CircFOXK2通过miR-588/FBXW5轴调节非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭

目的探讨CircFOXK2通过miR-588/FBXW5轴对非小细胞肺癌(NSCLC)增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测NSCLC细胞A549、正常人支气管上皮细胞NHBE中CircFOXK2、miR-588、FBXW5表达;将si-NC、si-CircFOXK2、si-CircFOXK2+inhibitor NC、si-CircFOXK2+miR-588 inhibitor分别转染至A549细胞记为为si-NC组、si-CircFOXK2组、si-CircFOXK2+inhibitor NC组、si-CircFOXK2+miR-588 inhibitor组,未做任何处理的A549细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验验证CircFOXK2、miR-588、FBXW5关系;Western blot检测A549细胞FBXW5、上皮钙粘附素(E-cadherin)、神经型钙粘附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白水平;CCK-8法检测A549细胞增殖情况;流式细胞术检测A549细胞凋亡;Transwell检测A549细胞侵袭、迁移数量。结果与miR-NC+WT-FOXK2组比较,miR-588 mimic+WT-FOXK2组A549细胞的荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而miR-588 mimic+MUT-FOXK2组A549细胞的荧光素酶活性较miR-NC+MUT-FOXK2组无显著改变(P>0.05);与miR-NC+WT-FBXW5组比较,miR-588 mimic+WT-FBXW5组A549细胞的荧光素酶活性显著下降(P<0.05),miR-588 mimic+MUT-FBXW5组较miR-NC+MUT-FBXW5组A549细胞的荧光素酶活性无显著差异(P>0.05)。与NHBE细胞相比,A549细胞中CircFOXK2、FBXW5水平显著上调(P<0.05),miR-588表达量显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-CircFOXK2组A549细胞CircFOXK2表达量、FBXW5、N-cadherin、Vimentin蛋白水平、OD450值、迁移、侵袭细胞数量显著降低(P<0.05),A549细胞miR-588表达量、E-cadherin蛋白水平、细胞凋亡率显著升高(P<0.05);与si-CircFOXK2组、si-CircFOXK2+inhibitor NC组相比较,si-CircFOXK2+miR-588 inhibitor组FBXW5水平、OD450值、A549细胞迁移、侵袭细胞数量以及N-cadherin、Vimentin蛋白水平显著上升(P<0.05),miR-588表达量、A549细胞凋亡率、E-cadherin蛋白水平显著下降(P<0.05)。而miR-588下调减弱了沉默CircFOXK2抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭的有利影响;CircFOXK2靶向调节miR-588/FBXW5轴。结论沉默CircFOXK2可能通过上调miR-588来抑制FBXW5表达,进而对NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭产生影响。

LINC00852调节miR-671-5p/MYH9信号轴对非小细胞肺癌细胞增殖侵袭及迁移的影响

目的:探讨长链非编码RNA00852(LINC00852)调节微小RNA-671-5p(miR-671-5p)/肌球蛋白重链9(MYH9)信号轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法:采用qRT-PCR法检测45例2022年9月至2023年12月期间在我院进行手术的NSCLC患者术中切除的NSCLC组织及癌旁组织中LINC00852、miR-671-5p、MYH9 mRNA的表达。以A549细胞为研究对象,将其随机分为Control组、sh-NC组、sh-LINC00852组、sh-LINC00852+anti-NC组、sh-LINC00852+anti-miR-671-5p组。检测各组中LINC00852、miR-671-5p、MYH9 mRNA的表达;平板克隆实验、Transwell实验、划痕实验分别检测敲低LINC00852对A549细胞的增殖、侵袭、迁移的影响;Western blot检测各组A549细胞中PCNA、MYH9、MMP-9蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验检测LINC00852与miR-671-5p、miR-671-5p与MYH9之间的互作。结果:NSCLC组织LINC00852(1.65±0.34)、MYH9 mRNA表达(1.73±0.35)高于癌旁组织[(0.98±0.29)、(1.01±0.33)](t=10.058、10.041,P<0.05),miR-671-5p表达(0.52±0.15)低于癌旁组织(1.00±0.18)(t=13.742,P<0.05)。sh-LINC00852组A549细胞的克隆数、侵袭数、划痕愈合率、LINC00852、MYH9 mRNA和蛋白、PCNA蛋白、MMP-9蛋白表达低于sh-NC组、Control组,miR-671-5p表达高于sh-NC组、Control组(P<0.05);与sh-LINC00852组、sh-LINC00852+anti-NC组相比,sh-LINC00852+anti-miR-671-5p组克隆数、侵袭数、划痕愈合率、MYH9 mRNA和蛋白、PCNA蛋白、MMP-9蛋白表达升高,miR-671-5p表达降低(P<0.05)。LINC00852可以靶向负调控miR-671-5p,miR-671-5p可以靶向负调控MYH9。结论:敲低LINC00852可以抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭、迁移,其机制可能是通过调控miR-671-5p/MYH9信号通路实现的。

