微核形态用于区分非整倍体毒剂和染色体断裂剂的研究

目的 :通过比较非整倍体毒剂和染色体断裂剂诱导的各种微核形态类别的差异 ,探讨以微核形态指标区分两类诱变剂的可能性。方法 :对 6种标准诱变剂 (非整倍体毒剂 :秋水仙碱 ,长春新碱 ;染色体断裂剂 :环磷酰胺 ,丝裂霉素C ,乙基磺酸甲酯 ,γ射线 )诱导的小鼠骨髓红细胞微核 ,进行形态学分类分析。结果 :①非整倍体毒剂诱导的环形微核率显著高于染色体断裂剂 (分别为 33 8± 2 8,17 4± 8 3;P =0 .0 0 3) ,而圆形微核率显著低于后者 (分别为 5 1 6± 6 5 ,72 3± 9 1;P <0 .0 0 0 1) ,肾形微核率有高于染色体断裂剂诱导的微核的趋势 ,但差别无显著性 (分别为 14 6± 6 7,10 2± 6 3,P =0 .0 7) ;两类诱变剂诱导的 3种类别的微核 95 %可信区间差异很大 ,其中圆形微核率和环形微核率完全分离 ;②得到通过微核形态区分两类诱变剂的判别方程。结论 :微核的圆形。

通过测定微核面积和DNA含量来检出非整倍体毒剂的应用

1980年Yamamoto等首先报道了对7种染色体断裂剂和4种纺锤体毒剂诱导的小鼠骨髓红细胞MN直径的测定结果。他们用照片放大与显微尺测定结合,把MN直径大于1/4胞浆直径者定为大MN,结果发现断裂剂组大MN只有0～2.5%,而纺锤体毒剂组高达44%～47%,MN直径断裂剂组多在1μm内,纺锤体毒剂组多在1～4μm内。两类毒剂差异非常显著。

非整倍体毒剂和染色体断裂剂的FCM微核检测区分方法研究

目的研究流式细胞术(flow cytometry,FCM)微核检测筛选非整倍体毒剂和染色体断裂剂的方法。方法采用CD71荧光抗体和碘丙啶(PI)双染色,通过FCM检测环磷酰胺(CP)和秋水仙素(COL)诱导的NIH小鼠外周血含微核网织红细胞的PI荧光强度,比较它们与二倍体细胞PI荧光强度中位数的比值,以探索通过FCM微核检测筛选非整倍体毒剂和染色体断裂剂的方法。结果染色体断裂剂CP诱导的含微核网织红细胞与二倍体细胞PI荧光强度中位数的比值较低,非整倍体毒剂COL诱导的含微核网织红细胞与二倍体细胞PI荧光强度中位数的比值较高,两者间差异有统计学意义(P<0．01)。结论通过FCM检测微核PI染色强度,可初步判断诱导微核形成的因素是否具有染色体断裂剂和非整倍体毒剂毒性。

小鼠着丝粒DNA探针对流式仪分选微核的染色体组成的初步研究

本文报道用作者建立的流式细胞仪红细胞微核自动检测技术，将染色体断裂剂丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）和非整倍体毒剂秋水仙碱（ＣＯＭ）诱导的大量微核分选在载玻片上，然后使用小鼠着丝粒γ－卫星ＤＮＡ探针（约为２３４ｂｐ），对分选微核进行荧光原位杂交（ＦＩＳＨ），以显示微核（ＭＮ）内着丝粒的情况，进而判定ＭＮ是由整条染色体还是由染色体断片组成。结果ＭＮ内着丝粒荧光阳性比例为ＣＯＭ５０．１％，ＭＭＣ２２．３％。两者相差显著，藉此方法可以准确有效地将两类毒剂区分开。

丙烯酰胺诱导NIH3T3细胞微核染色体的双色荧光原位杂交分析

目的 分析丙烯酰胺 (AA)诱导的NIH 3T3小鼠成纤维细胞微核 (MN)染色体组成 ,判断其遗传毒性。方法 用着丝粒和端粒DNA探针双色荧光原位杂交检测MN的染色体组成。结果 AA诱导的NIH 3T3小鼠成纤维细胞总MN率和既含着丝粒又含端粒信号的MN率均有显著的剂量 -反应关系 (r =0 .992 9、0 .9933,P <0 .0 1)。高剂量 (40 0 μg/ml)时 ,AA诱导的MN中 6 5 .9%既含着丝粒信号又含端粒信号 ;2 6 .0 %只含端粒信号 ;8.1%无任何杂交信号。AA诱导的含着丝粒信号MN率 (2 7.0× 10 -3 )是不含着丝粒信号MN率 (14.0× 10 -3 )的 1.6倍 ,差异有显著性(P <0 .0 1)。结论 AA既可诱导由染色体断片组成的MN ,又可诱导由整条染色体组成的MN。AA既是一种断裂剂又具有非整倍体毒性 ,高剂量时非整倍体毒性较明显。