肝门部胆管癌术后非O1/非O139群霍乱弧菌血流感染1例并文献复习

目的了解非O1/非O139群霍乱弧菌感染的流行病学特征、临床表现、诊断及治疗,以期提高对该病的认识。方法对1例非O1/非O139群霍乱弧菌血流感染患者的临床表现、实验室检查、治疗及转归进行回顾性分析﹐并以“非O1/非O139群霍乱弧菌”和“血流感染”为主题词,检索万方、维普和中国知网数据库,以“non-O1/non-O139 Vibrio cholerae”和“bloodstream infection”为主题词检索PubMed数据库,获取国内外报道的病例,复习非O1/非O139群霍乱弧菌血流感染的临床特征及诊疗方法。结果该例69岁男性患者肝门部胆管癌术后6个月,腹胀、发热、无腹泻,血培养检测出霍乱弧菌,经质谱、VITEK 2XL和16S rRNA基因鉴定均为霍乱弧菌,血清学确认为非O1/非O139群。使用哌拉西林抗感染治疗10 d后﹐患者康复出院。通过文献复习发现26例非O1/非O139群霍乱弧菌血流感染患者大多数有慢性肝炎、肝硬化等消化道基础疾病﹐主要症状为急性腹泻、腹胀腹痛、发热、恶心、呕吐等。菌株对多种抗菌药物敏感,予抗感染及对症治疗后80.77%患者好转出院,15.38%死亡,主要因感染性休克引起的多器官衰竭而死亡。结论非O1/非O139群霍乱弧菌血流感染好发于免疫功能低下者,尤其是慢性肝炎、肝硬化、恶性肿瘤、糖尿病患者,及时血培养检查和准确鉴定对其诊断非常重要。早期应用敏感抗生素治疗预后相对较好。

2株公园湖水源非O1/O139群霍乱弧菌的分离鉴定和致病性分析

近年来,非O1/O139群霍乱弧菌(NOVC)引起人和动物感染时有报道。本试验于2021年3月—2022年4月连续采集圆明园遗址公园湖水样本进行细菌分离培养,经16S rRNA序列分析和溶血性检测对分离株进行鉴定,并通过细胞毒性试验和小鼠感染试验对分离株的致病性进行检测;采用PCR方法对分离株的毒力相关基因ctxA、ctxB、tcpA、hlyA、rtxA、rtxC和chxA进行检测;通过系统发育进化分析对分离株的chxA基因全长进行分析;通过药敏试验对分离株的药物敏感性进行检测。结果显示,共分离鉴定出2株NOVC,NOVC分离株在血琼脂培养基上生长呈现明显的溶血现象;经过滤除菌的细菌培养液上清有溶细胞作用,对体外培养的Vero细胞具有极强的毒性作用,可引起细胞萎缩和脱落;分离株培养物和培养液上清经腹腔注射均可致死小鼠,对小鼠的半数致死量(LD_(50))为10^(7.23)CFU。PCR检测结果显示,分离株hlyA、rtxA、rtxC和chxA基因呈阳性,提示细菌的致病性可能与毒力因子的表达相关。对chxA基因的全长分析结果显示,2株分离株均可编码II型ChxA毒素,其催化域与I型毒素高度同源,但在相应区域缺失1段5个氨基酸片段(^(619)AIAKE^(623))。药敏试验结果显示,2株分离株均对环丙沙星、恩诺沙星和阿米卡星敏感,均对复方新诺明耐药。结果表明,公园水源性NOVC分离株携带多种毒力相关基因,产生溶血素等溶细胞毒素,可致死小鼠,对抗菌药呈多重耐药,对水生动物和环境的公共卫生具有潜在的威胁。