E3泛素连接酶三结构域蛋白59对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨三结构域蛋白59(TRIM59)对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法将非小细胞肺癌细胞系A549分为siControl组、siTRIM59组、Flag-Vector组和Flag-TRIM59组,用CCK-8实验检测细胞增殖活力;用TUNEL染色实验检测细胞凋亡率;用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;用蛋白质免疫印记实验检测AKT表达水平和磷酸化水平。结果与siControl组相比,siTRIM59组细胞增殖活力下降(P<0.05),凋亡比例升高(P<0.05),细胞迁移率降低(P<0.05),侵袭到Transwell下层小室的细胞数减少(P<0.05),AKT磷酸化水平下降。与Flag-Vector组相比,Flag-TRIM59组细胞增殖活力增强(P<0.05),凋亡比例降低(P<0.05),细胞迁移率升高(P<0.05),侵袭到Transwell下层小室的细胞数增加(P<0.05),AKT磷酸化水平上升。结论TRIM59促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,以及AKT的磷酸化。

miR-26b-5p靶向VEGF抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-26b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞A549,通过qPCR检测BEAS-2B和A549细胞中miR-26b-5p和VEGF mRNA的表达水平。通过Western Blot检测BEAS-2B和A549细胞中E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白的表达水平。生物信息学预测VEGF与miR-26b-5p的靶向关系。使用脂质体法将NC-mimic和miR-26b-5p-mimic转染A549细胞,通过CCK8法、EDU实验检测miR-26b-5p对细胞生长的影响;通过划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-26b-5p对细胞迁移和侵袭的影响;通过Western Blot检测对E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达的影响。结果与BEAS-2B细胞相比,在A549细胞中,miR-26b-5p表达水平显著下降(P<0.05),VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达水平显著下降(P<0.05),而Vimentin的蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。与NC-mimic组相比,miR-26b-5p-mimic组在24h、48h以及72h时细胞吸光值显著减少(P<0.05),24h划痕距离显著增加(P<0.05),24h侵袭细胞数显著减少(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.05)、Vimentin和VEGF蛋白表达显著下调(均P<0.05)。结论过表达miR-26b-5p可以通过靶向抑制VEGF的表达,从而抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-888-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭能力的促进作用及其机制

目的观察miR-888-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭能力的影响,并探讨其可能的机制。方法采用实时荧光定量PCR法检测NSCLC细胞系(A549、NCI-H1299、PC-9、LLC、NCI-H1650)及人正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)miR-888-5p相对表达量,选择NSCLC细胞系中miR-888-5p相对表达量升高最明显的A549细胞用于后续实验。将A549细胞分为miR-888-5p mimics组、miR-888-5p inhibit组及scramble组,分别转染miR-888-5p mimics、miR-888-5p inhibit、scramble序列。取各组细胞,采用实时荧光定量PCR法检测细胞miR-888-5p相对表达量,MTT法检测培养0、24、48及72 h的细胞增殖能力,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力(以侵袭细胞数表示)。StarBase在线预测网站预测miR-888-5p的靶基因为Tob1,并经荧光素酶实验进行验证,采用Western blotting法检测细胞Tob1及上皮—间质转化相关指标E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白相对表达量,并计算p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3。结果miR-888-5p mimics组、miR-888-5p inhibit组及scramble组miR-888-5p相对表达量分别为48.9±1.78、1.06±0.24、8.23±0.90,组间两两比较P均<0.05。随着培养时间的延长,三组细胞增殖能力均呈升高趋势;miR-888-5p mimics组、scramble组、miR-888-5p inhibit组同时间点细胞增殖能力、侵袭细胞数依次下降,组间两两比较P均<0.05。miR-888-5p mimics组、scramble组、miR-888-5p inhibit组细胞Tob1、E-cadherin蛋白相对表达量均依次升高,Vimentin蛋白相对表达量及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3均依次降低(P均<0.05)。结论miR-888-5p可增强NSCLC细胞的增殖和侵袭能力,其机制可能与激活JAK2/STAT信号通路、靶向下调Tob1表达从而促进上皮—间质转化有关。

