非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测新疆特种乳中掺加的牛乳

新疆特种乳资源丰富,具有重要的商业价值。近年来乳制品掺假问题时有发生,准确鉴别特种乳中乳源动物成分,防止牛乳掺假具有重要的意义。本研究采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)对驼乳、马乳、驴乳、山羊乳与牛乳等特种乳的乳清蛋白及酪蛋白进行乳间差异性分析,建立基于牛乳特征蛋白质多态性的检测方法,并研究不同热处理工艺对检测方法稳定性、灵敏度的影响。结果表明,牛β-乳球蛋白可作为特种乳中掺加牛乳的检测靶标,热处理会使样品中蛋白质发生变性,导致掺加牛乳检出限的升高。基于牛β-乳球蛋白的条带强度与牛乳掺加百分比建立回归方程,相关系数为0.9779~0.9998,定量范围在5%~100%之间。本研究为新疆特种乳中掺加牛乳的检测,提供了一种准确、灵敏和经济的方法。

一种快速有效检测SSR标记的非变性聚丙烯酰胺凝胶的银染方法

聚丙烯酰胺凝胶银染法是一种具有高分辨率检测SSR标记的有效方法，然而传统的银染方法存在操作步骤较多、所需时间较长及试剂种类与用量较多等不足．本研究利用菜心和烟草SSR标记为研究对象，建立一种能快速有效检测其PCR扩增产物的非变性聚丙烯酰胺凝胶的银染方法．该方法包括染色和显影2个主要操作步骤，整个银染流程耗时6～7min，只需要AgNO3、NaOH和甲醛3种试剂，所检测SSR标记的DNA条带清晰、易辨．与其他银染法相比，本研究建立的银染法具有易于操作、耗时少、所需试剂种类和用量少及检测效果好的优势．

大白菜非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的优化

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的检测效果受到凝胶聚合速度、片段迁移率等多种因素影响。以大白菜为供试材料,研究比较了凝胶聚合速度及PCR产物在不同浓度凝胶上的检测效果。不同浓度的凝胶是由2种〔40%(19∶1)和30%(29∶1)〕贮存液分别配制的4种浓度(5%,7%,9%,11%)。结果表明,在4～30℃,凝胶聚合速度随温度的升高而加快;APS保持不变,不同温度下TEMED∶APS合适配比也不同:4℃(冬季)时,TEMED/APS的合适配比是1∶10,25℃(春秋)、30℃(夏季),选择1∶20的配比为宜;2种不同贮存液配制的相同浓度凝胶检测效果不同,30%(29∶1)优于40%(19∶1),由前者配制7%的凝胶上DNA片段分离效果好,带型清晰,分辨率高。

高粱微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件的优化

以高粱抗、感丝黑穗病3号生理小种部分品种(S95062B、7050B、2381R、LR625;622A、622B、矮4)为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行抗病基因的引物筛选。通过比较各因子对电泳体系的影响,建立了一个高粱微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系:电泳时间为92～105min;银染温度为27.8～29.0℃;显色温度为32℃左右。

从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA小片段的两种方法比较

从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段是分子生物学中的常用技术,尤其针对于DNA小片段的回收。本试验对比了两种从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA小片段的方法(煮沸法和水浴法),并用无水乙醇和3mol/L醋酸钠共沉淀纯化DNA小片段。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测回收结果,通过紫外检测进行定量分析,结果显示:水浴法比煮沸法的回收率高。水浴法结合乙醇沉淀法还具有经济和操作简单的优点,可以广泛应用。

从非变性聚丙烯酰胺凝胶回收纯化DNA样本

介绍一种从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收和纯化目标DNA片段的方法,经比较回收纯化前后PCR产物的电泳结果,表明该方法具有简单快捷和效率高的优点。

采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化PCR产物的观察

目的 :观察采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化目的 PCR产物的效果。方法 :使用不同的 31对引物 ,4 5例标本行 PCR扩增出不同的目的 DNA片段 ,将每一份 PCR产物分为 2份 ,其中 1份直接测序 ,为对照组 ;另 1份则做非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,以分离出的目的 DNA片段单链为模板行 2次 PCR,对 2次 PCR产物测序 ,此为实验组。结果 :实验组只有 4例不能被测序仪判读 (4 / 4 5 ) ,而对照组有 2 4例不能被测序仪判读 (2 4 / 4 5 ) ,两组比较 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1 )结论 :根据单链DNA片段形成构象的不同来纯化

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳在大鼠海马组织蛋白分离中的应用

目的 :探索应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离大鼠海马组织蛋白的最佳条件。方法 :选用不同 p H的正极缓冲液和样品蛋白上样量 ,应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离大鼠海马组织蛋白质。结果 :在其它条件不变的情况下 ,p H9.0的正极电泳缓冲液以及 40～ 6 0 μg/孔样品蛋白上样量时 ,可得到分辨率高、条带多而清晰的电泳图谱。结论 :应用 p H9.0的正极电泳缓冲液和样品上样量为 40～ 6 0 μg/孔时 ,进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,可成功地分离大鼠海马组织蛋白。

