应用非同位素PCR-SSCP方法检测甲状腺癌p53基因的突变

目的 探讨甲状腺癌组织中 p5 3基因点突变。 方法 应用非同位素PCR -SSCP技术检测 39例不同类型甲状腺癌石蜡包埋组织中 p5 3基因点突变。 结果 10例低分化甲状腺癌中 4例 (4 0 % )、9例未分化甲状腺癌中 6例 (67% )出现异常电泳 ,表明这些病例相应DNA片段中发生了点突变 ,而 5例乳头状癌和 5例滤泡型癌均未见该基因的突变。 10例出现异常电泳的甲状腺癌中 9例 (90 % )同时呈现 p5 3蛋白的表达。 结论 非同位素PCR -SSCP是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法 ,p5 3基因点突变率与蛋白表达率基本相一致 ,p5 3基因的突变是分化型癌向间变型癌转化的关键性遗传改变。

非放射性钙同位素评估CKD患者骨钙平衡

钙作为地球的重要组成因素,在自然界有六个稳定同位素(即非放射性同位素),分别为 40 Ca、 42 Ca、 43 Ca、 44 Ca、 46 Ca、 48 Ca,钙同位素丰度变化可以提供海洋及地壳变化的信息,故既往常用于地质研究。由于钙同位素也存在于食物和水中,人体摄入后会根据它们的原子质量,按照不同的同位素分异规则动力学吸收至人体不同部位。比如,骨形成过程中优先吸收轻钙同位素,肾脏代谢过程中只有较少部分的重钙同位素进入尿液,而大部分重钙同位素重吸收进入血液参与其他生理过程。相对于其他器官,大脑具有异常轻的钙同位素组成。

非同位素PCR－SSCP方法的初步临床应用

单链构象多态性检测法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）是近年发展起来的一项检测人类基因组突变的新技术。然而，在该技术中需要使用放射性同位素标记的核苷酸或引物，从而限制了其广泛临床研究及诊断方面的应用。本文报告一种改进的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法，该方法不用同位素标记引物，而直接在溴乙啶染色的聚丙烯酰胺凝胶上显示ＳＳＣＰ。用该方法对５５例平滑肌肉瘤ｐ５３基因第７外显子突变的检测表明，３８％的瘤组织ＤＮＡ存在异常的ＳＳＣＰ。其中１０例有ＨａｅⅢ和ＭｓｐＩ酶切位点的突变（１８％），１９例有突变型ｐ５３蛋白的过度表达（９例同时有异常ＳＳＣＰ改变）。而ｐ５３质粒ＤＮＡ，平滑肌瘤及Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病患者基因组ＤＮＡ无ｐ５３基因第７外显子扩增片段的异常ＳＳＣＰ改变。同时，还使用该方法对临床诊断的２０例Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病患者和８例健康对照进行了β－淀粉样蛋白前体基因第１６和１７外显子的扩增及分析，均未发现有异常ＳＳＣＰ改变及ＥｃｏＲＩ，ＢｃｌＩ酶切位点的突变。本研究结果提示，该非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可靠、敏感、简便、快速，具有潜在的推广价值。

新疆吐-哈地区硝酸盐矿床的氧同位素非质量效应

随着分析测试技术的提高以及同位素分馏理论的进步,氧同位素非质量分馏的应用范围已经从太空拓展到地球,逐渐发展成为研究行星和地球早期演化、地球表面各圈层相互作用的重要途径和手段。硝酸盐和硫酸盐是地球上少数几个具有明显氧同位素非质量分馏效应的矿物。本文测定了新疆吐-哈地区硝酸盐矿床中硝酸盐和硫酸盐矿物的氧同位素组成,结果显示,硝酸盐的氧同位素存在明显的非质量分馏效应,△17O高达14‰,δ18O高达40‰。为该超大型硝酸盐矿床的大气沉积成因提供了可靠依据。

容器内铀同位素丰度的非破坏探测技术研究

研制了三维样品旋转装置,用PC/FRAM软件分析了通过同轴HPGe探测器采集的铀总量在2—600g、能区在120—1001keV的铀同位素γ射线。建立了高放废物容器内非均匀分布的铀同位素丰度的γ能谱测量方法。对同位素丰度在20%—93%的235U,测量不确定度<0.6%,对238U的测量不确定度<1.3%。

非质量氧同位素分馏效应研究进展

非质量氧同位素分馏效应(mass independent oxygenisotope fractionation)研究为一些重大地质科学问题的解释开辟了一条新途径。在简要介绍非质量分馏理论后,重点评述了非质量氧同位素分馏效应的研究进展,包括非质量同位素分馏效应的成因机制、氧同位素组成分析方法建立及其在环境地学领域的应用。并对非质量氧同位素分馏领域未来研究趋势作了进一步探讨。