中药泽漆抑制非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭、迁移以及促进细胞凋亡

目的探究中药泽漆对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞PC-9和A549细胞的作用。方法PC-9细胞和A549细胞体外培养,采用不同浓度泽漆作用于PC-9细胞(0、0.4、0.8、1.2 mg/mL)和A549细胞(0、0.8、1.2、1.6 mg/mL),CCK-8法和集落克隆实验检测泽漆对NSCLC细胞增殖的影响;流式细胞实验检测泽漆对NSCLC细胞凋亡的影响;划痕实验和Transwell实验检测泽漆对NSCLC细胞侵袭迁移的作用;Western blotting实验检测泽漆对NSCLC细胞凋亡和侵袭迁移相关蛋白Bax、Bcl-2、E-cadherin、vimentin、MMP2、MMP9表达的影响;将PC-9细胞注射到BALB/C裸鼠皮下,建立裸鼠皮下瘤动物模型,根据皮下瘤生长情况,小鼠被随机分为对照组:每日灌胃生理盐水;泽漆处理组:每日灌胃泽漆65 mg/mL,泽漆颗粒剂用生理盐水溶解;顺铂治疗组:每5 d腹腔注射顺铂4 mg/kg,每组6只小鼠,测量小鼠皮下肿瘤体积及质量变化,观察泽漆对荷瘤小鼠心、肝、脾、肺、肾的毒副作用以及治疗作用。结果CCK-8和集落克隆实验结果显示泽漆呈浓度依赖性抑制PC-9和A549细胞增殖和存活(P<0.01);流式细胞实验结果显示泽漆诱导细胞凋亡(P<0.05);划痕实验和Transwell实验结果显示泽漆能够抑制NSCLC的侵袭迁移能力(P<0.05);Western blotting实验结果显示泽漆处理后上调E-Cadherin、Bax蛋白表达水平,下调Bcl-2、vimentin、MMP2、MMP9蛋白表达水平(P<0.05);动物实验结果显示:与对照组相比,泽漆能够抑制小鼠NSCLC皮下瘤的生长,并观察到对小鼠脏器没有产生明显毒性。结论泽漆能够抑制NSCLC细胞增殖和侵袭迁移,诱导细胞发生凋亡。

p62/SQSTM1在非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭转移中的作用

目的探讨自噬调控多功能蛋白p62/SQSTM1对非小细胞肺癌生物学行为的影响和调控机制。方法RT-qPCR检测p62在正常人支气管上皮细胞和非小细胞肺癌细胞中的表达情况;CCK-8、划痕和Transwell实验分别检测抑制和促进p62表达后对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;Western blot实验检测抑制和促进p62表达后对非小细胞肺癌细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)和自噬相关蛋白(ATG5和Becline1)表达水平的影响;裸鼠皮下成瘤实验检测抑制p62表达后对非小细胞肺癌细胞体内肿瘤质量的影响。结果癌旁组织p62表达(1.01±0.08)低于肺癌组织(2.81±0.17)(P<0.05);p62在si-NC、si-p62、pcDNA-NC、pcDNA-p62组的表达水平分别为1.02±0.03、0.62±0.07、1.03±0.01、2.69±0.12。与si-NC组细胞比较,si-p62组细胞中的p62表达显著降低(P<0.05);与pcDNA-NC组细胞比较,pcDNA-p62组细胞中的p62表达显著升高(P<0.05);转染si-p62后细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05),而转染pcDNA-p62后细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高(P<0.05);转染si-p62后,抗凋亡蛋白Bcl-2(0.31±0.04)、自噬相关蛋白ATG5(0.48±0.02)和Becline1表达水平(0.37±0.03)明显降低,而促凋亡蛋白Bax表达水平(0.59±0.07)明显升高(P<0.05);而转染pcDNA-p62后,Bax蛋白水平(0.12±0.02)降低,而Bcl-2(0.79±0.07)、ATG5(0.93±0.07)和Becline1表达水平(0.96±0.04)明显升高(P<0.05);与sh-NC组(2.50±0.12)比较,sh-p62组(1.12±0.08)小鼠的移植瘤质量明显减小(P<0.05)。结论p62可以通过调控自噬促进非小细胞肺癌细胞A549的体内外生长。

