细胞分裂周期蛋白20、拓扑异构酶ⅡA、有丝分裂相关激酶2的表达与食管鳞状细胞癌患者临床病理特征的相关性

目的探讨食管鳞状细胞癌组织中细胞分裂周期蛋白20(CDC20)、拓扑异构酶ⅡA(TOP2A)、有丝分裂相关激酶2(NEK2)蛋白的表达与患者临床病理特征的相关性。方法选择2018年4月至2020年8月邯郸市第一医院收治的112例食管鳞状细胞癌患者为研究对象,所有患者行食管癌根治性手术,留取食管鳞状细胞癌组织、癌旁组织及正常食管组织,采用免疫组织化学法检测食管鳞状细胞癌组织、癌旁组织及正常食管组织中CDC20、TOP2A、NEK2蛋白的表达,并分析CDC20、TOP2A、NEK2蛋白的表达与食管鳞状细胞癌患者临床病理特征的相关性。结果食管鳞状细胞癌组织中CDC20、TOP2A、NEK2蛋白表达显著高于癌旁组织和正常食管组织(P<0.05),癌旁组织中CDC20、TOP2A、NEK2蛋白表达显著高于正常食管组织(P<0.05)。CDC20、TOP2A、NEK2蛋白的表达与食管鳞状细胞癌患者的性别、年龄、肿瘤直径及肿瘤位置无关(P>0.05),与肿瘤TNM分期、淋巴转移、肿瘤组织分化程度有关(P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌组织中CDC20、TOP2A、NEK2蛋白均呈高表达,且其蛋白表达水平与食管鳞状细胞癌的TNM分期、淋巴转移及肿瘤组织分化程度有关,检测CDC20、TOP2A、NEK2蛋白表达水平有助于评估食管鳞状细胞癌患者的病情进展及预后。

人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2C端基因的克隆与鉴定

目的:获得人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2(MASP-2)C端编码基因,并表达人MASP-2C端片段,为制备单克隆抗体及应用于临床相关疾病的检测奠定分子学基础。方法:采用RT-PCR技术从人胎肝组织总RNA中扩增人MASP-2C端的cDNA,克隆入pGEX-6p-2表达载体,酶切图谱分析和序列分析鉴定。结果:获得编码人MASP-2C端片段的cDNA,并且与pGEX-6p-2载体连接,转化大肠杆菌XL1-blue,成功构建人MASP-2C端片段cDNA的重组克隆。重组质粒酶切图谱分析和DNA测序分析,人MASP-2C端片段cDNA的重组克隆与GenBank中人MASP-2C端的cDNA序列一致。结论:成功克隆了人MASP-2C端片段cDNA,并在大肠杆菌中表达人MASP-2C端多肽片段。

丝氨酸/苏氨酸激酶、Wnt2通路相关蛋白及C-myc基因在肝癌中的表达及诊断价值

目的:探讨丝氨酸/苏氨酸激酶(Aurora-A)、Wnt2通路相关蛋白(Wnt2)和C-myc基因(C-myc)与肝癌发生及疾病进展的关系。方法:应用SP法检测Aurora-A、Wnt2和C-myc在60例早期肝癌、50例中期肝癌、50例晚期肝癌及40例正常肝组织中的表达情况。结果:Aurora-A在正常肝组织、早期肝癌组织、中期肝癌组织、晚期肝癌组织中的阳性表达率分别为0、30%、60%、76%;Aurora-A在肝癌组织中的阳性表达和肝癌是否存在淋巴结转移紧密相关,在没有淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率显著低于存在淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率(P<0.05);Aurora-A在高、中、低分化肝癌中的表达率分别为40%、70%、85%,分化程度越低,则Aurora-A表达程度越高(P<0.05)。Wnt2在早期肝癌组织、中期肝癌组织、晚期肝癌组织中的阳性表达率均高于正常肝组织,与早期肝癌组织相比,中期、晚期肝癌组织中Wnt2明显增加(P<0.05);Wnt2阳性表达率在有淋巴结转移的肝癌组织中高于无淋巴结转移组,但两者比较差异没有统计学意义(P>0.05);低分化肝癌组织中Wnt2阳性表达率高于中、高分化肝癌组织(P<0.05)。C-myc在早期肝癌组织、中期肝癌组织、晚期肝癌组织中的阳性表达率均高于正常肝组织(P<0.05),但早、中、晚期肝癌组织中C-myc表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);C-myc在有淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率高于无淋巴结转移的肝癌组织(P<0.05);C-myc在低分化、中分化肝癌组织中的阳性表达率均高于高分化的肝癌组织(P<0.05)。结论:Aurora-A、Wnt2及C-myc的过表达跟肝癌的发生、侵袭和转移、分化高度相关。通过综合检测Aurora-A、Wnt2和C-myc蛋白的表达对肝癌的早期诊断及预后判断具有重要价值。

