非嗜酸性粒细胞哮喘诊治进展

哮喘是全球最常见的慢性呼吸系统疾病之一,非嗜酸性粒细胞哮喘(non-eosinophilic asthma,NEA)是哮喘的一种特殊表型,其气道炎症的特征是细胞浸润以中性粒细胞为主,缺乏嗜酸性粒细胞。NEA发病与环境及宿主因素均有关,例如职业暴露、环境污染、吸烟、感染和肥胖,上述风险因素单独或联合作用可以激活特定的细胞和分子途径,导致NEA发生。NEA的临床特征是对标准哮喘治疗的反应不佳,尤其是对吸入性皮质类固醇,导致疾病更严重和难以控制的哮喘。虽然NEA不是最普遍的哮喘表型,但重度哮喘患者中NEA比例高,其重要性不容忽视。本文就近年来NEA的流行病学现状、致病因素、发病机制和治疗现状作一综述。

嗜酸性粒细胞性和非嗜酸性粒细胞性慢性鼻窦炎鼻息肉的临床分析

目的:分析嗜酸性和非嗜酸性粒细胞性慢性鼻窦炎鼻息肉的临床治疗效果。方法:随机选取肇庆市第一人民医院2015年7月至2016年12月收治慢性鼻窦炎鼻息肉患者123例,以术后病理分型分为嗜酸性粒细胞增多和非嗜酸性粒细胞增多,分为嗜酸性组和非嗜酸性组,比较分析两组患者临床指标和Lund–Mackay评分。结果:两组患者视觉模拟评分法(VAS)评分和Lund–Kennedy评分比较,差异无统计学意义(P>0.05),但在嗅觉评分方面,嗜酸性组明显高于非嗜酸性组,差异具有统计学意义(P<0.05)。嗜酸性组患者与非嗜酸性组患者在蝶窦、额窦、上颌窦以及窦口鼻道复合体(OMC)区的Lund–Mackay评分比较,差异无统计学意义(P>0.05),但在筛窦嗅裂Lund–Mackay评分比较中,嗜酸性组明显高于非嗜酸性组,差异具有统计学意义(P<0.05)。嗜酸性组患者复发率为52.5%,非嗜酸性组患者为26.5%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:鼻息肉组织嗜酸性粒细胞增多对术后复发有预测的价值,同时与嗅觉相关性明显。

肥胖对非嗜酸性粒细胞型慢性鼻窦炎嗜酸性转变的影响

通过探究肥胖对非嗜酸性粒细胞型慢性鼻窦炎(nonECRS)外周血中性粒细胞(bNeu)百分比与外周血嗜酸性粒细胞百分比(bEOS)的比值(bNER)的影响,分析肥胖是否会引起nonECRS发生嗜酸性转变。方法 回顾性分析2022年1月1日至2023年1月1日就诊于安徽医科大学附属巢湖医院诊断为慢性鼻窦炎且收住入院行手术治疗100例患者的临床资料,根据0.20%<bEOS<5.65%将其判定为nonCRS。将100例患者根据身体质量指数(BMI)不同分为nonCRS不伴肥胖组(nonCRS组)和nonCRS伴肥胖组(nonCRS-ob组)。结果 使用Mann-Whitney U检验判断nonCRS-ob组与nonCRS组bNER是否有差异。nonCRS-ob组bNER的平均秩次为39.81,nonCRS组bNER的平均秩次为53.88。差异有统计学意义(U=655.500,P=0.038)。结论 肥胖会引起nonECRS患者bNER降低。提示肥胖nonECRS患者bEOS在外周血炎症细胞中所占比例有增高的趋势。肥胖可能会是nonECRS发生嗜酸性转变的因素之一。

基于GEO数据集分析嗜酸性粒细胞型慢性鼻窦炎伴鼻息肉的潜在诊断基因

目的 本研究利用GEO数据库中的RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)数据,筛选出对嗜酸性粒细胞型慢性鼻窦炎伴鼻息肉(eosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyps,ECRSwNP)具有潜在诊断价值的基因。方法 共获得3个数据集数据,分别根据CST1和CLC基因的表达水平将样本分为ECRSwNP和非嗜酸性粒细胞型慢性鼻窦炎伴鼻息肉(nonECRSwNP)两组。使用R软件及算法建立ECRSwNP的诊断模型并检测其性能。结果 将每个数据集均分为两组GSE136825(ECRSwNP 7、nonECRSwNP 19),GSE72713(ECRSwNP 3、nonECRSwN 3),GSE179265(ECRSwNP 11、nonECRSwNP 2)。基于支持向量机(support vector machine,SVM)算法构建的上调基因模型(ADH1C、CCL26、HRH1、NOS2)和下调基因模型(LCN2、MUC5B、PLAT、TMEM45A、XDH)的ECRSwNP诊断性能表现出色。结论 基于SVM模型鉴定出的基因可能成为无创诊断ECRSwNP的生物学标志物,也可能在ECRSwNP发病机制中扮演关键角色。