木薯SSR标记非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件的优化

以木薯品种为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行木薯重要农艺性状基因的引物筛选。通过比较各因子对电泳体系的影响,建立了一个木薯微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系:TEMED用量为80μL,10%AP用量为1 200μL,电泳时间为60～90 min。

基于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的菜心SCoT分析

以菜心(Brassica rapa var.parachinensis)抗小菜蛾品种Caixin65和感小菜蛾品种Caixin69及6份F2株系为材料,利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测菜心抗虫株系的SCoT多态性,同时进行SCoT多态性的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测效率、遗传多样性分析和差异条带克隆分析。结果表明,非变性聚丙烯酰胺凝胶能检测出亲本与子代间的SCoT多态性和遗传多样性变化,条带数量较多且清晰,提高了SCoT标记检测效率。选取亲本的10条非变性聚丙烯酰胺凝胶差异片段克隆测序,获得感虫序列4条、抗虫序列6条,GENSCAN预测其中8条具有启动子、终止子、阅读框等基因结构序列。同源性检索分析表明,感虫序列分别与泛素羧基末端水解酶mRNA序列、大白菜克隆序列、白菜线粒体丙酮酸载体蛋白序列、甘蓝基因组编码未知蛋白的HDEM序列同源,抗虫序列分别与白菜RNA假尿苷合酶4线粒体mRNA序列、京水菜线粒体DNA序列、白菜未知蛋白mRNA序列、白菜4-香豆酸:辅酶A连接酶mRNA序列、大白菜克隆序列、哈茨木霉mRNA序列同源。本研究提高了SCoT标记清晰度、遗传多样性检测水平和差异片段克隆的精准性,使得SCoT成为批量克隆差异片段的高效工具,有助于挖掘SCoT功能性标记信息,开展初步的功能基因组学研究,提高优异株系筛选鉴定效率,加快育种进程,为菜心抗虫性机制的进一步研究提供理论基础。

碱性强弱染色非变性聚丙烯酰胺凝胶对微卫星DNA检测效果的影响

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳常用于分离不同分子质量和空间构象的DNA或RNA等生物大分子,由于分辨率可以达到2个碱基对,因此非变性聚丙烯酰胺凝胶对于微卫星DNA有很好的检测效果。利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对黄牛微卫星DNA的检测表明:碱性强弱的控制对于染色的效果和效率有显著的影响。弱碱性环境下,具有背景浅、条带明显和检测灵敏度高的优势,但是染色过程较复杂繁琐,适合于少量样品的精细检测;在强碱性环境下,对于微卫星DNA的灵敏度相对弱碱性环境下降低,但是染色过程简便、快捷且成本相对较低,适合于大规模样品的检测。

从非变性聚丙烯酰胺凝胶中快速高效回收DNA片段

获得特异性的DNA是开展多种分子生物学试验的前提,具有高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳是纯化特异性DNA的首选。借助液氮对凝胶的固化作用,介绍了通过研磨破坏聚丙烯酰胺凝胶结构回收纯化DNA的方法。将通过该方法回收纯化的DNA和采用琼脂糖凝胶电泳回收纯化的DNA,经由聚丙烯酰胺凝胶电泳的进一步检测,结果显示,该方法与琼脂糖凝胶电泳回收法相比,所获得DNA的纯度高,特异性好,且效率相当。在提高DNA特异性的同时也兼具了经济高效耗时少等优点,可以广泛应用。

一种高效省本的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法的建立——以水稻为例

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染技术已广泛用于DNA片段检测。介绍一种本实验室改进的高效省本的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染方法,该法将固定和染色两步骤合并,整个银染过程只需16 min即可完成。同时,该法无需使用无水乙醇和冰乙酸,减少了硝酸银、氢氧化钠及甲醛的使用量。

几种鲑鳟鱼血清蛋白非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的研究

采用非变性聚丙烯凝胶电泳的方法分析了硬头鳟、金鳟、虹鳟、北极红点鲑和溪红点鲑血清蛋白的组成成分及其含量。结果显示,硬头鳟、金鳟和虹鳟三者之间的遗传距离最小,硬头鳟、金鳟和虹鳟三者与溪红点鲑的遗传距离最大;硬头鳟、金鳟和虹鳟三者与北极红点鲑处于同一亚组,而溪红点鲑独处于另一亚组。研究结果表明硬头鳟、金鳟和虹鳟三者与溪红点鲑的亲缘关系远于与北极红点鲑的关系;同时还表明,以聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鲑鳟鱼血清蛋白的方法简单易行、重复性好。本研究结果对鲑鳟鱼的种属鉴定、良种选育、品种改良和遗传结构分析提供了试验依据;虹鳟的繁养殖需进一步规范化和标准化,减少蛋白遗传基因的流失,从根本上预防大规模疾病的暴发。