Cdc2激酶与肿瘤的相关性研究进展

细胞周期蛋白依赖性激酶Cdc2在细胞周期调控中起着调控G2至M期的作用。在G2后期Cdc2与周期蛋白B（Cy-clin B）结合形成Cdc2-Cyclin B激酶复合物,称有丝分裂促进因子（MPF）,促使细胞从G2期进入M期。MPF是真核细胞有丝分裂G2～M期转换所必需的蛋白激酶,是调节细胞进入有丝分裂期最关键的蛋白酶[1]。

宫颈癌组织中Skp2和有丝分裂前期检查点蛋白的表达

目的:探讨宫颈癌组织中S期激酶相关蛋白2(Skp2)及有丝分裂前期检查点(Chfr)蛋白的表达及其与宫颈癌临床病理特征的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测60例宫颈癌组织、30例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织及30例正常宫颈组织中Skp2和Chfr蛋白的表达。结果:宫颈癌、CIN和正常宫颈组织中Skp2的阳性表达率分别为63.3%、30.0%和6.7%,而Chfr的阳性表达率分别为48.3%、73.3%和90.0%,组间差异均有统计学意义(χ2=28.525和16.484,P<0.001)。Skp2和Chfr蛋白的表达与宫颈癌的分化程度(χ2=14.713和20.356,P<0.001)及淋巴结转移(χ2=6.854和8.477,P=0.009和0.004)有关,而与肿瘤大小、临床分期无关。宫颈癌组织中Skp2与Chfr蛋白的表达呈负关联(rP=0.501,P<0.001)。结论:Skp2和Chfr蛋白的表达与宫颈癌的发生发展有密切的关系。

基于蛋白激酶NEK9/MTA2信号通路泛素化修饰探讨胃癌的转移机制

目的:基于永离有丝分裂基因A相关激酶9(NEK9)/转移相关肿瘤基因家族2(MTA2)信号通路泛素化修饰探讨胃癌(GC)的转移机制。方法:使用癌症基因组图谱(TCGA)和Kaplan-Meier Plotter数据库分析NEK9表达与GC分期、预后之间的关联。体外实验中,将GC细胞分为:对照组、shNC组、shNEK9组、shNC+NC-OE组、shNEK9+NC-OE组和shNEK9+MTA2-OE组。分别采用MTT和Transwell法测定细胞的增殖、迁移和侵袭,并通过Western blot检测NEK9、MTA2、上皮间充质转化(EMT)标记和PI3K/AKT信号通路蛋白表达。结果:TCGA数据库分析显示,NEK9 mRNA在肿瘤组织中的表达明显上调,并且与TNM分期较晚和NEK9高表达者的预后较差密切相关。此外,NEK9在7个GC细胞系中的表达明显高于正常胃上皮GES-1细胞(P<0.05)。与对照组相比,shNEK9组细胞活力、相对集落形成、EdU阳性细胞数、侵袭和迁移细胞数均显著降低(P<0.05)。此外,在shNEK9组细胞中,E-钙粘蛋白水平上调(P<0.05),波形蛋白水平下调(P<0.05)。通过免疫共沉淀试验证明NEK9与MTA2有相互作用。NEK9敲低加速了HGC-27细胞中MTA2的降解,并且MTA2泛素化在NEK9沉默的细胞中增加。与shNEK9+NC-OE组组相比,shNEK9+MTA2-OE组相对集落形成、EdU阳性细胞数和迁移和侵袭数均显著增加(P<0.05)。结论:NEK9在GC中明显上调,其敲低在体外抑制GC细胞的生长和转移。NEK9可能通过去泛素化途径稳定MTA2进而激活PI3K-AKT信号通路来对GC细胞产生促癌影响。