非变应性鼻炎伴嗜酸性粒细胞增高征患者的炎症特征

目的非变应性鼻炎伴嗜酸性粒细胞增高征（nonallergic rhinitis with eosinophilia syndrome,NARES）与支气管哮喘、鼻息肉、阿司匹林不耐受三联征等疾病相关,但对于其炎症状况研究相对较少,文中旨在探讨NARES患者鼻部、下气道及全身炎症特征。方法收集2014年1月至2014年12月初次在南京军区南京总医院耳鼻咽喉科就诊的变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）患者101例（AR组）、NARES患者39例（NARES组）及体检健康者（对照组）162例,通过病史采集、皮肤点刺实验、呼出气一氧化氮（fractional exhaled nitric oxide,Fe NO）、血常规、血总Ig E（total Ig E,t Ig E）、鼻灌洗鼻腔分泌物嗜酸性粒细胞（Eosi nophils,EOS）、诱导痰EOS、鼻激发和支气管激发检查等方式评价分析炎症状况。结果 NARES组、AR组鼻激发阳性率（69.2%、75.2%）、支气管激发阳性率（10.3%、14.9%）、Fe NO[（37.25±22.95）ppb、（39.00±24.29）ppb]较对照组[32.1%、1.2%、（15.70±5.20）ppb]均升高（P〈0.05）;NARES组、AR组血清Eos、血清t Ig E、鼻灌洗EOS计数、诱导痰EOS比例较对照组亦升高（P〈0.05）。NARES组血清t Ig E较AR组降低[53.3（23.3-186.0）vs 197.0（62.6-391.0）k U/L,P〈0.05]。结论 NARES患者鼻、下气道和全身均存在炎症反应,且炎症程度与AR无差异。临床上对NARES患者既要关注上气道炎症状况,也要关注下气道及全身炎症状况。

非过敏性鼻炎伴嗜酸性粒细胞增多综合征患者的鼻通气功能评估

目的本文检测非过敏性鼻炎伴嗜酸性粒细胞增多综合征患者(nonallergic rhinitis with eosinophilia syndrome,NARES)的鼻通气功能,分析其与主观症状的相关性。方法 NARES患者22例,健康成人58例。测量鼻阻力获得压力-流速曲线,得到75Pa和150Pa下鼻腔总阻力值。测量使用1%麻黄碱滴鼻液前后鼻腔的鼻声反射,获得相应的面积-距离曲线,得到鼻腔最小横截面积,计算鼻腔充血指数。分析非过敏性鼻炎伴嗜酸性粒细胞增多综合征患者症状评分与鼻通气功能指标间的相关性;对比NARES组与对照组鼻阻力和鼻声反射测量各项指标。结果 ①NARES患者鼻阻力、鼻声反射指标与各鼻部症状间的相关性分析差异均无统计学意义;②鼻声反射仪测量收缩前后的鼻腔最小横截面积以及鼻腔充血指数,NARES组与正常对照组相比差异无统计学意义;③NARES组与正常对照组相比,收缩前75Pa和150Pa下鼻总阻力值差异有统计学意义,收缩后75Pa和150Pa下的鼻总阻力值差异无统计学意义。结论 NARES患者主观症状与客观鼻生理功能检测结果间无相关性,在诊疗过程中需全面综合评价患者的主观症状和客观检测结果。

嗜酸性粒细胞与非嗜酸性粒细胞哮喘

哮喘是一种由嗜酸性粒细胞（eosinophils,Eos）、肥大细胞、T淋巴细胞等多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症疾病,其发病机制极为复杂,迄今尚未阐明。以往对哮喘中炎症细胞的研究多着重于Eos、肥大细胞等,学者多以Thl/Th2失衡来解释。随着对哮喘发生机制研究的不断深入以及临床上激素抵抗型哮喘的出现,近年提出了非嗜酸性粒细胞型哮喘（non-eosinophils asthma,NEA）的概念,在发生机制和临床特征上与传统的嗜酸性粒细胞哮喘（eosinophils asthma,EA）有着较大的区别,对治疗疗效也有一定的影响。