非小细胞肺癌预后相关lncRNAs筛选以及lncRNA AC099850.3对癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:筛选非小细胞肺癌(non-smallcell lung cancer,NSCLC)中异常表达且与预后相关的lncRNA,探讨优先候选基因lncRNA AC099850.3对NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:包括从TCGA数据库下载与NSCLC相关的转录组和临床数据,筛选出与NSCLC相关的lncRNAs。其中,选择了高表达、风险值大于1、差异显著且生存率低的lncRNA AC099850.3作为优先候选基因。应用qRT-PCR检测非小细胞肺癌细胞系及组织中AC099850.3的表达水平。在H1299细胞系中敲减AC099850.3,CCK-8实验检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力。在A549细胞系中过表达AC099850.3,EdU和CCK-8实验检测A549细胞的增殖能力。Transwell和划痕实验检测A549细胞的迁移和侵袭能力。结果:通过对TCGA数据库数据的分析,确定了候选基因AC099850.3、AL365181.2和NKILA。在肺腺癌患者中,高表达的AC099850.3与生存时间降低相关。AC099850.3在NSCLC患者癌组织中的表达显著高于癌旁组织。相较于正常细胞,AC099850.3在A549和H1299细胞高表达。敲减AC099850.3可明显降低H1299细胞的增殖和迁移能力。过表达AC099850.3可明显增强A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力。结论:AC099850.3在NSCLC组织及细胞系中表达增高。AC099850.3可促进NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,可能成为诊断指标和治疗靶点。

Hsa-let-7b-5p抑制非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭

目的探讨hsa-let-7b-5p在非小细胞肺癌临床诊断和靶向治疗中的价值。方法收集2020年9月-10月的13对哈尔滨医科大学附属肿瘤医院病理类型相同的非小细胞肺癌癌组织及其癌旁组织,通过RNA-Seq获得差异表达的miRNA,并通过qRT-PCR验证候选miRNA在非小细胞肺癌组织和细胞中的表达水平。通过CCK-8法、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验验证miRNA对非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭能力的影响。利用MiRDB、TarBase和ENCORI数据库预测靶基因,并利用FunRich工具进行基因富集分析。结果与癌旁组织及正常支气管上皮细胞系(Human bronchial epithelial cell,HBE)相比,hsa-let-7b-5p在非小细胞肺癌组织及非小细胞肺癌细胞系(A549、H1299、H358和H460)中低表达(P<0.05)。hsa-let-7b-5p的高表达可以抑制非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭能力(P<0.01)。靶基因预测及富集分析结果显示hsa-let-7b-5p的378个靶基因及其相关基因中,147个基因与hsa-let-7b-5p的表达呈负相关(P<0.05)。结论Hsa-let-7b-5p对非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭有抑制作用。