非O1群非O139群霍乱弧菌血流感染的诊疗及防控2例报告

目的对2例血流感染患者血培养标本分离的弧菌属进行鉴定和药敏试验,分析非O1群非O139群霍乱弧菌(NOVC)的微生物学特性,为霍乱弧菌感染的诊断和防控提供依据。方法通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、API细菌生化反应鉴定卡、VITEK 2 Compact鉴定仪和16S rRNA基因测序鉴定2株弧菌分离株,并进行血清学分型、毒力基因分子检测和耐药表型检测。结果2株菌株均鉴定为霍乱弧菌,血清学试验确定为NOVC,毒力基因ctx AB检测阴性;药敏试验显示1株菌对氨苄西林、阿奇霉素、多西环素和氯霉素敏感,对四环素和复方磺胺甲唑耐药,另一菌株对所有检测抗菌药物均敏感。结论NOVC所致的血流感染在中国少有报道,完善血培养标本分离霍乱弧菌的准确鉴定、分型和耐药表型检测,对诊断、治疗和防控霍乱弧菌感染具有重要价值。

非O1霍乱弧菌感染罗氏沼虾肝胰腺转录组分析

非O1霍乱弧菌是严重危害罗氏沼虾养殖生产的主要病原之一,为探究非O1霍乱弧菌感染罗氏沼虾引发的宿主免疫应答反应,采用接近半致死密度(1×10^(6)cfu/mL)的菌液对健康罗氏沼虾[体质量(7.22±0.46)g]进行人工感染,感染24 h取肝胰腺组织样本,基于Illumina Hiseq 2000测序平台开展罗氏沼虾感染个体与未感染个体肝胰腺组织的转录组测序。结果显示,所得序列经质控、组装后获得85794个单基因,平均长度1208 bp。与对照组相比,感染组共发现3236个差异表达基因,其中上调基因1745个,下调基因1491个,根据注释信息对差异表达基因进行筛选,获得16个免疫相关基因,其中C型凝集素3、丝氨酸蛋白酶抑制因子1等9个免疫基因表达量显著上升,血蓝蛋白、消道夫受体B等7个免疫基因表达量显著下降。对差异表达基因进行GO富集分析发现,免疫系统过程、抗氧化活性和对刺激的反应等与免疫相关的条目被显著富集;差异表达基因经KEGG富集分析显示,非O1霍乱弧菌感染可诱导罗氏沼虾吞噬体、ECM-受体互作通路、霍乱弧菌感染通路、白细胞跨内皮迁移通路、NOD样受体信号通路等多个免疫通路被显著富集,推测上述基因和通路可能在罗氏沼虾应对非O1霍乱弧菌感染的防御机制中起重要作用。随机选取8个免疫相关差异表达基因进行实时荧光定量PCR分析,其结果与RNA-seq具有相似的表达趋势,表明转录组测序结果可靠。本试验可为揭示罗氏沼虾防御病原非O1霍乱弧菌感染的分子机制提供基础数据。

抗水产病原非O1/O139霍乱弧菌的中草药筛选及抑菌效果分析

为筛选能有效抑制水产病原非O1/O139霍乱弧菌(non-O1/O139 Vibrio cholerae)生长的中草药,本研究通过水煎法获得黄柏、五倍子等23味中草药的提取物,采用琼脂打孔法测定其对非O1/O139霍乱弧菌的抑制作用,并用试管二倍稀释法测定了抑制效果较强的8种中草药对非O1/O139霍乱弧菌的最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)和最小杀菌浓度(Minimum Bactericidal Concentration,MBC)。结果表明:五倍子、白芍、黄柏、诃子、山楂、石榴皮、地榆、木瓜等8种草药对非O1/O139霍乱弧菌具有较强的抑制作用,其中非O1/O139霍乱弧菌对五倍子、白芍和黄柏高度敏感,其抑菌圈直径分别为(19.92±1.24)mm、(19.50±0.74)mm和(18.92±2.12)mm。五倍子抑菌和杀菌作用最强,MIC和MBC均为7.81 mg/mL,其次是白芍,MIC为15.63 mg/mL,MBC为31.25 mg/mL。本研究为中草药防治由非O1/O139霍乱弧菌引起的水产动物疾病提供了理论参考。