嗜酸性粒细胞型COPD患者血清miRNAs谱及其临床相关性分析

目的探讨嗜酸性粒细胞型(EOS-COPD)和非嗜酸性粒细胞型慢性阻塞性肺疾病(NEOS-COPD)患者血清miRNAs谱的表达差异以及与临床特征的关系。方法收集2019年5月至2020年5月在我院确诊并接受治疗的148例稳定期COPD患者为研究对象,进行前瞻性横断面研究。根据入院时血嗜酸性粒细胞是否≥3%和/或≥0.3×10^(9)个/L分为EOS-COPD组和NEOS-COPD组。另外选取60例排除肺部疾病者作为对照组。每组随机选取10份血清样本,采用Illumina高通量测序技术检测miRNAs表达情况,采用生物信息学软件及数据库进行miRNA鉴定、差异性表达。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血清miR-221-3p和miR-4668表达水平。结果32种差异表达的miRNA(倍数变化≥2,P<0.05)在不同组的患者中发现,与NEOS-COPD样本相比,有19种miRNAs表达下调,与对照组相比,有13种miRNAs表达下调。与NEOS-COPD和对照样本相比,miR-221-3p和miR-4668在所有EOS-COPD样本始终保持下调状态(倍数变化>2)。在完全队列分析中,经RT-qPCR检测,EOS-COPD组患者血清miR-221-3p、miR-4668水平低于对照组和NEOS-COPD组(P<0.05),与高通量测序所得表达趋势一致。经单因素和多因Logistic回归分析,血清miR-221-3p和miR-4668水平降低与EOS-COPD有关(P<0.05);且联合诊断EOS-COPD的ROC曲线下面积为0.959(0.925~0.994),灵敏度和特异性分别为91.5%和94.3%。结论筛选得到miR-221-3p和miR-4668在EOS-COPD患者血清样本中表达水平下调,对于鉴别诊断EOS-COPD可提供一定的参考信息。

非变应性鼻炎不同表型的炎症特征

目的近年来国内外对变应性鼻炎(AR)主要特征变化进行了广泛研究,但对非变应性鼻炎(NAR)的研究却相对较少。文中旨在探讨NAR按照嗜酸性粒细胞(EOS)高低分型[非变应性鼻炎伴嗜酸细胞增多综合征(NARES)型、NAR不伴EOS增高型]分析不同表型NAR炎症特征。方法收集2016年1月至2016年7月初次在南京军区南京总医院耳鼻咽喉科就诊的NARES患者12例(NARES组)、NAR不伴嗜酸性粒细胞增高患者10例(NAR组)、AR患者12例(AR组)及体检健康者11例(对照组)。通过病史采集、皮肤点刺实验(SPT)、鼻灌洗细胞因子、血清细胞因子、外周血Treg细胞等方式评价分析各组炎症状况。结果 NARES组鼻灌洗IFN-γ含量[28.89(10.91~127.07)pg/m L]高于对照组[8.98(7.88~14.90)pg/m L]和NAR组[7.92(7.67~45.85)pg/m L],而鼻灌洗IL-10含量低于对照组[(3.97±0.68)pg/m L vs(4.80±1.32)pg/m L],差异有统计学意义(P<0.05)。AR组和NARES组鼻灌洗IL-4、鼻灌洗IL-17、血清IL-17含量均高于对照组和NAR组(P<0.05)。AR组和NARES组血清IL-4含量均高于对照组(P<0.05)。外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞占CD4+T细胞比例,AR组[(4.5±1.3)%]、NARES组[(5.0±1.8)%]均明显低于对照组[(6.5±1.0)%]和NAR组[(6.6±2.0)%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NAR以EOS高低分型,NARES和NAR不伴EOS增高类型存在不同的炎症发生机制和炎症表现,而NARES和AR却出现了类似的Th2、Th17炎症表现,两者在炎症发生机制上具有一致性,将鼻炎按照是否存在EOS浸润分型更具有实际意义。

