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山羊CSN2基因内含子7靶向的CRISPR-Cas9系统高效切割位点筛选
被引量:
1
1
作者
申培磊
高珊
+1 位作者
贾启鹏
张勇
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期26-31,共6页
【目的】使用CRISPR-Cas9系统在山羊CSN2基因座内含子7上筛选出高效的切割位点.【方法】根据"20N+NGG"原则在CSN2内含子7序列中设计了5个sgRNA靶向位点.分别连接具有sgRNA到和Cas9表达框的PX330-P2A-eGFP载体上,通过脂质体转...
【目的】使用CRISPR-Cas9系统在山羊CSN2基因座内含子7上筛选出高效的切割位点.【方法】根据"20N+NGG"原则在CSN2内含子7序列中设计了5个sgRNA靶向位点.分别连接具有sgRNA到和Cas9表达框的PX330-P2A-eGFP载体上,通过脂质体转染到实验室保存山羊胎儿成纤维细胞系中,PCR扩增转染阳性的细胞基因组CSN2内含子7序列,连接到Pmd19-T载体中,测序比较不同的sgRNA介导切割产生的突变.【结果】使用5个sgRNA均可以在山羊CSN2基因内含子7上造成有效切割,产生碱基删除或者插入突变.实验设计的5个sgRNA介导的CRISPR-Cas9系统效率均在30.7%以上,效率最高的2号位点(sgRNA2)介导的切割效率达到了61.5%.【结论】研究确定了CRISPR-Cas9系统在山羊CSN2基因内含子7内进行高效切割的sgRNA,为之后在该基因位点进行高效的非同源介导基因敲入奠定了基础.
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关键词
山羊
CSN2
基因
CRISPR-CAS9
sgRNA
非同源介导基因敲入
下载PDF
职称材料
题名
山羊CSN2基因内含子7靶向的CRISPR-Cas9系统高效切割位点筛选
被引量:
1
1
作者
申培磊
高珊
贾启鹏
张勇
机构
甘肃农业大学生命科学技术学院
甘肃农业大学动物医学院
出处
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期26-31,共6页
基金
兰州市科技局人才创新创业项目(2015-RC-7)
甘肃省高校科研业务基本费(2011ZX08008-003)
文摘
【目的】使用CRISPR-Cas9系统在山羊CSN2基因座内含子7上筛选出高效的切割位点.【方法】根据"20N+NGG"原则在CSN2内含子7序列中设计了5个sgRNA靶向位点.分别连接具有sgRNA到和Cas9表达框的PX330-P2A-eGFP载体上,通过脂质体转染到实验室保存山羊胎儿成纤维细胞系中,PCR扩增转染阳性的细胞基因组CSN2内含子7序列,连接到Pmd19-T载体中,测序比较不同的sgRNA介导切割产生的突变.【结果】使用5个sgRNA均可以在山羊CSN2基因内含子7上造成有效切割,产生碱基删除或者插入突变.实验设计的5个sgRNA介导的CRISPR-Cas9系统效率均在30.7%以上,效率最高的2号位点(sgRNA2)介导的切割效率达到了61.5%.【结论】研究确定了CRISPR-Cas9系统在山羊CSN2基因内含子7内进行高效切割的sgRNA,为之后在该基因位点进行高效的非同源介导基因敲入奠定了基础.
关键词
山羊
CSN2
基因
CRISPR-CAS9
sgRNA
非同源介导基因敲入
Keywords
goat
CSN2 gene
CRISPR CAS9
sgRNA
NHEJ knock in
分类号
S827 [农业科学—畜牧学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
山羊CSN2基因内含子7靶向的CRISPR-Cas9系统高效切割位点筛选
申培磊
高珊
贾启鹏
张勇
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
1
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