非吞噬细胞氧化酶1介导糖基化终末产物对牛视网膜周细胞凋亡的影响

目的:探讨非吞噬细胞氧化酶1(NOX1)激活是否介导糖基化终末产物(AGE)对牛视网膜毛细血管周细胞(BRP)的凋亡。方法:将原代培养BRP分为3组:对照组、AGE组(200mg/L AGE)、干预组(200mg/L AGE+NOX1RNAi)。用锥蓝排斥法观察各组BRP的增殖,使用流式细胞术检测BRP凋亡水平,采用免疫杂交法检测活性Caspase-3的表达。结果:AGE组BRP增殖率较对照组明显降低;干预组则较AGE组明显升高(P均<0.01)。活性Caspase-3在AGE组表达上调,而在干预组表达降低(P均<0.01)。结论:AGE对BRP增殖的抑制或者促凋亡作用可能是通过激活Caspase-3实现,而信号通路NOX1的激活可能介导了AGE对Caspase-3的活化。

高血压病患者吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P^(22Phox)mRNA的表达水平

目的研究高血压病人及家系中血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA表达水平的变化。方法研究对象分为有高血压家族史的高血压组(FH)和正常组(FN),无高血压家族史的高血压组(NFH)和正常组(N)。通过密度梯度离心法获取血中吞噬细胞,采用RT-PCR技术检测吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA的表达量;比色法检测血清中抗活性氧单位水平。结果FH组(6.60±0.59)、NFH组(6.07±0.56)分别较FN组(4.99±0.29)、N组(4.13±0.51)P22phoxmRNA高表达(P<0.01);FH组较NFH组、FN组较N组P22phoxmRNA高表达(P<0.01)。高血压组血清抗活性氧单位水平较正常组降低。结论高血压组血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA较正常组有显著的高表达,且其表达可能受遗传因素的影响。

NADPH氧化酶NOX家族与疾病的关系

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶的非吞噬细胞氧化酶(non-phagocytic cell oxidase,NOX)家族是许多非吞噬细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的主要来源。正常状态下,通过该途径产生的ROS作为信号分子参与了细胞分化、增殖、凋亡等的调节,但在环境胁迫下,NOX蛋白家族在感受细胞外信息刺激时,能够迅速活化产生过量的ROS,引起的氧化压力会诱导机体多种疾病的发生、发展。本文主要从NADPH氧化酶NOX家族蛋白的结构、活化、功能及与疾病发生、发展的关系等方面进行简述。

非吞噬细胞氧化酶4在转化生长因子-β诱导A549细胞迁移中的作用

目的探讨非吞噬细胞氧化酶4(NOX4)在转化生长因子β(TGF-β)诱导A549细胞迁移中的作用。方法实验分组:TGF-β(刺激)组,空白对照组,二甲苯基碘(DPI,NOX4抑制剂)组,TGF-β+DPI组,二甲基亚砜(DMSO)(溶剂对照)组。流式细胞仪检测ROS表达;Western blot检测NOX4、snail、E-cadherin蛋白表达;划痕实验检测A549细胞迁移能力。结果经Quantity One软件定量后,TGF-β组NOX4表达为:1.80±0.07,TGF-β+DPI组为0.49±0.03(F=327.071,P<0.001);上皮间质转化相关蛋白:TGF-β组snail蛋白为9.0±0.6,TGF-β+DPI组为1.8±0.3(F=119.097,P<0.001);TGF-β组E-cadherin蛋白为0.5±0.1,TGF-β+DPI组为3.3±0.3(F=71.063,P<0.001);以上结果表明DPI可以抑制A549细胞NOX4表达且可以抑制其EMT进程。TGF-β+DPI组与TGF-β组比较,划痕愈合率降低(F=33.899,P<0.001);表明DPI可以抑制A549细胞的迁移。结论 DPI抑制NOX4的表达后,TGF-β诱导的A549细胞迁移被抑制,并且与TGF-β诱导的上皮间质转化进程有关。

高迁移率族蛋白B-1和NADPH氧化酶衍生活性氧对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜电图波幅和玻璃体通透性的影响