非同位素mRNA差异显示方法的建立及应用

目的建立非同位素mRNA差异显示技术 ,并用以分析鼠脑甲状腺激素的反应基因。 方法用 9-1 0bp的随机但序列确定的引物扩增甲减和正常大鼠脑cDNA ,用PAGE分析PCR产物 ,EB染色 ,切取差异条带 ,再扩增、测序并作同源性分析。 结果得到两个 (2 2 6、2 79bp)受甲状腺激素上调、一个 (2 78bp)受甲状腺激素下调的片段 ,前二者与任何已知基因的同源性都低于 80 % ,提示为两个尚未报道的新基因 ,后者即大鼠G蛋白Go的α亚单位基因。 结论非同位素mRNA差异显示技术是一种快速、简便。

非同位素标记法检测人染色体端粒长度

目的 :建立一种非同位素标记测定端粒长度的方法。方法 :以地高辛标记寡核苷酸 (CCCTAA) 3 为探针 ,对基因组DNA进行Southern杂交 ,NBT/BCIP显色后与DNA标准分子量比较 ,图象分析系统测定端粒长度。结果 :通过严格控制探针的工作浓度 (1:12 80稀释 )、DNA上样量 (>2 0 μg)、杂交温度 (4 7± 2℃ )等主要影响因素 ,获得了比较好的杂交条带。结论 :建立了一种稳定、可靠、低背景的地高辛标记检测端粒长度的方法。

非同位素反向Northern筛选法

此文介绍了一种非同位素简单快速的反向Northern筛选方法。采用非同位素法标记探针,操作简便,不涉及污染环境。在杂交过程中采用三次校正,结果可靠,重复性好。该方法能有效地,高通量地验证差异表达基因。

山东新泰太古代层状硫化物中的硫同位素非质量分馏效应

物理、化学和生物作用引起的热力学和动力学同位素分馏均为与质量有关的分馏。非质量同位素分馏效应是由一些特殊的气相光化学反应引起的，它可以揭示一些元素浓度，甚至单个同位素比值无法揭示的特殊的作用过程。笔者首次在山东新泰地区新太古代层状硫化物中观测到了明显的硫同位素非质量分馏效应。δ^33S、δ^34S呈线性排列，且与硫同位素质量分馏线平行，^33S小于0。

CMGA:一个利用钚的94—104keV γ和X射线非破坏分析其同位素丰度的软件

钚样品γ能谱94—104keV能区中有22条X及γ射线可用来提供其同位素丰度信息。本文介绍我们开发的用来解析该能区的CMGA1.0(ChinaMultipleGroupAnalysis,Version1.0)软件。利用该软件分析当前我们所能取得的唯一的具有质谱分析结果的样品。其240Pu/(239Pu+240Pu)多次测量的平均值与质谱法给出的对应数值之比为1.004,相对标准偏差为1.4%。

氧的非质量同位素分馏及其地学应用

氧的非质量同位素分馏(mass-independe nitsotop feractionation)为全球变化研究提供了新方法。在介绍非质量同位素分馏的基础上,评述了氧同位素异常[Δ(17O)]的表示方法以及氧的非质量同位素分馏的产生机制,重点综述了氧的非质量同位素分馏在地球科学中的应用。基于Δ(17O)评估的生物圈生产力是全球总的生物生产力,打破了以往只能孤立地评估陆地或海洋生物生产力的瓶颈,奠定了在更广时空尺度上评估生物生产力的基础;Δ(17O)能量化形成气溶胶硫酸盐和硝酸盐的气相与液相氧化反应路径的相对比例,为研究气溶胶和气候的互馈作用提供了新途径;冰芯中S同位素和Δ(17O)的联合运用,不仅解决了冰芯中硫酸盐、硝酸盐的来源和运移问题,而且还为其形成的氧化过程提供了细节信息;而干旱区硫酸盐、硝酸盐矿物中Δ(17O)的发现在解决一些长期有争议的沉积物成因和来源问题中起关键作用。氧的非质量同位素分馏还将在(古)大气臭氧活性、火山喷发柱化学和O、S、N生物地球化学循环等研究中发挥更大作用。

非同位素法分析序列特异性DNA结合蛋白的三种方法

目的为在转录调控水平研究蛋白质异常表达机制,利用核转录因子与相应DNA调控序列特异结合的原理,非同位素法分析细胞内序列特异性DNA结合蛋白。方法凝胶滞留实验(EMSA)采用Dig-ddUTP末端标记DNA,核蛋白粗提或纯化产物与之液相结合后,PAGE分离核蛋白并转印至尼龙膜,化学发光法检测结果,Southwestern分析方法首先采用SDS-PAGE分离核蛋白粗提或纯化产物,蛋白转印至膜上后与Dig-dUTP末端标记的DNA杂交,酶免疫学检测结果,磁性DNA结合蛋白纯化法则将靶DNA与商品化磁性DNA粒子相连,用不同的连接、洗脱条件得到序列特异性靶DNA结合蛋白,银染显示核蛋白纯化结果。结果 EMSA中由于游离DNA与DNA-蛋白复合物有不同电泳迁移率,出现滞后DNA条带提示有识别该特定DNA序列的核蛋白存在,Southwestern分析除能提示核抽提物中有无可与DNA结合的核蛋白外,还提示其中核蛋白分子质量,核蛋白粗提物经磁性DNA亲和层析后DNA结合蛋白在银染时出现较纯的特异识别该DNA序列的核蛋白条带。结论 EMSA,Southwestern分析及磁性DNA层析是3种实用的研究DNA结合蛋白的方法,配伍应用具有简便、重复性好、敏感性和特异性高、无同位素污染等优点,是转录调控水平研究疾病相关基因异常表达的有效方法。

