马来丝虫非放射性寡核苷酸探针的制备及现场应用研究

目的 寻找一种高度特异、敏感的马来丝虫的检测方法 ,并将其用于现场检测。 方法 根据马来丝虫 Hha 重复序列 ,合成马来丝虫特异性引物 1对和寡核苷酸探针 1条 ,采用地高辛加尾标记试剂盒对人工合成寡核苷酸探针进行非放射性标记 ,并对标记后的探针进行标记效率检测 ;将血液标本和蚊虫标本分别用蛋白酶 K等处理液和 Chelex- 10 0处理后 ,结合 PCR技术 ,对该探针的特异性和敏感性进行检测 ;并将此探针用于平远县马来丝虫病的监测。 结果 经测定 ,标记后探针的有效浓度为 1.5～ 2 fmol/μl;结合 PCR技术 ,该探针可检出 10 0 μl阳性血样中 1条微丝蚴 ;5 0只蚊中含有 1只只感染 1条幼丝虫阳性蚊亦能准确检出。班氏丝虫等其它寄生虫标本的检测结果均为阴性 ;采自平远县的 2 4 0份血液标本和 10 0 8只中华按蚊标本均为阴性。 结论 该探针杂交检测方法特异性强 ,敏感性高 ,可作为一种新的马来丝虫病监测方法在现场中使用。

松材线虫杂交探针制备与检测技术

选用松材线虫特异引物对M05F2/R1(F1:5-′CGGGT CATGG CTGGA GGTAT CGT-3,′R1:5′-TG-GCT CAATG GCAAA TCCTT CGTA-3′),以D ig-11-dUTP代替部分dTTP,采用PCR技术,直接扩增松材线虫特异片段作为松材线虫地高辛探针。结果表明,地高辛探针长度一致,为600 bp。产量较高,探针质量浓度达280mg/L。采用探针D IG-F2/R1对线虫基因组DNA进行点杂交,19个松材线虫株系均表现有较强的杂交信号,而8个拟松材线虫、1个霍夫曼尼伞滑刃线虫、1个大核滑刃线虫、1个长尾属线虫均无杂交信号。且用该探针可以稳定地检测出单条松材线虫。因此,该探针特异性强,灵敏度高。该探针及其配套的杂交检测技术可以用于检测线虫样本中是否含有松材线虫。

I型马立克氏病病毒特异性核酸探针试剂盒的制备和应用

应用非放射性的地高辛标记法来标记I型马立克氏病病毒特异性DNA ,通过优化核酸探针标记、检测的步骤 ,建立了马立克氏病的诊断试剂盒。该探针在 1∶12 5 0的工作浓度下 ,能检出 1～ 2pg/μl的马立克病病毒基因组DNA ,探针与其它病毒DNA不发生反应 ,具有较好的特异性 ,该试剂盒稳定性较好 ,可重复使用 ,初步具备了诊断试剂盒的基本要求。