hsa_circ_0072309对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及机制研究

目的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是呼吸系统常见的恶性肿瘤,临床表现无特异性。环状RNA(circular RNA,circRNA)在肿瘤进展和细胞功能中起重要作用;然而,NSCLC和hsa_circ_0072309之间的关系仍不清楚。本研究旨在探讨hsa_circ_0072309的分子机制及其在NSCLC细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡中的作用。方法在NSCLC细胞A549和细胞H1975中分别转染siRNA对照质粒(si-NC)和hsa_circ_0072309 siRNA干扰质粒(si-circ_0072309),构建hsa_circ_0072309干扰瞬转细胞株和对照细胞株。CCK8实验检测干扰后细胞增殖变化;划痕实验检测干扰后细胞迁移变化;Transwell实验检测干扰后细胞侵袭变化;流式细胞术检测干扰后细胞凋亡变化。采用Western Blot检测hsa_circ_0072309干扰后,细胞A549中AKT、p-AKT、PI3K和p-PI3K蛋白水平表达变化。结果与si-NC组相比,si-circ_0072309组A549细胞增殖速率无明显差异,迁移和侵袭细胞数量均显著降低(P<0.05),细胞早期凋亡显著减少(P<0.05);H1975细胞增殖速率、迁移和侵袭细胞数量均显著降低(P<0.05),细胞早期凋亡显著减少(P<0.05)。Western Blot结果显示,与si-NC组相比,si-circ_0072309组A549细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白AKT和PI3K蛋白水平表达无明显变化,而p-AKT和p-PI3K蛋白水平表达显著下调(P<0.05)。结论沉默hsa_circ_0072309可能通过抑制肺NSCLC中PI3K/AKT信号通路中AKT和PI3K磷酸化,从而抑制NSCLC增殖、迁移、侵袭和凋亡。

安罗替尼通过调控miR-16-5p/PD-1轴抑制人非小细胞肺癌细胞系增殖并促进凋亡

目的 探讨安罗替尼对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 将非小细胞肺癌细胞系A549和H1299分别采用安罗替尼、miR-16-5p激动剂和/或PD-1过表达载体进行处理。CCK-8实验和EDU实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-16-5p相对表达量;Western blot检测程序性细胞死亡-1蛋白(PD-1)的表达。双荧光素酶报告实验确定miR-16-5p和PD-1的靶向关系。用A549细胞构建裸鼠成瘤模型,检测安罗替尼对体内肿瘤生长的影响。结果 安罗替尼在A549和H1299细胞中以剂量依赖的方式显著增加miR-16-5p表达,同时降低PD-1表达,并且抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p能靶向PD-1,且负调控PD-1表达。siRNA下调PD-1表达后明显抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡(P<0.05)。过表达PD-1则可逆转安罗替尼介导的miR-16-5p对A549和H1299细胞的促增殖和抗凋亡作用(P<0.05)。体内实验证实,安罗替尼能够明显抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论 安罗替尼可有效抑制非小细胞肺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,减少体内肿瘤生长,其作用机制与miR-16-5p/PD-1信号轴相关。

降低lncRNA-RMRP表达抑制人肺癌细胞系A549的增殖和侵袭

目的探讨抑制线粒体RNA加工核糖核酸内切酶RNA组分(RMRP)表达对人肺癌细胞系A549增殖和侵袭的影响;检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者全血和组织中RMRP表达,比较在不同临床指标表达差异性,以期为NSCLC机制研究提供参考资料。方法收集2016年3月至2021年3年在焦作市人民医院行手术治疗的NSCLC患者122例,同期,在体检中心选取健康者50名作为对照组。RT-qPCR检测全血和组织中RMRP mRNA水平。培养A549细胞分为si-RMRP组、siRNA-NC组和空白组(blank组)。RT-qPCR、CCK-8法和Transwell小室法分别检测细胞中RMRP表达、增殖活性和侵袭细胞数。结果NSCLC患者全血中RMRP相对表达量显著高于对照组(P<0.001);NSCLC组织中RMRP相对表达量高于癌旁组织(P<0.001);低分化、淋巴结转移和TNM分期Ⅲ的NSCLC患者全血和组织中RMRP相对表达量较高分化、未发生淋巴结转化和TNM分期Ⅰ~Ⅱ明显升高(P<0.05);Si-RMRP组细胞中RMRP相对表达量低于空白组(blank组)和siRNA-NC组(P<0.001);相比与blank组和siRNA-NC组,24、48、72和96 h时si-RMRP组细胞吸光度(A)值均降低(P<0.05);Si-RMRP组细胞侵袭数低于blank组和siRNA-NC组(P<0.001)。结论NSCLC患者全血和组织中RMRP相对表达量升高,下调A549细胞中RMRP基因表达可抑制细胞增殖,减少细胞侵袭。