CDC20、TOP2A、NEK2的表达与食管鳞状细胞癌分期和预后的相关性及其对肿瘤细胞增殖和转移的影响

目的:系统分析食管鳞状细胞癌(ESCC)中细胞分裂周期20同源物(CDC20)、拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)、非有丝分裂相关激酶2(NEK2)基因表达与分期和预后的关系,探讨三者对ESCC细胞的增殖和转移能力的影响,旨在寻找理想的生物标志物和治疗靶点。方法 :收集112例ESCC患者的临床资料和组织。利用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组织化学法分析CDC20、TOP2A、NEK2基因的表达差异;通过随访对患者进行生存分析;培养ESCC细胞系,对细胞分别转染过表达CDC20、TOP2A、NEK2的重组载体pcCDC20、pcTOP2A、pcNEK2,CCK-8实验和伤口愈合实验分析ESCC的增殖率和迁移率变化。结果 :与癌旁非癌组织比,ESCC组中CDC20、TOP2A、NEK2的mRNA和蛋白水平均增高。CDC20、TOP2A的高表达与淋巴结转移和生存预后差相关;NEK2的高表达与肿瘤组织大小相关。分别与各组阴性对照组比较,pcCDC20、pcTOP2A、pcNEK2组的细胞增殖率和迁移率均升高。结论:CDC20、TOP2A、NEK2在ESCC组织中表达上调,三者都与ESCC的不良预后相关;CDC20、TOP2A、NEK2均促进ESCC细胞的增殖和迁移。CDC20、TOP2A、NEK2基因均可能是ESCC的潜在诊断和预后生物标志物。

药物诱导肿瘤细胞有丝分裂灾难机制研究

有丝分裂灾难是一种发生在细胞有丝分裂期,由于细胞分裂出现异常而造成的细胞死亡的现象,它通常伴随着细胞周期检查点异常或纺锤体结构的损伤而发生.近年来诱导肿瘤细胞发生有丝分裂灾难成为开发抗肿瘤药物的新分子靶向目标,为对传统化疗药物具有耐药性的肿瘤治疗开辟新的途径.对近年来有关有丝分裂灾难的特征以及药物诱导肿瘤细胞发生有丝分裂灾难机制的研究进展进行全面综述,为发现抗肿瘤新靶点和抗肿瘤新药提供参考依据.

NDRG2和AKT2与其磷酸化蛋白在肝癌病理组织中的应用及与临床病理的相关性研究

目的:探讨N-myc下调基因2(NDRG2)和丝/苏氨酸蛋白激酶2(AKT2)及其磷酸化蛋白(p-AKT2)在肝癌病理组织中的应用及与临床病理的相关性。方法:选择肝癌患者62例作为对象,所有患者均行手术治疗,术中取病灶组织与癌旁组织(距离病灶>5 cm)。采用荧光定量PCR技术测定标本NDRG2、AKT2 mRNA水平;采用Western Blot法测定标本NDRG2、AKT2及p-AKT2水平。结果:肝癌病灶组织与癌旁组织AKT2 mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05);肝癌病灶组织中NDRG2 mRNA水平,低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);肝癌病灶组织中NDRG2蛋白水平,低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);肝癌病灶组织中AKT2、p-AKT2蛋白水平,高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NDRG2在肝癌组织中呈低表达,而p-AKT2在肝癌组织中呈高表达,二者呈负相关性,均能参与疾病的发生、发展。

氧化应激和炎症反应中Nrf2/HO-1与MAPK的相关性

核因子E2相关因子2(Nrf2)是一种细胞内转录调节因子,血红素加氧酶1(HO-1)是其最重要的下游调控产物之一,两者的级联反应在机体抗炎和抗氧化系统中十分关键。而促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)参与体内多种氧化应激和炎症反应过程并发挥重要调控作用。MAPK与Nrf2/HO-1信号通路间具有复杂的相互作用,且这一作用在不同的研究条件下并不一致。不同的MAPK可不同程度地影响Nrf2的活化,进而影响HO-1的表达;另外,HO-1降解胆红素的产物一氧化碳及其他Nrf2调控的基因也可能对一些MAPK具有调节作用。同时,细胞内其他信号分子的影响进一步增加了MAPK与Nrf2/HO-1信号通路相互作用的多样性。

转录因子Nrf2／Bach1及MAPK激酶调控γ-GCS在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用