胶质瘤患者血培养检出非O1非O139群霍乱弧菌1例

非O1、非O139群霍乱弧菌(NOVC)可导致免疫功能低下个体肠道和肠道外感染。NOVC菌血症在NOVC感染中死亡率最高,近年来报道数量有所增加。然而,部分临床医生对NOVC菌血症知之甚少。本文报道了1例脑肿瘤患者,其血培养中分离到1株NOVC,这种现象在NOVC感染病例中非常罕见,且患者的感染途径不明。现将病例相关资料整理报道。

2例非O1群/O139群霍乱弧菌血流感染病例分析

国内外所报道非O1/非O139群霍乱弧菌(non-O1/non-O139 vibrio cholerae, NOVC)血流感染案例的患者基础疾病集中在肝脏疾病和血液系统疾病,但传染途径大多不明。本文通过回顾公安县两例肝病患者血流感染NOVC后的临床表现和不同转归,结合流行病调查,探讨其血流感染的感染途径和预防措施。建议肝病患者发生腹泻、发热等症状时,应及时就医,临床医师应警惕此类患者的NOVC血流感染,重视血培养,尽早发现病原体,根据培养结果对症治疗,提高患者存活率。

霍乱弧菌溶血素共调节蛋白(Hcp)的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

目的原核表达、纯化霍乱弧菌溶血素共调节蛋白(hemolysin coregulatory protein,Hcp),并制备其多克隆抗体。方法PCR扩增霍乱弧菌Hcp基因并克隆入pET28a载体中构建重组表达载体;将重组载体pET28a-hcp转化E.coil BL21(DE3)中,进行表达条件优化及表达形式鉴定。获取可溶性Hcp蛋白行Ni-NTA柱纯化,纯化的Hcp蛋白免疫BALB/c小鼠以制备多克隆抗体,并用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,以评估其免疫原性。再以Western blot法分析抗体对霍乱弧菌Hcp蛋白的特异性识别。结果重组载体pET28a-hcp的酶切片段与预期相符,测序结果与GenBank数据库中hcp基因序列一致,成功构建pET28a-hcp重组质粒,重组质粒经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达相对分子量为28kD的目的蛋白;经Ni-NTA柱纯化后获得较纯的Hcp蛋白,免疫小鼠可获得效价为1∶512000的抗Hcp多克隆抗体(anti-Hcp);Western blot鉴定结果显示anti-Hcp具有识别霍乱弧菌Hcp蛋白的特异性。结论成功获得可溶形式表达的Hcp蛋白,免疫小鼠后获得高效价的抗Hcp多克隆抗体,为后续研究Hcp蛋白在非O1/非O139群霍乱弧菌T6SS致病过程中的作用奠定了基础。

非OI群霍乱弧菌血清学分型系统的建立及初步应用

本文报道了非OI群霍乱弧菌血清学分型系统的建立。应用这一分型系统对我国广东、福建及河南三省分离的549株菌进行血清学定型。菌株可分为55型。其中的优势型为VBO2、7及9。菌型的分布与分离地区有关。并发现有19个菌型是日本及美国分型系统所未包括的新菌型。血清的分型率为83.79%。对患者分离的菌株有较高的分型率。

暗纹东方鲀非01霍乱弧菌的鉴定及毒力基因检测

在对养殖暗纹东方病害调查中,从呈典型症状病鱼腹腔和肠道粘液中分离到2株(J-1和H-3)菌株,经生化特性和血清型鉴定为非01群霍乱弧菌(Non-01Vibrio cholerae)。注射、创伤和浸泡3种方式进行人工感染试验表现出较强的致病性,出现症状与自然发病鱼相同。为进一步确认分离菌株的分类地位,使用P1、P2引物,以非01群霍乱弧菌N92001菌株和01群霍乱弧菌N16961菌株为对照,对分离菌株进行PCR扩增,得到451bp的DNA片段。根据现有霍乱弧菌肠毒素ctxA基因序列设计引物P3,P4,以N16961菌株为阳性对照,PCR扩增结果均得到大小为400bp的DNA片段。在对H-3菌株的扩增片段进行纯化、克隆和测序,得到407bp序列,该菌株与N16961菌株中肠毒素ctxA基因序列的完全一致,证实该片段源于ctxA基因。进一步说明从暗纹东方体内分离到的J-1和H-3菌株具有霍乱肠毒素ctxA,有一定的致病力。