甘草查尔酮B联合顺铂对人非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨甘草查尔酮B(licochalcone B,LCB)联合顺铂(DDP)对于人非小细胞肺癌A549细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测LCB联合DDP对A549细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞技术检测对凋亡、细胞周期的影响;Hoechest33258染色后观察对A549细胞核的影响;采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达。结果:LCB联合DDP用药在48 h、72 h对细胞增殖抑制率均高于LCB组和DDP组(P<0.05),药物相互作用系数大于1.15,为两药相互增效。联合用药组具有更强的抑制细胞克隆形成作用(P<0.05),同时将细胞阻滞在G0/G1期和S期(P<0.05);联合用药组48 h的细胞凋亡率高于两药单用组(P<0.05),细胞呈现明显的凋亡特征。联合用药组Bax/Bcl-2比值及Caspase-3蛋白表达高于单独用药组(P<0.05)。结论:甘草查尔酮B联合顺铂可促进人肺癌细胞A549凋亡,并抑制其增殖,表明联合用药可增强抗肿瘤活性,其作用机制可能与凋亡相关通路有关。

苦藏花素协同吉非替尼抑制非小细胞肺癌细胞增殖的作用研究

在我国,约35%~40%的非小细胞肺癌患者由表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)编码基因突变所致[1],吉非替尼作为第一代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs),是EGFR突变的晚期非小细胞肺癌的标准一线治疗方案,但其获得性耐药是疗效限制的主要问题[2-3]。苦藏花素是藏红花最重要的生物活性成分之一,含量仅次于藏红花苷,药效研究表明,苦藏花素具有显著的抑菌作用和抗肿瘤药理活性[4-6]。为深入研究苦藏花素的抗肿瘤作用,本课题组进行了苦藏花素对人非小细胞肺癌细胞株A549、H1650和PC9的增殖作用研究,发现苦藏花素对A549细胞增殖抑制作用最明显,故本研究选择以人肺癌A549细胞为受试细胞,研究苦藏花素与吉非替尼对人肺癌细胞增殖的协同作用,为在临床中联合应用藏红花治疗非小细胞肺癌提供理论依据。

抑制抗增殖蛋白2增强非小细胞肺癌细胞系A549对厄洛替尼敏感性

目的探讨抗增殖蛋白2(PHB2)在非小细胞肺癌细胞系A549对厄洛替尼(Erl)敏感性中的作用及其机制。方法在A549细胞中转染PHB2小干扰RNA(siPHB2),观察抑制PHB2表达对Erl诱导的细胞增殖和凋亡的影响。利用MitoTracker染色和感染绿色荧光蛋白-微管相关蛋白(GFP-LC3)观察微管相关蛋白(LC3)和线粒体共定位,EdU实验检测细胞增殖,平板集落检测细胞集落形成能力,TUNEL实验检测细胞凋亡,Western blot检测PHB2和LC3Ⅱ蛋白表达水平,用相应试剂盒检测线粒体膜电位、细胞色素c含量和呼吸链复合物Ⅰ/Ⅱ/Ⅴ活性。结果与siPHB2组和siCtrl+Erl组相比,siPHB2+Erl组EdU阳性的细胞数显著减少(P<0.05),集落形成数显著减少(P<0.05),TUNEL阳性的细胞数显著增加(P<0.05),线粒体膜电位显著降低(P<0.05),线粒体呼吸链复合物Ⅰ/Ⅱ/Ⅴ活性均显著降低(P<0.05),线粒体内细胞色素c减少(P<0.05),而细胞质内细胞色素c的增加(P<0.05)。结论抑制PHB2改善A549细胞对Erl的敏感性,其机制可能与抑制PHB2介导的线粒体自噬有关。