左西孟旦通过调控EGOT/微小RNA-641对缺氧/复氧心肌细胞纤维化的影响

目的 探讨左西孟旦(Lev)是否通过调控长链非编码RNA(LncRNA)嗜酸性粒细胞个体发育转录本(EGOT)/微小RNA(miR)-641分子轴从而影响缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞增殖、凋亡及纤维化。方法 体外培养大鼠心肌细胞系H9C2,H/R处理细胞建立细胞损伤模型,随机分为对照(control)组、H/R组、H/R+Lev 1μmol/L (H/R+Lev-L)组、H/R+Lev 5μmol/L(H/R+Lev-M)组和H/R+Lev 10μmol/L(H/R+Lev-H)组,每组9例;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Real-time PCR检测EGOT、miR-641的mRNA表达水平;分别将pcDNA-EGOT、EGOT小分子干扰RNA(si-EGOT)转染至H9C2细胞,采用上述方法检测细胞增殖及凋亡率;双荧光素酶报告基因实验验证EGOT和miR-641的靶向关系;Western blotting检测Bax、Bcl-2、胶原蛋白Ⅰ型(ColⅠ)、胶原蛋白Ⅲ型(ColⅢ)、组织金属蛋白酶抑制因子2(TIMP2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达。结果 与control组比较,H/R组细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Bax、ColⅠ、ColⅢ、TIMP2和MMP-2蛋白水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),EGOT的表达水平降低(P<0.05),miR-641的表达水平升高(P<0.05);与H/R组比较,H/R+Lev-L组、H/R+Lev-M组及H/R+Lev-H组细胞存活率升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),Bax、ColⅠ、ColⅢ、TIMP2和MMP-2蛋白水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05),EGOT的表达水平升高(P<0.05),miR-641的表达水平降低(P<0.05),且H/R+Lev-L组、H/R+Lev-M组、H/R+Lev-H组各指标比较差异有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实EGOT可靶向结合miR-641;转染pcDNA-EGOT与Lev的作用相似;转染si-EGOT可降低Lev对H/R诱导的H9C2细胞增殖、凋亡及纤维化的作用。结论 左西孟旦可能通过上调EGOT表达及下调miR-641表达而促进H/R诱导的H9C2细胞增殖及抑制细胞凋亡、纤维化。

非变应性鼻炎不同表型的炎症状况和鼻用糖皮质激素疗效分析

目的 糖皮质激素对不同表型非变应性鼻炎(AR)的影响尚不清楚。方法 收集2020年10月至2021年3月东部战区总医院耳鼻咽喉科就诊的37例NAR伴EOS增多(NARES)患者(NARES组)及58例NAR不伴EOS增高患者(NAR组)。通过病史采集、皮肤点刺实验(SPT)、鼻部症状视觉模拟量化(VAS)评分、血常规、鼻灌洗、诱导痰检查等方式评价分析炎症状况,并对两组同时给予鼻用糖皮质激素治疗观察其疗效。结果 NARES组中鼻灌洗EOS计数[6(3.3~12.6)]、诱导痰EOS比例[2(1~3)]、血Eos比例[(4.54±3.10)%]显著高于NAR组[0.45(0~1.4)、0.5(0.13~1)%、(2.51±1.75)%],差异有统计学意义(P<0.01)。两组患者使用鼻用糖皮质激素治疗8周后,NARES组鼻灌洗EOS计数、诱导痰EOS比例、鼻部症状VAS评分较治疗前明显降低(P<0.05)。结论 NARES患者鼻腔、下气道和全身均出现EOS炎症表现,鼻用糖皮质激素可以有效治疗NARES患者EOS炎症,鼻腔症状有了显著的改善,而对于非NARES患者症状并无明显改善,将NAR按照是否存在EOS浸润分型可能更具有实际意义。

支气管哮喘的病理学特征分类及其对糖皮质激素的反应

目的:通过分析痰液中炎性细胞的表型,将支气管哮喘患者分为嗜酸性粒细胞哮喘(EA)和非嗜酸性粒细胞哮喘(NEA),观察吸入型糖皮质激素对2种炎性表型支气管哮喘的疗效。方法:将156例哮喘患者及30例健康对照人群纳入研究,应用诱导痰技术收集痰液并进行细胞学分析,将哮喘患者分为EA组86例、NEA组70例,并在哮喘患者吸入氟替卡松500μg·d-1(治疗组)及安慰剂(安慰剂组)4周后,观察气道的反应性,进行哮喘生活质量评分。结果:NEA组患者痰液中嗜酸性粒细胞数明显少于EA组(P<0.05),而中性粒细胞数明显高于EA组(P<0.05);吸入氟替卡松500μg·d-14周后,在EA组中治疗组患者生活质量评分较安慰剂组明显提高(P<0.01),乙酰甲胆碱PC20较安慰剂组增加(P<0.05),治疗组一秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV1)较安慰剂组升高(P<0.05),痰液中嗜酸性粒细胞数较安慰剂组明显减少(P<0.01);而NEA治疗组与安慰剂组以上指标比较差异无显著性(P>0.05)。治疗后乙酰甲胆碱PC20、痰液中嗜酸性粒细胞数目以及哮喘生活质量评分的变化在EA组和NEA组间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论:NEA特征为气道嗜酸性粒细胞少,吸入性糖皮质激素治疗后,乙酰甲胆碱PC20、痰液中嗜酸性粒细胞数目以及哮喘生活质量评分变化均不明显,而EA与之相反。临床上可根据哮喘患者痰液分析出细胞表型,从而对哮喘患者进行有针对性的治疗。

