检测SSR标记的有效方法，然而传统的银染方法存在操作步骤较多、所需时间较长及试剂种类与用量较多等不足．本研究利用菜心和烟草SSR标记为研究对象，建立一种能快速有效检测其PCR扩增产物的非变性聚丙烯酰胺凝胶的银染方法．该方法包括染色和显影2个主要操作步骤，整个银染流程耗时6～7min，只需要AgNO3、NaOH和甲醛3种试剂，所检测SSR标记的DNA条带清晰、易辨．与其他银染法相比，本研究建立的银染法具有易于操作、耗时少、所需试剂种类和用量少及检测效果好的优势．

从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA小片段的两种方法比较

从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段是分子生物学中的常用技术,尤其针对于DNA小片段的回收。本试验对比了两种从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA小片段的方法(煮沸法和水浴法),并用无水乙醇和3mol/L醋酸钠共沉淀纯化DNA小片段。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测回收结果,通过紫外检测进行定量分析,结果显示:水浴法比煮沸法的回收率高。水浴法结合乙醇沉淀法还具有经济和操作简单的优点,可以广泛应用。

从非变性聚丙烯酰胺凝胶回收纯化DNA样本

介绍一种从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收和纯化目标DNA片段的方法,经比较回收纯化前后PCR产物的电泳结果,表明该方法具有简单快捷和效率高的优点。

碱性强弱染色非变性聚丙烯酰胺凝胶对微卫星DNA检测效果的影响

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳常用于分离不同分子质量和空间构象的DNA或RNA等生物大分子,由于分辨率可以达到2个碱基对,因此非变性聚丙烯酰胺凝胶对于微卫星DNA有很好的检测效果。利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对黄牛微卫星DNA的检测表明:碱性强弱的控制对于染色的效果和效率有显著的影响。弱碱性环境下,具有背景浅、条带明显和检测灵敏度高的优势,但是染色过程较复杂繁琐,适合于少量样品的精细检测;在强碱性环境下,对于微卫星DNA的灵敏度相对弱碱性环境下降低,但是染色过程简便、快捷且成本相对较低,适合于大规模样品的检测。

从非变性聚丙烯酰胺凝胶中快速高效回收DNA片段

获得特异性的DNA是开展多种分子生物学试验的前提,具有高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳是纯化特异性DNA的首选。借助液氮对凝胶的固化作用,介绍了通过研磨破坏聚丙烯酰胺凝胶结构回收纯化DNA的方法。将通过该方法回收纯化的DNA和采用琼脂糖凝胶电泳回收纯化的DNA,经由聚丙烯酰胺凝胶电泳的进一步检测,结果显示,该方法与琼脂糖凝胶电泳回收法相比,所获得DNA的纯度高,特异性好,且效率相当。在提高DNA特异性的同时也兼具了经济高效耗时少等优点,可以广泛应用。

一种高效省本的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法的建立——以水稻为例

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染技术已广泛用于DNA片段检测。介绍一种本实验室改进的高效省本的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染方法,该法将固定和染色两步骤合并,整个银染过程只需16 min即可完成。同时,该法无需使用无水乙醇和冰乙酸,减少了硝酸银、氢氧化钠及甲醛的使用量。

微卫星DNA非变性PAGE银染法的分析探讨

微卫星DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),是一种常用的DNA检测手段,具有很好的分离微小差异DNA片段的能力,而银染法使该方法得到了广大科研工作者的青睐,但是,在染色过程中,常可能出现一些问题,令结果的判断难以达到满意的效果。为此,对该方法进行了一系列的分析和探讨。

大肠杆菌(Escherichia coli)体外脂肪酸合成反应的重建

PCR扩增大肠杆菌参与脂肪酸合成的7个主要酶基因:fabD、fabG、fabH、fabA、fabZ、fabB和fabI,并构建相应的表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中分别诱导表达酶蛋白,并使用Ni-NTA琼脂糖纯化到7种酶蛋白.体外添加所需酶蛋白和辅因子,在不使用[2-14C]丙二酸单酰CoA的条件下,成功地实现了脂肪酸合成反应的重建,另外还建立了数个鉴定有关酶蛋白功能的标准反应,并用其鉴定了丙酮丁醇梭菌FabZ的功能.

高粱微卫星两种PAGE银染方法的比较

实验比较了高粱SSR-PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳2种改良银染方法,为初次实验时选择银染方法提供参考。采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,对高粱抗丝黑穗病(恢复系分离群体2381R/矮四)SSR-PCR产物进行检测,分别利用改良过的硝酸银染色方法和改良过的银氨染色方法进行染色,分析2种染色方法的特点。实验结果表明,改良过的硝酸银染色具有操作时间较短、背景颜色浅等优点,适合大量筛选引物时的染色方法;改良过的银氨染色方法具有灵敏度高,显像效果好等优点,适用于基因定位等研究。为今后利用SSR-PCR标记技术研究分析高粱抗丝黑穗病奠定了基础。

烟蚜2种微卫星标记银染方法的比较

实验比较了烟蚜SSR-PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳2种改良银染方法,目的是为初用者在选择银染方法时提供参考。用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测烟蚜SSR-PCR的产物,结果表明银染方法2灵敏度高、简便省时,更适于对烟蚜遗传多样性的研究。

PCR-RFLP法直接检测分枝杆菌皮肤感染的临床应用

目的:评价分枝杆菌热休克蛋白65(Hsp65)基因检测分枝杆菌皮肤感染标本的敏感性和特异性。方法:多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-砒LP)的10%非变性聚丙烯酰胺凝胶法直接检测Hsp65基因,PCR-RFLP检测阳性的标本再经Hsp65基因和16S rRNA DNA基因测序验证。结果:与培养法相比,PCR-RFLP法检测临床分枝杆菌皮肤感染的敏感性为30%(3/10),特异性为100%(10/10)。结论:分枝杆菌PCR-RFLP的10%非变性聚丙烯酰胺凝胶法可用于分枝杆菌皮肤感染的临床检测。