基于EGFR/AKT和JAK2/STAT3通路研究α-常春藤皂苷单独或与顺铂联用对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨α-常春藤皂苷(α-Hed)诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的作用靶点及其潜在机制,明确α-Hed与顺铂(DDP)联用后对相应的靶点蛋白表达的影响。方法:采用CCK-8法检测不同浓度α-Hed处理后NSCLC细胞A549、H1299和PC-9的存活率,采用AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率,采用WB法检测细胞中C-caspase-3和Bcl-2蛋白的表达。通过网络药理学相关方法筛选α-Hed的潜在靶点,利用分子对接法分析其结合效果,WB法检测靶点蛋白的表达。通过CCK-8法、细胞集落形成实验和WB法检测α-Hed与DDP联用对NSCLC细胞的抑制作用。结果:给药24和48 h后,10、15和20μmol/Lα-Hed可以显著抑制NSCLC细胞增殖活力(均P<0.01);与对照组相比,20μmol/Lα-Hed处理后细胞凋亡率显著升高(P<0.01);α-Hed可上调NSCLC细胞中C-caspase-3的表达(P<0.05),下调Bcl-2的表达(P<0.05)。网络药理学和分子对接筛选出结合亲和力小于-5 kcal/mol的靶点AKT1、STAT3、EGFR和JAK2。WB法检测结果显示,α-Hed处理后A549、H1299细胞中EGFR、p-AKT/AKT、p-STAT3/STAT3和JAK2蛋白的表达均明显下调(均P<0.05)。α-Hed与DDP联用后,更显著地抑制NSCLC细胞的增殖(P<0.01),进一步下调EGFR、p-AKT/AKT、p-STAT3/STAT3和JAK2蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:α-Hed通过下调EGFR和JAK2的表达抑制STAT3和AKT的磷酸化,诱导NSCLC细胞凋亡,与DDP联用后其抑制效果增强,EGFR/AKT和JAK2/STAT3通路也进一步被抑制。

沉默Yes相关蛋白1对人非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的研究Yes相关蛋白1(YAP1)在非小细胞肺癌细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭中的作用。方法通过慢病毒介导的小干扰RNA靶向抑制人非小细胞肺癌细胞株A549中YAP1基因的表达,采用CCK-8法、流式细胞术分别检测沉默YAP1对A549细胞增殖及凋亡周期的影响,Transwell实验观察沉默YAP1对A549细胞迁移、侵袭能力的影响。结果沉默YAP1后,A549细胞YAP1mRNA和蛋白表达均下调(P<0.01),CCK-8实验结果显示沉默YAP1抑制A549的增殖、增加G0/G1期的细胞比例(P<0.01),Transwell实验结果示沉默YAP1抑制A549细胞的迁移、侵袭(P<0.01)。结论沉默YAP1基因对非小细胞肺癌细胞的恶性生物学特征具有抑制作用,YAP1可能成为肺癌治疗的潜在靶标。

吉马酮对人非小细胞肺癌NCI-H1770细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调节作用

目的:探索吉马酮对人非小细胞肺癌NCI-H1770细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:非小细胞肺癌细胞分为4组:对照组(NCI-H1770)、吉马酮(5、10、20μmol/L)组。CCK-8检测细胞增殖。流式细胞术检测细胞凋亡。Transwell检测细胞侵袭。划痕实验检测细胞迁移。蛋白印迹检测细胞增殖核抗原-67(Ki67),Cleaved Caspase-3和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的蛋白水平。结果:低浓度(<20μmol/L)的吉马酮不会对非小细胞肺癌细胞产生毒性,高浓度(≥20μmol/L)的吉马酮会急剧减弱非小细胞肺癌细胞活力。与对照组相比,吉马酮(10、20μmol/L)组细胞增殖倍数下降(P <0. 01)。吉马酮(5、10、20μmol/L)组细胞凋亡率高于对照组(P <0. 01)。吉马酮(5、10、20μmol/L)组每个视野下的侵袭细胞数目低于对照组(P <0. 01)。与对照组相比,吉马酮(5、10、20μmol/L)组划痕愈合率降低(P <0. 01)。吉马酮(5、10、20μmol/L)组Ki67和VEGF的相对蛋白水平低于对照组(P <0. 01)。与对照组相比,吉马酮(5、10、20μmol/L)组Cleaved Caspase-3的相对蛋白水平上升(P <0. 01)。结论:吉马酮可降低人非小细胞肺癌NCI-H1770细胞增殖、侵袭及迁移,促进细胞凋亡。