上皮间质转化相关标志物在不同类型慢性鼻窦炎患者中的表达

目的:研究上皮间质转化(EMT)相关标志物在不同类型慢性鼻窦炎(CRS)患者中的表达。方法:收集2019年9月至2020年5月在东莞市人民医院耳鼻咽喉科行鼻内镜手术治疗的CRS患者组织40例,根据内型分为非嗜酸性粒细胞型CRS(Non-ECRS)及嗜酸性粒细胞型CRS(ECRS),每组20例。同期选取无CRS行鼻内镜手术患者15例为正常对照组。免疫组织化学染色和Western blotting法检测各组上皮细胞表型标志E-钙黏蛋白(E-cadherin)、闭合蛋白(Occludin)和封闭蛋白4(Claudin-4)以及间质细胞表型标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、N-钙粘附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:与对照组相比,Non-ECRS组和ECRS组鼻黏膜上皮细胞中E-cadherin、Occludin和Claudin-4表达均明显下调,α-SMA、vimentin和N-cadherin表达均明显上调(均P<0.05),ECRS组中α-SMA、Vimentin和N-cadherin表达低于Non-ECRS组(P<0.05)。结论:不同类型的CRS黏膜上皮细胞中均存在EMT现象,以Non-ECRS鼻黏膜中更为明显。EMT可能与CRS发病机制有关。

不同亚型鼻息肉患者组织中Th细胞亚群及相关细胞因子表达水平分析

目的分析不同亚型慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉(CRSwNP)患者组织中Th细胞亚群及相关细胞表达水平。方法 76例行鼻内镜手术切除的CRSwNP患者息肉组织标本和28例行鼻中隔偏曲矫正术切除的下鼻甲组织标本,采用组织病理学观察、RT-PCR和免疫组化染色法观察Th17细胞(转录因子RORc)、IL-17mRNA表达和IL-17、IL-17RD蛋白表达情况。结果 CRSwNP组嗜酸性粒细胞(Eos)、浆细胞和巨噬细胞比例高于下鼻甲组(P<0.05),黏膜腺体水平低于下鼻甲组(P<0.05);以嗜酸性粒细胞>6%判断为Eos浸润型,CRSwNP组Eos浸润型患者30例(39.47%),非Eos浸润型46(60.53%),CRSwNP Eos浸润型患者嗜酸性粒细胞高于非Eos浸润型(P<0.05),黏膜腺体低于非Eos浸润型(P<0.05),二组浆细胞、巨噬细胞水平、息肉组织Th17细胞和IL-17 mRNA相对表达量水平比较差异无统计学意义(P>0.05);CRSwNP Eos浸润型IL-17和IL-17RD蛋白表达水平低于非Eos浸润型(P<0.05)。结论非Eos浸润型CRSwNP具有粘膜腺体、IL-17蛋白高表达趋势,Th17细胞及其细胞因子可能通过影响鼻腔黏膜炎性细胞促炎反应参与鼻息肉发病过程。

屋尘螨在诱导BALB／c小鼠混合型气道炎症中的作用及致病机制探讨

目的探讨屋尘螨（HDM）抗原在小鼠模型中诱导混合型气道炎症中的作用及其机理，为支气管哮喘的临床诊断和治疗提供理论依据。方法BALB／c小鼠于实验第0天、7天、14天、21天、28天和35天进行PBS或HDM提取液（50μg或100μg）滴鼻。采用头体积描记法测量小鼠的气道反应性；对支气管肺泡灌洗液（BAL）进行细胞计数和分类；酶联免疫法（ELISA）检测BAL中CXCL1、CXCL2、CCL11（eotaxin）、IL-5、IFN1、IL-10和IL-17的含量及血清总IgE，HDM特异性IgG1、IgG2a；采用实时荧光定量PCR检测肺组织中相关基因mRNA表达；并对肺组织PAS染色后进行病理学观察。结果HDM抗原引起了以中性粒细胞和嗜酸性粒细胞为主的混合型气道炎症、血清HDM特异性IgG1的升高及高脚杯细胞增生（GCH）等组织学变化，其混合型气道炎症可能与CXCL-1和IL-5等细胞因子的分泌增多有关，是固有免疫和适应性免疫共同活化的结果。这种炎症表型在经高浓度HDM（100μg）致敏的小鼠中表现得更为显著。结论HDM过敏原在小鼠模型中诱导了中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的共同活化。