非整合型质粒重编程脐带血CD34^+细胞形成诱导性多潜能干细胞的研究

本研究探索和优化非整合质粒的方法,将人脐带血来源的CD34+(CB CD34+)细胞进行重编程,建立无病毒的iPS技术体系。利用细胞核转染仪将质粒pEB-C5和pEB-Tg转入短暂培养后的CB CD34+细胞中,使其进行重编程形成iPSC,14 d后观察到2×106CB CD34+细胞中约有200个类似ES细胞特征的克隆出现,并对产生的iPSC进行体内外多能性鉴定及细胞核型检测。结果表明,重编程后的CB CD34+细胞的多能性基因表达与ESC类似,细胞核型正常,外源基因无插入,且具有体内分化成三胚层的全能性。结论:利用非整合型质粒的方法重编程CB CD34+细胞形成iPSC,该方法无外源基因插入、重复性好、操作简单、且效率较高,为建立相对安全的iPSC提供了一个行之有效的途径,为深入探索iPSC应用于临床药物的筛选、组织工程和再生医学研究等提供了很好的研究材料。

两种非整合载体重编程人脐带血CD34^+细胞形成诱导多能干细胞的研究

目的探索两种非整合载体重编程人脐血来源的CD34^+细胞形成诱导性多能干细胞(iPSCs)的方法。方法利用细胞核转染仪分别将两组非整合质粒转入短暂培养后的脐带血CD34^+细胞中,使其进行重编程形成iPSCs,14d后两种方法均可观察到2×10~6个脐带血CD34^+细胞中约有900个类似ES细胞特征的克隆出现,并对产生的iPSCs进行体内外多能性鉴定及细胞核型检测。结果两种方法重编程效率基本相同,重编程形成的hiPSCs多能性基因OCT4、SOX2、NANOG的表达量与hES细胞系H1比较接近(P>0.05),而与CD34+细胞差别较大(P<0.05),且具有体内分化成三胚层的全能性。结论两种非整合质粒重编程人脐带血来源的CD34^+细胞形成iPSCs的方法,效率基本相同,均无外源基因插入,为建立相对安全的iPSCs提供了有效途径,为临床科研、药物筛选和再生医学研究等提供了较好的方法。

质粒重编程诱导多潜能干细胞及定向分化神经干细胞

目的探讨游离质粒载体重编程诱导小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)为非整合型诱导多潜能干细胞,并在体外定向分化为神经干细胞(neural stem cells,NSCs),为神经干细胞移植治疗神经损伤提供稳定、安全的细胞来源。方法使用电转仪将质粒p EP4-EO2S-ET2K转入小鼠MEFs,经诱导培养重编程为诱导多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs),i PSCs在不同诱导培养基中经2次悬浮及贴壁培养分化为NSCs,在体内及体外实验鉴定i PSCs多向分化潜能特性及NSCs特性。结果体内外实验显示i PSCs具有与胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)相似的多向分化潜能,且不整合外源性基因。i PSCs进一步分化的NSCs其相关标志基因表达与野生型NSCs相近,且较i PSCs显著增加,免疫荧光显示NSCs高表达NSC标志物NESTIN及PAX6,在体外存活能分化为神经元、少突胶质细胞及星形胶质细胞。结论游离质粒能重编程诱导非整合型i PSCs,并定向分化为神经干细胞及神经元,是神经损伤修复的理想种子细胞。

骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤的分子机制

随着对生物学及分子生物学的不断深入研究,细胞移植治疗脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）已经成为一种很有希望的治疗手段[1]。在各种干细胞类型中,骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal cells,BMSCs）作为一种多潜能干细胞,具有取材方便、来源较多、可自体移植、能在宿主内中长期存活、低免疫原性、能定向诱导分化为神经元样细胞和神经胶质细胞等优势~[2],是目前比较理想的移植细胞类型之一。