目的:探究高迁移率族蛋白B-1(HMGB1)和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶衍生活性氧(ROS)对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜电图波幅和玻璃体通透性的影响及机制。方法:选取40只雄性SD大鼠,根据实验目的将大鼠分为对照组、DR模型组、HMGB1注射组和ROS抑制剂组。使用链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病,进而发展DR模型。通过2’-7’-二氯荧光素-二乙酸酯(DCFH-DA)检测大鼠视网膜组织匀浆中ROS的生成。通过蛋白印迹分析视网膜组织中Nox2、HMGB1、Occludin和ZO-1的蛋白表达。通过PCR分析大鼠视网膜组织匀浆中PARP-1和Caspase 3的mRNA表达。通过视网膜电图分析大鼠a波和b波振幅。通过测量FITC-BSA荧光评估大鼠玻璃体通透性。结果:DR模型组和HMGB1注射组较对照组大鼠视网膜ROS水平升高(均P<0.05),ROS抑制剂组较DR模型组和HMGB1注射组ROS水平降低(均P<0.05)。DR模型组和HMGB1注射组较对照组Nox2和HMGB1的蛋白表达升高(均P<0.05),ROS抑制剂组较HMGB1注射组和DR模型组Nox2和HMGB1的蛋白表达降低(均P<0.05)。HMGB1注射组和DR模型组较对照组大鼠视网膜PARP-1和Caspase 3的mRNA表达升高(均P<0.05)。HMGB1注射组和DR模型组较对照组a波和b波振幅减少(均P<0.05),ROS抑制剂组较HMGB1注射组和DR模型组振幅升高(均P<0.05)。HMGB1注射组和DR模型组较对照组Occludin和ZO-1的蛋白表达降低(均P<0.05),ROS抑制剂组较HMGB1注射组和DR模型组Occludin和ZO-1的蛋白表达升高(均P<0.05)。DR模型组和HMGB1注射组较对照组荧光强度升高(P<0.05),ROS抑制剂组较DR模型组和HMGB1注射组荧光强度降低(P<0.05)。结论:糖尿病视网膜组织中HMGB1和Nox衍生的ROS之间存在正反馈,这可能是促进糖尿病诱导的视网膜电图波幅降低和玻璃体通透性增加的机制。

NOX4在BEAS-2B细胞上皮间质转化过程中的作用

目的:探索非吞噬细胞氧化酶4(NOX4)在人肺正常上皮细胞BEAS-2B上皮间质转化过程中的作用。方法:选取对数生长期的BEAS-2B细胞,分为空白对照组、NOX4抑制剂二苯基氯化碘(DPI)组、TGF-β组和TGF-β+DPI组。采用Western blot检测E-cadherin、Vimentin、NOX4的表达,用划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞仪检测活性氧(ROS)水平。结果:TGF-β可增加BEAS-2B细胞NOX4、Vimentin的表达及ROS水平,降低E-cadherin的表达以及划痕宽度,DPI可以抑制NOX4、Vimentin的表达及ROS水平,增加E-cadherin的表达以及划痕宽度(P<0.001);DPI可拮抗TGF-β对NOX4、E-cadherin、ROS的作用(P<0.05)。结论:抑制NOX4的表达可以抑制TGF-β诱导的BEAS-2B细胞上皮间质转化,进而抑制BEAS-2B细胞的迁移能力。

血栓素受体参与子痫前期的发病

目的探讨血栓素受体(TPr)与子痫前期发病机制的关系。方法用免疫组化和实时荧光定量PCR(real-time PCR)的方法检测36例子痫前期孕妇(病例组)和34例正常妊娠孕妇(对照组)胎盘中血栓素合酶(TXS)、血栓素受体(TPr)和非吞噬细胞氧化酶1(NOX1)的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胎盘TXA2的表达。结果TXS和TPr蛋白主要表达在细胞滋养细胞、合体滋养细胞和绒毛血管内皮细胞的胞质中,NOX1蛋白主要表达在细胞滋养细胞、合体滋养细胞、绒毛血管内皮细胞及间质细胞的胞质中。子痫前期组胎盘TXS和NOX1蛋白、mRNA表达和TXA2表达均强于对照组(P<0.05)。子痫前期TXA2表达与新生儿体质量呈负相关(P<0.01)。TXA2表达与NOX1 mRNA表达呈正相关(P<0.05)。结论 TXA2可能通过TPr通路导致胎盘产生过量ROS并向母体血液循环释放,参与子痫前期的发病过程。