PCR快速测定法在检测海河水体非01群霍乱弧菌中的应用

目的合成一对霍乱弧菌外膜蛋白引物 ,采用PCR技术对海河水系非01群霍乱弧菌感染状况进行了检测。方法在海河水系5处水点采集水样102份 ,以PCR技术和常规分离培养进行了比较 ,以非01群霍乱弧菌Vbo35型、志贺痢疾、伤寒、大肠杆菌作为PCR扩增时的阴、阳性对照。结果102份水样PCR检测总阳性率为52% ,扩增片段588bp,与常规分离培养比较 ,符合率为100%。结论霍乱弧菌外膜蛋白引物快速检测海河水系非01群霍乱弧菌敏感性高 ,特异性强 ,可提高检测速度4～5倍 。

一起引起食物中毒的非O1群霍乱弧菌实验室鉴定

目的查明引发浙江省宁波市某服饰公司食物中毒事件的病原菌。方法对采集到可疑食品和肛拭等标本参照GB/T4789-2003标准进行细菌的分离、鉴定及血清学分型;参照霍乱防治手册检测菌株的CT毒力基因。结果6份患者大便标本与14份轻微腹泻患者或腹部不适者大便标本中检出非O1群霍乱弧菌O29血清型9株,其中腹泻患者标本检出6株,轻微腹泻患者中检出3株,检出率为45.0%。未检出志贺菌、副溶血性弧菌、致病性大肠杆菌、O1群和O139霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌,剩余食物未检出志贺菌、副溶血性弧菌、致病性大肠杆菌、O1群和O139霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌。结论此次食物中毒为非O1群霍乱弧菌O29血清型所致。

蛭弧菌的分离鉴定及其对非O1霍乱弧菌的消除作用研究

从海洋环境中分离到2株蛭弧菌(A-1和A-2),研究了其对6株不同来源非O1霍乱弧菌的消除作用,以探索其对由非O1霍乱弧菌所引起的腹泻疾病的预防效果。实验结果表明,在20～35℃温度条件下,蛭弧菌均有较好的裂解效果,30℃时裂解能力最强;在pH6.5～8.1条件下,蛭弧菌均有较好的裂解能力,pH为7.2时,达到最佳裂解效果;A-1能裂解其中5株非O1霍乱弧菌,A-2能裂解其中4株非O1霍乱弧菌,而2株蛭弧菌协同作用,能全部裂解6株非O1霍乱弧菌。本研究结果揭示了蛭弧菌作为生物消除剂在预防由非O1霍乱弧菌所引起的腹泻疾病方面具有潜在应用价值。

非O1非O139群霍乱弧菌致肝硬化肝腹水患者感染败血症

目的对从肝硬化肝腹水患者血液中感染的疑似霍乱弧菌进行实验室鉴定及药物敏感性试验.方法调查回顾患者的临床症状、原发病、实验室检查结果、治疗和预后;用梅里埃Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定分析系统、手工微量管生化反应及聚合酶链式反应法鉴定细菌,采用K-B药敏纸片法进行药物敏感性测定,血清毒力鉴别用玻片凝集法确定.结果经过系列试验鉴定为非O1非O139群霍乱弧菌,药物敏感性试验显示该菌对氨苄青霉素、哌拉西林、头孢他啶、头孢哌酮、舒巴坦、头孢曲松、头孢吡肟、亚胺培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星、加替沙星、复方新诺明均敏感.结论细菌为不产霍乱毒素的非O1非O139群霍乱弧菌,并对常用抗生素均敏感.