非同位素PCR及Southern印迹杂交分析检测脆性X综合征FMR-1基因突变

目的 建立一种非同位素的检测脆性X综合征智力缺陷基因(FMR - 1)突变的方法。方法 采用PCR技术结合Southern印迹杂交技术对FMR - 1基因进行分析,进而确定其突变类型。结果 共对190例样本进行了检测,其中2例为女性前突变携带者,1例为女性全突变患者。结论 非同位素PCR方法可以简便、安全、可靠地检测FMR - 1基因中(CGG)n重复拷贝数,可作为临床上对脆性X综合征的筛查的首选方法;而非同位素Southern印迹杂交可对结果不确定者进一步进行检测。

非同位素标记pAW101探针作人流胚胎组织的亲权鉴定

DNA限制性片段长度多态性(RFLPs)技术的经典方法是用酚抽提DNA,同位素标记探针。本文研究选用N_aCI盐析分离DNA的技术,结合地高辛配基标记pAW101探针方法,作了11例无争议的胚胎组织的亲权鉴定,同时测定4种同Ⅰ酶型,在不违反孟德尔遗规律的前提下,按Essen-Moller公式计算父权概率(均>99.73％),达到确定亲生关系的标准。本方法简单、易于掌握,结果稳定可靠,适宜于一般实验室开展工作。

非质量同位素分馏效应及其应用

物理、化学和生物作用引起的热力学和动力学同位素分馏几乎均为与质量有关的分馏。与质量有关的同位素分馏遵守质量分馏方程,分馏系数lnα与同位素的相对质量差(m~*—m)/(m~*·m)成正比。非质量同位素分馏效应最早是由Clayton(1973)在Allende碳质球粒陨石的富钙—铝包体(CAIs)中观测到的,δ^(17)O≈δ^(18)O;与地球物质中与质量有关的氧同位素分馏形成鲜明对照(δ^(17)O=0.52δ^(18)O)。后来Thiemens(1983)在分子氧(O_2)形成臭氧(O_3)的光化学反应实验中观测到了与CAIs中相似的氧同位素非质量分馏效应。现在非质量同位素分馏效应已被用于示踪一些元素浓度,甚至单个同位素比值测量无法揭示的特殊的作用过程。

核酸的非同位素化学发光分析系统

核酸的非同位素化学发光分析系统王瑛（中国科学院动物研究所；北京１０００８０）近些年由于在核酸杂交检测中引人化学发光物质代替了传统所用的显色反应，大大改善了系统的灵敏度，从而将核酸的非同位素标记与检测技术提高到一个崭新的水平，被愈来愈多的实验室采用。化...

柱色谱中非稳态同位素富集的同位素浓度分布

根据柱色谱分离同位素的一个实例,研究了非稳态条件下移动带后边界区内的同位素富集情况.根据一些基本的实验条件参数,先计算出富集的分离系数ε和斜率系数k,进而用一个公式来描述移动带中同位素的浓度分布,做进一步的数学处理还可求得实验系统的H(理论塔板高度,HETP)值.结果表明,所采用的理论公式能有效地从数学角度描述柱色谱分离过程中的同位素浓度分布.

非放射性同位素mRNA差异显示技术

mRNA差异显示技术是基因筛选的重要方法 ,经典的方法皆通过同位素来进行 ,非同位素mR NA差异显示技术近年得到了一定的发展。本文对目前所应用的四种非同位素mRNA差异显示法 ,即荧光标记法、银染法、化学发光检测法和地高辛标记法进行了阐述评价。

非同位素标记探针在脊髓灰质炎病毒型内鉴别中的应用

以脊髓灰质炎(简称脊灰)病毒Sabin株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型2500～2600碱基区域(病毒VP1氨基末端)为目的基因片段,人工合成了寡核苷酸引物和探针。以Digoxigenin-11-dUTP代替^(32)P-dATP,建立了Digoxige-11-dUTP末端标记寡核苷酸探针,以及在PCR过程中Digoxigenin-11-dUTP直接掺入扩增产物制备探针的方法,并将探针应用于分离的脊灰野毒株和疫苗相关株的鉴别诊断。Digoxigenin末端标记探针和掺入PCR探针均具有型特异性,用于鉴别我国部分地区分离的脊灰毒株的结果表明,Ⅰ型分离株中90％为野毒株,Ⅱ、Ⅲ型分离株均为疫苗相关株,说明我国近年引起脊灰暴发的仍以Ⅰ型野毒株为主。探针可检测至少10~2～10~3TCID_(50)/ml样品。与同位素标记探针敏感性一致。在PCR过程中直接掺入Digoxigenin标记探针,不需纯化,大大简化了操作步骤,提高了标记效率。Digoxigenin标记探针敏感、特异,对人体无害,不受同位素半衰期影响,可回收反复使用;操作简单,出结果快,易于判断,适合在我国推广使用。