目的:研究转录因子红系衍生核因子相关因子-2(Nrf2)及BTB-CNC异体同源体1(Bach1)在慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织中的表达,探索其感受氧化应激调控谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的可能机制。方法:复制慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型,通过免疫组化、Westernblotting、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术研究肺组织Nrf2、Bach1、γ-GCSmRNA及其蛋白和p-ERK、p-p38、p-JNK蛋白的表达。结果:免疫组化结果显示COPD组p-ERK、p-p38、γ-GCS、Nrf2蛋白水平较对照组升高(P<0.01),而Bach1、p-JNK蛋白水平无差异(P>0.05);Westernblotting结果显示COPD组p-ERK、p-JNK、Nrf2核蛋白质水平较对照组升高(P<0.01),Bach1、p-p38浆蛋白水平较对照组升高(P<0.01)而Bach1核蛋白水平较对照组降低(P<0.01);RT-PCR结果显示,COPD组Nrf2、Bach1mRNA水平较对照组无差异(P>0.05),而γ-GCSmRNA水平升高(P<0.01);直线相关分析结果表明,γ-GCSmRNA表达水平与Nrf2、p-ERK、p-p38总蛋白质水平,Nrf2、p-ERK、p-JNK核蛋白水平和Bach1、p-p38浆蛋白质水平均呈正相关(P<0.01),而与Bach1核蛋白质水平呈负相关(P<0.01);Nrf2核蛋白质水平与p-ERK、p-JNK核蛋白水平呈正相关(P<0.01),而Bach1核蛋白质水平与p-ERK、p-JNK核蛋白水平呈负相关(P<0.01)。结论:在慢性阻塞性肺疾病的发病过程中转录因子Nrf2/Bach1可能在核内竞争反向调节抗氧化基因γ-GCS的表达;信号转导蛋白p-ERK、p-JNK在调控Nrf2/Bach1核内平衡中起重要作用,且调控主要发生在转录后水平;γ-GCS可能还存在其它转录调节机制。

FTO介导m6A修饰的PRKD2调节SIRT1/HIF-1α通路抑制糖尿病肾病足细胞损伤的机制研究

目的探究脂肪含量和肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)和丝氨酸-苏氨酸激酶蛋白激酶D2(serine-threonine kinase protein kinase D2,PRKD2)在糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)进展中的调控作用和调节机制。方法采用35 mmol/L葡萄糖对足细胞(MPC5细胞)进行高糖刺激24h构建DKD体外模型。采用FTO过表达载体(pcDNA-FTO)和PRKD2过表达载体(pcDNA-PRKD2),或空载体(vector)转染高糖诱导的MPC5细胞。通过RT-qPCR检测FTO和PRKD2过表达效率;MeRIP检测PRKD2 mRNA的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰水平;ELISA检测Caspase-3活性、IL-6,TNF-α和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)分泌量;流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot评估FTO和PRKD2蛋白水平,以及SIRT1/HIF-1α通路关键蛋白表达水平;Pearson分析FTO和PRKD2水平的相关性。结果与无高糖诱导对照组比较,高糖诱导的足细胞中FTO蛋白(0.51±0.04 vs 1.00±0.03)和PRKD2蛋白(0.45±0.03 vs 1.01±0.04)水平显著下调,差异具有统计学意义(t=13.17,16.76,均P<0.001)。高糖诱导的足细胞中FTO蛋白水平和PRKD2蛋白水平呈正相关(r2=0.7051,P<0.001)。与vector组相比,pcDNA-FTO组PRKD2 mRNA的m6A水平(0.56±0.09 vs1.01±0.13)降低,PRKD2 mRNA水平(3.16±0.14 vs 1.03±0.02)显著升高,差异具有统计学意义(t=51.37,11.82,均P<0.001)。与control组(IL-6:512.76±61.85 pg/ml,TNF-α:28.17±2.83 pg/ml,MCP-1:157.31±17.69 pg/ml)和vector组(IL-6:498.41±87.51 pg/ml,TNF-α:26.35±5.47 pg/ml,MCP-1:165.52±16.87 pg/ml)比较,pcDNA-PRKD2组IL-6(301.86±21.85 pg/ml),TNF-α(11.06±4.12 pg/ml),MCP-1分泌量(81.45±9.03pg/ml)显著减少,差异具有统计学意义(F=7.51,10.47,61.97,均P<0.01)。与control组(Caspase-3:689.65±79.5U/L,细胞凋亡率:22.31%±2.69%)和vector组(Caspase-3:715.91±113.58 U/L,细胞凋亡率:21.07%±3.28%)比较,pcDNA-PRKD2组Caspase-3活性(437.64±104.76 U/L)和细胞凋亡率(8.41%±3.15%)下降,差异具有统计学意义(F=2.35,79.13,均P<0.01)。与control组(SIRT1:1.01±0.05,HIF-1α:1.03±0.07)和vector组(SIRT1:0.97±0.05,HIF-1α:1.02±0.03)相比,pcDNA-PRKD2组SIRT1蛋白(3.51±0.15)水平升高,HIF-1α蛋白(0.37±0.07)水平降低,差异具有统计学意义(F=31.54,8.31,均P<0.01)。结论FTO介导m6A修饰的PRKD2通过SIRT1/HIF-1α通路抑制高糖诱导的足细胞炎症反应和细胞凋亡。

