MNNG所致哺乳类细胞非定标性突变的时相分析

ＭＮＮＧ所致哺乳类细胞非定标性突变的时相分析１孙雪敏１余应年张小山陈星若（浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室，杭州３１００３１；１杭州医学高等专科学校，杭州３１００１２）非定标性突变（ｎｏｎｔａｒｇｅｔｅｄｍｕｔａｔｉｏｎ）为原核细胞...

转录和翻译抑制对哺乳类细胞非定标性突变形成的影响

在研究ＭＮＮＧ所致哺乳类细胞非定标性突变时相变化的基础上，以ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ（ＡＭＤ）和蛋白质合成抑制剂放线菌素酮（ＣＨＭ）在ＭＮＮＧ处理后非定标性突变频率最高的６ｈ点分别阻断ＤＮＡ转录和翻译，发现ＡＭＤ能使ＭＮＮＧ诱导的ｖｅｒｏ细胞非定标性突变率下降至对照水平，而ＣＨＭ则使其明显上升。提示ＭＮＮＧ引起的ＤＮＡ损伤能够通过诱导某些基因的表达或干扰某些蛋白质的功能而导致基因组遗传不稳定。

菜油油烟凝聚物诱发人羊膜FL细胞中的非定标性突变

本研究以穿梭质粒ｐＺ１８９作为探针，用菜油油烟凝聚物ＲａｐｅＳｅｅｄＯｉｌＣｏｎｄｅｎｓａｔｅ，ＲＣ）诱发人羊膜ＦＬ细胞中的非定标性突变。结果显示：ｌ２．５和５０μｇ／ｍｌＲＣ处理组的突变频率较自发突变频率增加了３．５和４．１倍；两个处理组的点突变频率分别为１１．９×１Ｏ－４（１９／１５９９６）和１１．６×ｌ０－４（１７／１４７０１），比自发点突变频率２．９×１０－４（２／６８２２）分别增加了４．１和３．９倍，其卡方检验的Ｐ值均小于０．０５。

MNNG所致哺乳类细胞非定标性突变的时相分析

ＭＮＮＧ所致哺乳类细胞非定标性突变的时相分析孙雪敏，余应年，陈星若（浙江医科大学病理生理教研室及医学分子生物学实验室杭州３１００３１）本实验室曾以穿梭质粒为探针，用ＤＮＡ损伤剂甲基硝基亚硝胍（ＭＮＮＧ）、交链孢酚和菜油油烟凝聚物在哺乳类细胞中成功地诱...

化学诱变剂诱发基因非定标性突变的分子机理研究

应用将突变靶基因与哺乳细胞基因组 DNA相分离的实验体系 ,证明化学诱变剂 N-甲基 - N’-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中 (非定标性突变 ) ,并有突变谱特征和突变好发的序列特异性。它的发生在于化学诱变剂诱发的基因表达改变。应用 m RNA差异显示和反义核酸技术分离到2个基因表达序列标识 ,阻断其相关基因表达 ,可分别促进和抑制化学诱变剂诱发的非定标性突变。应用蛋白质组学技术发现有 6 0多个蛋白质斑点在 MNNG处理后发生了显著变化 ,根据肽质指纹图对其中大部分蛋白作了鉴定 ,发现了很多新的参与应答的蛋白质。用体外 DNA复制技术证明 ,其发生基础是化学诱变剂引发细胞 DNA复制保真度的下降 ,而细胞错配修复功能未发现异常 ,但 DNA聚合酶酶谱发生改变。用反义核酸技术 ,证明 POLζ、POLκ和 POLη可能参与非定标性突变形成。其发生可因细胞应激信号通路激活剂所促进 ,在化学诱变剂作用后有蛋白磷酸化谱和蛋白酪氨酸残基磷酸化谱的改变以及应激激活蛋白激酶的激活 ,提示细胞信号转导通路的激活参与了非定标性突变的发生。研究还证明调节 POLβ表达的 c AMP- PKA- CREB通路在 MNNG处理后激活 ;MN-NG还可诱发细胞表面受体的聚簇 ,但其发生并不依赖于

哺乳类细胞非定标性突变机理的研究

观察化学诱变剂甲基硝基亚硝胍（ＭＮＮＧ）引起的非洲绿猴肾ｖｅｒｏ细胞非定标性突变率的时相变化，继而在突变率最高时点分别以ＲＮＡ合成抑制剂和蛋白质合成抑制剂阻断基因转录和翻译。结果发现前者能使ＭＮＮＧ引起的非定标性突变率下降到对照水平，而后者反而使突变率增高。提示非定标性突变形成过程中可能发生基因表达改变，并提出引起这种改变的细胞信号传导通路假设和今后的研究方向。

POLΗ基因反义阻断细胞系的建立及POLΗ在MNNG引起的非定标性突变中的作用

目的 :通过建立 POLΗ反义阻断细胞系 FL - POLΗ-,研究 POLΗ的功能。方法 :将 POLΗ基因的 14 73～ 2 131片段反向克隆到哺乳动物细胞表达载体 p MAMneo- amp-中 ,将重组表达质粒转染 FL细胞 ,G4 18筛选 ,获得 POLΗ基因被表达阻断的哺乳动物细胞系 FL - POLΗ-。采用穿梭质粒 p Z189介导的突变实验 ,观察在 POLΗ基因表达被阻断细胞系中进行复制时的自发突变频率和 MNNG引起的诱发突变频率。结果 :成功建立细胞系 FL -POLΗ-。穿梭质粒 p Z189在 FL- POLΗ-细胞中复制后 ,其 Sup F t RNA基因的自发突变频率为 13.5× 10 -4,而对照细胞 FL和 FL- M分别为 4 .9× 10 -4和 3.7× 10 -4。同时 ,质粒在接触过 MNNG的 FL- POLΗ-细胞中复制 ,其 Sup Ft RNA基因的非定标性突变频率不发生。结论 :POLΗ在维持哺乳类细胞的遗传稳定性中起重要作用 ,且参与哺乳动物细胞中 MNNG引起的非定标性突变。

MNNG非定标性诱发基因突变的序列特异性分析

我们以穿梭质粒pZ186作为探针已在猴肾vero细胞中证实了非定标性突变的存在，本实验进一步对突变子质粒中的靶基因supF tRNA基因作序列分析，以揭示非定标性突变的序列特异性．结果表明：89％(24／27)的碱基置换发生在G：C碱基对，59％(16／27)为颠换，41％(11／27）为转换，主要为G：C-T：A颠换和G：C-A：T转换；48％的碱基置换发生在supF tRNA基因的6个位点中，