基于多次非暴露式气管滴注的染毒法研究温石棉致大鼠肺损伤的作用

温石棉是一种安全性存在争议的石棉,合理可行并且能够真实反映其暴露致病过程的染毒方法对深入研究其致病机理有着重要意义。本文采用多次非暴露式气管滴注的染毒方法对雄性Wistar大鼠分别进行不同浓度温石棉悬液的染毒,在染毒1、3和6个月后记录体重和肺脏器系数,观察肺组织大体及苏木素-伊红(HE)染色的病理形态,对支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数进行分类计数,并测定总蛋白(TP)、乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)的含量。结果表明,多次滴注的方式大鼠死亡率较低,并且每次滴注后能够苏醒的大鼠没有死亡发生;随着四川新康温石棉染毒时间的延长和染毒剂量增加,大鼠体重增长缓慢,肺脏器系数升高,肺大体出现水肿、肉芽肿、萎缩实质化,HE染色观察则表现为炎性细胞增多、肺泡结构遭到破坏以及出现纤维化;随着染毒时间的延长,支气管肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞百分比呈上升趋势,巨噬细胞百分比呈下降趋势,TP、LDH、ACP和AKP均表现为上升的趋势,并呈现一定的剂量-效应关系。综上所述,多次非暴露式气管滴注方法可用于模拟温石棉慢性暴露的致病过程,四川新康温石棉可以通过破坏巨噬细胞、肺泡上皮细胞及肺泡上皮-毛细血管屏障造成大鼠的肺损伤。

一种简易大鼠非暴露式气管滴注方法的建立

常用的呼吸道染毒方法有暴露式气管滴注、鼻内滴注和非暴露式气管滴注。非暴露式气管滴注通过气管插管将滴注液输送到肺部,无需手术切口暴露气管,染毒剂量准确且对实验动物伤害较小。非暴露式气管滴注的方法有:盲探插管、透射光插管,使用光纤、喉镜、头戴式放大镜、内窥镜等辅助插管,但这些方法大多需要特殊设备,对于大鼠等小型哺乳类动物而言,由于其口腔、咽部解剖学情况使得插管较为困难,现今还没有标准的气管插管设备供大鼠使用,且操作技能要求较高[1-7].

小鼠肺组织PM_(2.5)染毒方法的研究进展

PM_(2.5)作为重要的大气污染物,其暴露会引起机体的氧化应激反应及炎症反应。因此,优化PM_(2.5)染毒方法对研究其致病机制十分重要。该文介绍了小鼠急性肺损伤模型的主要染毒方法,包括雾化吸入法、鼻腔吸入法、暴露式气管滴注法、非暴露式气管滴注法等,并指出了每种滴注方法的优缺点。目前应用较多的方法为暴露式气管滴注法,但该方法为有创操作,存在重现性差、操作繁琐等问题;目前大量采用非暴露式气管滴注法,该方法虽精确度较暴露式略有不足,但近几年已有很大改进,是未来气管滴注方法发展的主流方向。

不同地域的典型温石棉对wistar大鼠的氧化损伤作用

目的探讨4种不同地域的典型温石棉对wistar大鼠肺部氧化损伤作用及其作用强度比较。方法从矿区采集甘肃阿克塞、四川新康、陕西陕南和青海茫崖4种温石棉,加工成粒径小于10μm的颗粒物。X光荧光衍射分析样品主要化学成分,激光粒度分析仪测定粒径。选60只初断乳清洁级wistar大鼠,随机分为5组(陕西陕南、青海茫崖、四川新康、甘肃阿克塞温石棉染毒组和阴性对照组),染毒组采用非暴露式气管内滴注浓度为2.0 mg/ml温石棉悬液0.5 ml,染毒频率1次/月;阴性对照组采用相同方法滴注灭菌生理盐水0.5 ml。上述5组大鼠分别于实验1、3和6个月后分批处死大鼠4只,称其体质量、肺质量,肺组织苏木素-伊红(HE)染色观察病理形态改变;测定肺组织匀浆和血清中活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果四川新康和青海茫崖染毒组大鼠体质量增长缓慢,肺质量增加;HE染色显示,不同地域温石棉染毒组都有不同程度的炎性细胞聚集、肺泡结构破坏和纤维化,损伤随染毒时间延长加重;与相同染毒时间的阴性对照组比较,青海茫崖和四川新康染毒组大鼠肺组织和血清中ROS、MDA的含量分别于染毒1和3个月始增加(P<0.05),SOD活力先升高后降低(P<0.05),随染毒时间的延长,肺组织和血清中MDA含量增加(P<0.05),SOD活力呈下降趋势(P<0.05)。结论四川新康和青海茫崖温石棉可致大鼠体内产生过量ROS,导致脂质过氧化作用,抗氧化酶SOD耗竭或失代偿,清除自由基的能力下降,造成大鼠的肺氧化应激损伤,提示不同地域温石棉氧化损伤作用可能存在差异。