针灸预处理对胃溃疡大鼠胃黏膜状态及Gli 1/Gli 2/Sufu信号通路的影响研究

目的:研究针灸预处理对胃溃疡大鼠胃黏膜状态及胶质瘤相关癌基因同源物1(Glioma-associated oncogene homolog 1,Gli1)/胶质瘤相关癌基因同源物2(Glioma-associated oncogene homolog 2,Gli2)/丝氨酸/苏氨酸激酶Fused抑制物(Sufu)信号通路的影响,探究针灸预防胃黏膜损伤的作用机制,为针灸在临床治疗胃溃疡疾病提供实验依据和理论支撑。方法:52只大鼠随机分为正常组、模型组、灸预处理组、针刺预处理组,每组13只。正常组、模型组只做固定;对灸预处理组和针刺预处理组艾灸中脘、足三里穴,每穴20min,1次/d,连续灸8d。之后对灸预处理组和针刺预处理组大鼠进行无水乙醇+阿司匹林混悬液灌胃造模。观察大鼠一般情况及胃黏膜组织病理学变化;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)浓度,蛋白质印迹法(Western blot)分析大鼠胃黏膜组织Gli 1、Gli 2、Sufu蛋白表达。结果:模型组可见上皮细胞结构破坏不完整,胃黏膜组织损伤明显,UI指数评分显著高于正常组(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠血清MDA、GPX浓度升高(P<0.05),SOD浓度降低(P<0.05);与模型组相比,针灸预处理组MDA、GPX浓度降低(P<0.05),SOD浓度增加(P<0.05);与正常组比较,模型组大鼠Gli1、Gli2、Sufu蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,针灸预处理组大鼠Gli1、Gli2、Sufu蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:针灸预处理能改变胃溃疡大鼠胃黏膜状态,其机制可能与Gli 1/Gli 2/Sufu信号通路活化有关。

基于TCGA数据分析NEK2基因在恶性胸膜间皮瘤中的表达及预后意义

目的 分析永不有丝分裂基因A相关激酶2(NEK2)基因在恶性胸膜间皮瘤(MPM)中的表达及预后意义。方法 下载癌症基因组图谱(TCGA)数据库MPM基因表达数据、临床病理数据和生存状态数据;使用perl软件和R语言的limma、timeROC等程序包作NEK2基因在MPM中的差异分析、临床病理相关性分析、COX单因素和多因素分析以及基因富集分析,并绘制ROC曲线;利用TIMER2.0数据库分析MPM中NEK2表达与常见的免疫细胞浸润的相关性。选取12例MPM组织和6例非MPM胸膜组织,通过RT-qPCR的方法验证NEK2基因在MPM与非瘤组织中的表达情况。结果 与正常肺组织相比,NEK2在MPM组织中高表达(P<0.001)。NEK2基因mRNA表达量与MPM淋巴结分期具有显著相关性(P<0.05);NEK2高表达与MPM患者预后不良相关(P<0.001);NEK2基因表达与MPM中B淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞浸润水平呈正相关(P<0.05),并在细胞周期、DNA复制、剪接体、mRNA监测等通路显著富集。在收集到的病例样本中,与非MPM胸膜组织相比,NEK2基因在MPM组织中的表达量显著增高(P<0.01)。结论 NEK2在MPM组织中高表达,且NEK2在MPM中高表达提示预后不良,可能成为治疗MPM的潜在靶点。

