NADase细菌毒素的非放射性测定法

目的：建立一种测定ＮＡＤａｓｅ细菌毒素活性的非放射性测定法。方法：建立一个ＮＡＤ（辅酶Ｉ）依赖的显色系统，在该系统中，ＮＡＤ接受乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）从乳酸脱下来的氢，再通过ＰＭＳ（吩嗪二甲酯硫酸盐）传递给ＩＮＴ（碘化硝基四氮唑蓝），使后者还原而显色。如果ＮＡＤａｓｅ毒素分解ＮＡＤ，就会打断递氢链而抑制显色反应。结果：显色系统中，ＮＡＤ含量与显色有良好线性关系（Ｒ＝０．９８９８）。绿脓杆菌外毒素Ａ分解ＮＡＤ而抑制显色反应。以毒素含量为自变量，以毒素对显色反应的抑制为应变量，建立了对数线性回归方程Ｙ＝１２．５Ｘ０．２６，当Ｙ＝５０％时［即显色系统中的ＮＡＤ有半数（２５０ｎｇ）被分解］，Ｘ＝２０７（ｎｇ）。定义分解１ｎｇＮＡＤ的毒素活性为一个单位，则２０７ｎｇ毒素含有２５０个毒素活性单位。该方法的测定敏感性达到“ｎｇ”水平。结论：本方法是一种敏感的测定ＮＡＤａｓｅ细菌毒素活性的非放射性测定方法。