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析切割海马伞大鼠海马组织蛋白

目的 :应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统研究切割海马伞后大鼠海马组织蛋白的生化改变 ,为分离、纯化海马中诱导神经干细胞迁移和向神经元分化的信号物质奠定基础。方法 :取SD大鼠 ,行单侧切割海马伞术 ,于术后不同时期取切割侧海马和正常侧海马组织。进行 10 %的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。观察切割海马伞海马和正常海马的蛋白表达差异。结果 :两者在低分子量区存在一条差异性蛋白条带。其中正常海马组织的条带染色最浅 ,切割海马伞海马组织中 10天组和 2 0天组染色较深 ,14天组染色最深。结论 :结合我们过去实验 ,本研究中切割海马伞海马及正常海马组织蛋白出现的差异性条带中 。

蓝色非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统在多蛋白质复合体研究中的应用

多蛋白质复合体(MPCs)是蛋白质在体内发挥功能的重要形式之一。鉴定MPCs对于整体理解决定蛋白质功能和细胞行为的蛋白质-蛋白质相互作用网络具有至关重要的意义。鉴定MPCs的限制因素之一是MPCs的分离方法。蓝色非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(BN-PAGE)系统是研究这些复合体的强有效的工具。BN-PAGE系统是一种依赖于染料考马斯亮蓝(CBB)G-250给蛋白质加上负电荷的非变性蛋白分离方法,适用于分离相对分子质量10×103至10×106范围的MPCs。近年来,有关BN-PAGE系统用于哺乳动物细胞MPCs研究的报道有了很大的增长。本文重点对BN-PAGE系统的原理、发展及应用进行综述。

聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴别哈蟆油药材及其伪品

目的建立哈蟆油与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油水溶性蛋白的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis,Native-PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴别方法,并对2种电泳方法进行比较。方法采用Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳系统,分别对不同产地哈蟆油与其伪品的水溶性蛋白的组成及其分子量分布范围进行比较研究。结果 Native-PAGE实验结果显示:哈蟆油与桓仁林蛙油均具有6条特征谱带,黑龙江林蛙油具有5条特征谱带,而蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的特征谱带数目分别为2条、1条和1条。SDS-PAGE实验结果显示:哈蟆油、黑龙江林蛙油和桓仁林蛙油均具有11条特征谱带,而蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的特征谱带数目分别为5条、6条和6条。2种电泳图谱中,哈蟆油等正品药材与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油在特征谱带位置等特征上有明显区别。结论 Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳方法均可用于哈蟆油与类似品和伪品的鉴别,为哈蟆油质量评价和控制方法提供了一种简易的鉴别方法。

微卫星DNA非变性PAGE银染法的分析探讨

微卫星DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),是一种常用的DNA检测手段,具有很好的分离微小差异DNA片段的能力,而银染法使该方法得到了广大科研工作者的青睐,但是,在染色过程中,常可能出现一些问题,令结果的判断难以达到满意的效果。为此,对该方法进行了一系列的分析和探讨。

生物素标记探针-液相杂交-非变性PAGE检测非编码小RNA方法的建立和优化

目的建立生物素标记探针-液相杂交-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测非编码小RNA(sRNA)的方法。方法将生物素标记的sRNAU6寡核苷酸探针经非变性PAGE电泳后转印至尼龙膜上,然后用辣根过氧化物酶(HRP)耦联链霉亲和素进行检测。从细胞中提取总RNA,用已标记U6探针优化液相杂交退火条件及杂交缓冲液;用建立的方法检测并计算BEAS-2B、A549细胞中sRNAU6与miRNA145的含量。结果将Biotin-11-dUTP成功标记至寡核苷酸上,随着寡核苷酸浓度增加,检测信号强度越强,10μmol/L时达到最强。采用水浴反应条件与采用聚合酶链反应(PCR)仪梯次降温反应条件下得到的杂化链无明显差异;以磷酸盐缓冲液作为杂交缓冲液优于Tris-HCl、DEPC水;BEAS-2B、A549细胞5μgRNA中U6含量接近;BEAS-2B细胞中miRNA145绝对含量高于A549细胞。结论成功建立并优化了sRNA检测新方法 ,为简单、易行、可靠地检测sRNA提供了可能。

鉴定水稻品种的微卫星标记筛选

选用58个水稻微卫星标记,对目前应用较广的28份杂交水稻亲本材料进行多态性分析,并比较了其中14个标记应用3.0%琼脂糖凝胶电泳和6.0%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测结果。研究表明,所应用的标记可将所有供试水稻材料区分开,不同标记的多态性检测能力差异较大;两种检测方法所得结果高度一致,但非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率较高、带型清晰,能更准确反映水稻材料间的差异。对于一般水稻材料而言,选用12个标记可将不同材料区别开的几率大于99.9%,但要区分遗传相似性较高的材料,则可能需挑选高多态性标记和(或)增加检测的标记数。