细胞分裂周期相关蛋白激酶7和微小染色体维持蛋白2的表达与弥漫大B细胞淋巴瘤患者预后的关系

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）组织中细胞分裂周期相关蛋白激酶7（Cdc7）和微小染色体维持蛋白2（MCM2）的表达以及与患者预后的关系。方法收集经病理证实的60例DLBCL患者的临床资料，应用荧光定量PCR法测定患者外周血和骨髓中Cdc7和MCM2基因的表达，分析Cdc7和MCM2基因表达与患者预后的关系。结果外周血Cdc7高表达组和低表达组患者的2年生存率分别为38．3％和65．4％（P=0．001），骨髓Cdc7高表达组和低表达组患者的2年生存率分别为37．2％和75．5％（P=0．032），外周血MCM2高表达组和低表达组患者的2年生存率分别为44．0％和68．2％（P=0．025），骨髓MCM2高表达组和低表达组患者的2年生存率分别为39．0％和63．4％（P=0．007）。外周血和骨髓中Cdc7和MCM2基因高表达是DLBCL患者的预后不良因素。结论Cdc7和MCM2的表达与传统预后指标相结合可以准确预测DLBCI．患者的预后，靶向调控Cdc7和MCM2通路可能成为治疗难治性DLBCL患者的新途径。

TOP2a、Nek2及RRM1在胃癌癌组织中表达及临床意义

目的探讨拓扑异构酶2a(TOP2a)、丝/苏氨酸激酶NIMA相关激酶2(Nek2)、核苷酸还原酶亚基1(RRM1)在胃癌癌组织中的表达及临床意义。方法回顾性研究,通过免疫组化法测定60例胃癌癌组织(观察组)、30例正常组织(对照组) Top2A、NEK2、RRM1表达,并分析其表达与胃癌患者临床病理特征的关系。结果观察组Top2A、NEK2、RRM1阳性率分别为66. 67%、65. 00%、83. 33%,均显著高于对照组的10. 00%、13. 33%、16. 67%,差异有统计学意义(P <0. 05);胃癌组织Top2A表达与患者TNM分期、分化程度、浸润深度及淋巴结转移显著相关(P <0. 05),NEK2表达与患者分化程度、淋巴结转移显著相关(P <0. 05),RRM1表达与患者分化程度、浸润深度显著相关(P <0. 05);胃癌组织Top2A表达与NEK2、RRM1均呈正相关(P <0. 05)。结论胃癌癌组织中TOP2a、Nek2及RRM1高表达,且三者正相关,与肿瘤分化程度、浸润深度或淋巴结转移密切相关,检测TOP2a、Nek2及RRM1有利于肿瘤发生、进展评估,指导临床治疗。

Rock2对细胞周期检查点Cdc25A的调节作用

目的:探讨肝癌细胞中Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)对细胞周期检查点细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)的调节作用。方法:Western blotting检测51对肝癌及癌旁组织中Rock2与Cdc25A的蛋白表达情况。构建并筛选shRock2干扰质粒,稳定转染到人肝细胞癌Huh-7和HepG2细胞中,Western blotting检测Cdc25A蛋白表达变化;针对Rock2干扰序列,利用PCR定点突变技术进行碱基突变,构建Rock2突变质粒从而"恢复"Rock2表达,分析Cdc25A蛋白表达变化并用MTT法检测肝癌细胞增殖的改变。Western blotting检测Rock2稳定低表达的肝癌细胞中检查点激酶1(Chk1)和检查点激酶2(Chk2)蛋白的变化,免疫共沉淀及免疫荧光分析Rock2与Cdc25A的相互作用。结果:Rock2与Cdc25A蛋白在肝癌组织中较癌旁组织呈现高表达,而且两者呈正相关。肝癌细胞中稳定低表达Rock2后,Cdc25A蛋白表达明显下降;"恢复"Rock2表达后,Cdc25A蛋白表达增加而且肝癌细胞也出现增殖加快现象。Rock2低表达对Chk1和Chk2蛋白变化无明显影响。免疫共沉淀表明Rock2与Cdc25A直接相互作用,免疫荧光检测表明Rock2与Cdc25A存在共定位。结论:Rock2对细胞周期检查点Cdc25A起直接的正向调控作用,而且不依赖于Chk1/Chk2,可能为肝癌基因表达调控研究提供新的靶基因。