microRNA-335对人非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响

目的:研究microRNA-335(miR-335)在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞迁移、侵袭能力与增殖能力的影响。方法:采用荧光实时定量PCR检测miR-335在12对非小细胞肺癌与癌旁正常组织中的表达差异,以及miR-335在非小细胞肺癌SPCA-1细胞与肺正常上皮细胞16HBE中的表达差异;应用Lipofectamine 2000瞬时转染anti-miR-335下调SPCA-1细胞中miR-335的表达,并通过荧光实时定量PCR验证;划痕实验检测miR-335对SPCA-1细胞迁移能力的影响;Transwell侵袭实验检测miR-335对SPCA-1细胞侵袭能力的影响;MTT实验及克隆形成实验检测miR-335对SPCA-1细胞增殖能力的影响。结果:与癌旁正常组织比较,miR-335在非小细胞肺癌组织中显著高表达(P<0.05);与16HBE细胞比较,miR-335在SPCA-1细胞中显著高表达(P<0.05);利用Lipofectamine 2000瞬时转染anti-miR-335入SPCA-1细胞24 h时miR-335表达明显减弱(P<0.01);抑制miR-335表达对SPCA-1细胞迁移和侵袭能力有显著的抑制作用,抑制率分别为(42.8±2.7)%(P<0.01)及(73.25±4.4)%(P<0.01);抑制miR-335表达对SPCA-1细胞的增殖能力无明显影响。结论:miR-335在非小细胞肺癌中呈高表达,miR-335低表达能显著抑制SPCA-1细胞的迁移和侵袭能力,但对SPCA-1细胞的增殖能力无明显影响。

基因间长链非编码RNA 467对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及迁移和侵袭能力的影响

目的探讨基因间长链非编码RNA 467(linc00467)对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及迁移和侵袭能力的影响。方法体外培养子宫内膜癌细胞株HEC-1A、Ishikawa、KLE和RL-95-2,应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测4种细胞中linc00467的相对表达量,选择高表达linc00467的子宫内膜癌细胞株HEC-1A、Ishikawa进行后续实验。分别构建2个linc00467慢病毒沉默表达载体sh-linc00467#1、sh-linc00467#2和空载慢病毒质粒;将对数生长期HEC-1A、Ishikawa细胞分为sh-NC组、sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组,sh-NC组细胞转染空载慢病毒质粒,sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组细胞分别转染sh-linc00467#1和sh-linc00467#2;应用RT-qPCR法检测3组细胞中linc00467的相对表达量,5-乙炔基-2-脱氧尿苷(EdU)实验、克隆形成实验检测3组细胞增殖能力,流式细胞术检测3组细胞凋亡情况,划痕实验检测3组细胞的迁移能力,Transwell小室实验检测3组细胞侵袭能力。结果HEC-1A细胞中linc00467 mRNA的相对表达量显著高于KLE和RL-95-2细胞(P<0.05);Ishikawa细胞中linc00467 mRNA的相对表达量显著高于KLE和RL-95-2细胞(P<0.05);HEC-1A与Ishikawa细胞中linc00467 mRNA的相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05),KLE细胞中linc00467 mRNA的相对表达量显著低于RL-95-2细胞(P<0.05)。sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞中linc00467 mRNA的相对表达量显著低于sh-NC组(P<0.01);sh-linc00467#1组与sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞中linc00467 mRNA的相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组EdU阳性HEC-1A、Ishikawa细胞数显著少于sh-NC组(P<0.01);sh-linc00467#1组与sh-linc00467#2组EdU阳性HEC-1A、Ishikawa细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞克隆数显著少于sh-NC组(P<0.01);sh-linc00467#1组与sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞克隆数比较差异无统计学意义(P>0.05)。sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞凋亡率显著高于sh-NC组(P<0.01);sh-linc00467#1组与sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞划痕愈合率显著低于sh-NC组(P<0.01);sh-linc00467#1组与sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05)。sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa侵袭细胞数显著少于sh-NC组(P<0.01);sh-linc00467#1组与sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa侵袭细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论下调linc00467表达可抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进子宫内膜癌细胞凋亡。