非对称RNA干扰抑制CDCA5基因表达对结直肠癌细胞增殖的影响

目的探讨非对称抑制CDCA5基因的表达对人结直肠癌细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法收集2016年~2017年南充市中心医院行根治性手术的20例结直肠癌患者的癌组织标本及匹配的癌旁正常组织,Western blot检测结直肠癌组织和癌旁正常组织中CDCA5蛋白的表达.同时,Western blot检测结直肠癌细胞系HT29、HCT116及SW480细胞中CDCA5蛋白的表达,选择表达水平最高的细胞系进行后续研究.设计针对CDCA5基因的siRNA,阴性对照siRNA-NC及三条长短不同的非对称小干扰RNA,即aiRNA(15/21)、aiRNA(16/21)和aiR-NA(17/21).PCR检测各组对CDCA5基因的沉默效果.MTT检测siRNA、siRNA-NC和aiRNA(15/21)组的细胞增殖能力,流式细胞仪检测各组细胞周期的变化.结果 CDCA5在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05).人结直肠癌细胞系HCT116中CDCA5蛋白的表达明显高于HT29和SW480细胞系(P<0.05).aiRNA(15/21)在各组中有最强的基因沉默效果(P<0.05).与siRNA和siRNA-NC组相比,aiRNA(15/21)组细胞增殖能力低于其他两组,处于细胞周期G2/M期的细胞数量显著多于其他两组(均P<0.05).结论 CDCA5可能是治疗结直肠癌的一个重要靶点,基于CDCA5基因的特异性非对称aiRNA(15/21)干扰在沉默效率上优于传统siRNA.

非对称小干扰RNA沉默TACC2基因对结直肠癌增殖影响的研究

目的:本实验探讨靶向沉默TACC2基因的表达对人结直肠癌Lo Vo细胞增殖的影响及其主要机制。方法:采用Western blot检测结直肠癌组织、癌旁正常组织和人结直肠癌细胞系Lo Vo、HCT116及SW480细胞中TACC2蛋白的表达。设计针对TACC2基因的siRNA,阴性对照siRNA-NC及三条长短不同的非对称小干扰RNA[aiRNA(17/24),aiRNA(18/24)及aiRNA(19/24)]。PCR检测各组对TACC2基因的沉默效果。MTT法检测siRNA,siRNA-NC和aiRNA(17/24)各组细胞增殖能力,流式细胞仪分别检测3组细胞周期的变化。结果:TACC2在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织。人结直肠癌细胞系Lo Vo中TACC2蛋白的表达明显高于HCT116和SW480细胞系。aiRNA(17/24)在各组中有最强的基因沉默效果。与siRNA和siRNA-NC组相比,aiRNA(17/24)组细胞增殖能力明显降低(P <0. 05),处于细胞周期G2/M期的细胞数量明显增多(P <0. 05)。结论:基于TACC2基因的特异性非对称RNA干扰在沉默效率上优于传统siRNA,TACC2可能是治疗结直肠癌的一个重要靶点。