绝经后宫腔积液患者血清PKM2和CDCA5检测对子宫内膜癌的诊断价值

目的分析绝经后宫腔积液患者血清丙酮酸激酶M2型(PKM2)和细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)检测对子宫内膜癌的诊断价值。方法选择2018年2月至2019年12月该院收治的150例绝经后宫腔积液患者。依据宫腔镜子宫内膜病理活检结果将其分为宫腔积液组和子宫内膜癌组;选择同期在该院进行健康体检的50例体检健康者作为对照组。采用酶联免疫法检测患者血清PKM2和CDCA5水平;采用Logistic回归模型分析PKM2和CDCA5与子宫内膜癌的关系,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线检测和评估PKM1、CDCA5单独应用和联合应用鉴别诊断子宫内膜癌的价值。结果子宫内膜癌组患者血中PKM2和CDCA5均明显高于宫腔积液组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);不同临床分期、分化程度、肌层浸润患者血中PKM2和CDCA5差异均有统计学意义(均P<0.05);血中PKM2和CDCA5是影响子宫内膜癌临床分期、分化程度、肌层浸润的独立危险因素(P<0.05);PKM2和CDCA5联合应用鉴别诊断子宫内膜癌的灵敏度、特异度和AUC均明显高于各指标单独应用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论子宫内膜癌患者血清PKM2和CDCA5水平明显高于宫腔积液患者,且PKM2和CDCA5联合应用可明显提高鉴别诊断子宫内膜癌的临床应用价值。

CDC7 MCM2在弥漫大B细胞淋巴瘤预后和治疗中的作用

弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是最常见的非霍奇金淋巴瘤,占成人淋巴瘤发病率的30%～40%。由于受预后危险因素和生物学特性的影响,不同患者的5年生存率差异很大。DLBCL的发病率呈逐年上升趋势,仅40%～45%的患者可经CHOP方案治愈,美罗华联合CHOP方案可以显著延长患者的生存期。临床工作中发现IPI评分不能准确预测DLBCL患者的预后,所以急需找到能反映其生物学行为的特异性分子指标来准确预测患者的预后并指导个体化治疗方案的制定。CDC7是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,最早在酵母中发现,与DNA复制有关。人CDC7通过磷酸化微小染色体维持蛋白2(MCM2)来启动DNA的复制。许多恶性肿瘤细胞中存在CDC7的高表达,包括DLBCL。CDC7高表达是DLBCL患者的预后不良因素之一,可作为DLBCL的特异性预后指标指导患者预后;靶向抑制CDC7基因通路可以诱导DLBCL细胞的凋亡,与美罗华联合有协同增效作用。CDC7和MCM2在指导DLBCL的预后及临床治疗方面具有重要的临床意义。CDC7基因通路可以成为治疗DLBCL患者的新的治疗靶点。CDC7抑制剂与美罗华联合可以有效提高难治性DLBCL患者的疗效。

非小细胞肺癌中AKT活化及与抗凋亡蛋白Survivin、Bcl-2表达的关系

目的:探讨AKT的功能活化状态p-AKT及抗凋亡蛋白Survivin、Bcl-2在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及相关性。方法:应用免疫组化的方法,检测80例NSCLC组织及35例非肿瘤性肺组织标本中p-AKT、Survivin、Bcl-2的表达,并与临床病理因素进行相关性分析。结果:p-AKT、Survivin、Bcl-2在NSCLC中高表达,阳性率分别为78.8%、61.3%、50.0%,显著高于在非肿瘤性肺组织中阳性表达0、0、11.4%(P<0.05)。p-AKT、Bcl-2在不同年龄、性别、TNM分期、组织分化组以及有无淋巴结转移组均高表达,组间对比差异无统计学意义(P>0.05)。Survivin表达与TNM分期、组织的分化程度有关(P<0.05)。p-AKT阳性表达与Survivin、Bcl-2呈正相关;Survivin与Bcl-2二者也呈正相关。结论:在NSCLC中存在AKT的活化,Survivin、Bcl-2的高表达可能与AKT的活化有关。在NSCLC中可能存在p-AKT对Survivin、Bcl-2的正向调控。