肝硬化患者非O1非O139型霍乱弧菌败血症

目的分析非O1非O139型霍乱弧菌感染的肝硬化败血症患者的临床和实验室特点。方法回顾调查病人的临床基本情况、原发病、实验室结果、治疗和预后;BacT/Alert全自动血培养微生物检测仪培养病人全血标本,用VITEK仪器鉴定细菌。药敏试验根据CLSI(2005)规定,K-B药敏纸片测定法进行。结果3例患者均为肝硬化病人;感染发生在夏季;经左氧氟沙星、加替沙星或联用头孢曲松治疗后痊愈。结论非O1非O139型霍乱弧菌败血症推荐使用头孢三代或氟喹诺酮类抗生素治疗。

宁波市人群中非O1群霍乱弧菌携带及其毒性研究

目的：非O1群霍乱弧菌是我市感染性腹泻的常见病原菌，通过研究其在人群中携带频度和产生毒素的种类，有利于对该疾病采取针对性措施。方法：用筛检方法分离菌株，经系统生化血清分型确定型别，K-B法测定菌株的耐药性，用PCR、ELISA和动物等试验测定细菌的毒性。结果：从18416份标本中检出O1群霍乱弧菌236株，检出率为1．28％，其中腹泻病人检出率为8．3％，健康人群为0．3％，分属于25个血清型、9个噬菌体，除对青霉素有较高的耐药性外，其他常用抗生素敏感在67．6％-100．0％之间，发现有15．3％的菌株对弧菌抑制剂O／129抗性。92．0％的非O1群霍乱弧菌对小鼠有毒性，CT毒素检出率为1．3％；ST毒素检出率为78．8％；溶血素血平板法阳性率为94．4％、试管法阳性率为88．9％；未检出耐热性溶血素、Vero毒素等多种。结论：宁波市人群中携带一定数量的非O1群霍乱弧菌，腹泻病人中检出率较高，健康人群携带率稍低，与报道一致。7-10月份为检出高峰，与疾病流行规律相符。菌株的生化和药敏特征未发现变异，但抗弧菌抑制剂O／129现象较严重，在鉴定、鉴别时应加以关注。从细菌中检出多种致病毒素，并对小鼠的有较强的致病作用。说明该菌的综合毒力较强。结果提示我们，非O1群霍乱弧菌的致病因子复杂程度高于O1群霍乱弧菌，应引起我们的重视。

异育银鲫非O1/非O139群霍乱弧菌的分离及鉴定

为鉴定引起异育银鲫发病的疫情的病原,本研究从病鱼体内分离到细菌分离株,经动物回归试验证明为导致异育银鲫发病的致病原。对病原菌株进行形态学、生理生化测定以及16S rDNA序列分析,显示该菌株与霍乱弧菌(Vibrio cholerae)表型特征一致,而且在系统发育树中也是与霍乱弧菌相聚类,两者16S rDNA序列相似性高达99.93%。综合表型特征与基因序列分析的结果表明,该病原菌株应归属于霍乱弧菌。血清型鉴定为非O1/非O139群霍乱弧菌。药物敏感性试验结果显示该株霍乱弧菌对喹诺酮类、头孢类、氨基糖苷类、大环内酯类,四环素类以及β-内酰胺类等药物敏感。

浙江省丽水市首起非O1群霍乱弧菌食物中毒分子生物学溯源分析

目的利用分子生物技术了解引起食物中毒的非O1群霍乱弧菌携带毒力基因情况及耐药性特征。方法对检出的非O1群霍乱弧菌菌株进行耐药性分析,同时采用聚合酶链反应(PCR)方法进行霍乱弧菌肠毒素基因(Ctx)、小带联结毒素基因(Zot)、辅助霍乱肠毒素(Ace)基因的检测,并参照美国CDC PulseNet的统一方法进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型并作同源性分析。结果从8例患者和8份食品标本中分离到7株非O1群霍乱弧菌,未检出Ctx、Zot、Ace等毒素基因,检出溶血素,Dienes试验和脉冲场凝胶电泳图谱显示病人分离株和剩余食物检出株同源。经耐药性分析,菌株除对复方新诺明、氨苄西林100%耐药外,对其余抗生素均较敏感。结论通过实验证实本次食物中毒是由聚餐者共同食用冷菜凤爪所致,流行病学追溯从患者共同食用冷菜和海产品中非O1群霍乱弧菌毒力基因、耐药性和脉冲场凝胶电泳分析为同源菌株。