X射线及电子束照射对非洲紫罗兰叶片外植体不定芽再生的影响

采用X射线(电子束能量8MeV)及9MeV电子束对两个品系(MauveandIndikon)的非洲紫罗兰(Saintpauliaionahta)组培苗叶片外植体进行辐照处理,研究其组织增殖、芽分化及叶片形态学变化。结果表明,40Gy的X射线照射能使Mauve及Indikon的外植体新鲜组织增殖倍数为27.3和26.3,相同剂量的电子束照射抑制组织增殖能力不如X射线照射,增殖倍数为49.7和27.4。低于20Gy的X射线和电子束照射诱发非洲紫罗兰叶片外植体增殖变化的规律不同于剂量高于20Gy的照射,呈先降低后升高趋势。100Gy的电子束辐照处理使Mauve及Indikon的芽形成率降为3.7%和11.3%,而100Gy的X射线辐照处理其芽形成率分别为7.5%和64.1%。就Mauve而言,60Gy的电子束辐照处理后畸形小苗百分比高达22.2%,相同剂量的X射线辐照处理后为14.8%;而对于Indikon,40Gy的电子束辐照可使畸形小苗百分比升至35.2%,该剂量条件下X射线的百分比仅为5.8%。因此,本研究发现非洲紫罗兰叶片的电子束辐照的诱变效果要优于X射线辐照,电子束辐照非洲紫罗兰Mauve及Indikon叶片组织的推荐最佳诱变剂量为40—60Gy。

TDZ对非洲紫罗兰叶外植体体细胞胚发生的效应

研究了不同浓度TDZ对两个非洲紫罗兰品种Elizabeth和Nilson Blue叶片外植体愈伤组织形成、类型以及体细胞胚形成与发育的影响。结果表明,Elizabeth与Nilson Blue在培养反应、再生潜力及形态发生途径上均存在显著差异。TDZ提高叶片愈伤率,促进愈伤组织生长,适宜浓度为0.5~1.0 mg.L-1;TDZ与NAA组合能高效诱导Elizabeth胚性愈伤组织形成和体细胞胚发生。扫描电镜观察表明：随TDZ浓度增加,体细胞胚发育加快,同步化程度高。Elizabeth叶片外植体体细胞胚诱导最适培养基为MS＋0.2 mg.L-1NAA＋1.0 mg.L-1TDZ。

非洲紫罗兰组织培养与工厂化快繁程序的研究

非洲紫罗兰（Ｓａｉｎｔｐａｕｉｔａｉｏｎａｎｔｈａ）叶片外植体在ＭＳ附加ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ，ＢＡ１ｍｇ／Ｌ的培养基上培养，获得大量不定芽。将小芽丛转入ＭＳ附加ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ，ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ的培养基上，小芽进一步发育形成小苗，然后将小苗切下转入不含激素的ＭＳ培养基上生根。生根试管苗经炼苗后移入花盆，生长良好。

火焰原子吸收光谱法测定不同花色非洲紫罗兰金属元素

采用硝酸与高氯酸混合酸(体积比4∶1)湿消解法对试验样品进行处理,用火焰原子吸收光谱法测定非洲紫罗兰红、白、蓝叶片中Na、Mg、K、Ca、Fe、Zn、Cu、Mn等8种金属元素含量,试验回收率为95.27%～101.67%,相关系数为0.988 94～0.998 92。试验结果表明,不同花色非洲紫罗兰中金属元素含量具有差异。

非洲紫罗兰叶片外植体再生技术体系的建立

研究3种叶型的非洲紫罗兰(Saintpaulia ionantha)组培快繁的最佳激素配比、炼苗移栽技术,以满足规模化生产的要求。以非洲紫罗兰幼嫩叶片为外植体,以MS为基本培养基,比较不同浓度和不同种类的生长激素对愈伤诱导、不定芽的萌发、试管苗生芽生根的影响,并比较了不同移栽方式对存活率等指标的影响。结果表明:非洲紫罗兰叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L和MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L,培养4周左右,诱导率达100%,绝大多数愈伤组织上都有芽的分化。采用培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L继代1次后,每个愈伤组织上分化产生的芽可达30余个,3个品种的愈伤组织诱导、成芽能力差异不大。非洲紫罗兰品种A和C适宜的生根培养基为1/2MS+0.2mg/LNAA,品种B适宜的生根培养基为1/2MS+0.5mg/LIBA。生根苗转入纯蛭石栽培时,用1/4MS大量与微量元素进行叶片追肥,成活率90%以上。移栽至腐殖土栽培成活率95%以上,3个月栽培后栽培苗成花。成功建立了3种叶型非洲紫罗兰组织培养快繁技术体系。

非洲紫罗兰组织培养工厂化育苗若干影响因素研究

研究结果表明,以非洲紫罗兰叶片为外植体,75%酒精浸泡30秒后用0.1%升汞灭菌18分钟是一种相对较好的灭菌方法;较理想的诱导与增殖培养基为MS+BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L,当中间繁殖体达到一定规模后,可适当降低激素浓度,根据生产需要控制增殖倍数;最佳的生根与壮苗培养基为MS+IBA0.5mg/L+KT0.5mg/L;非洲紫罗兰生根小苗移栽成活率可达95%以上。

非洲紫罗兰体细胞胚胎发生过程中生化变化的研究

鉴定了非洲紫罗兰叶片培养体细胞胚胎发生的发育进程，测定了各发育时期核酸、蛋白质和淀粉的含量．叶片接种后１～１２ｄ为脱分化期，１３～１６ｄ为胚性愈伤组织形成期，１７～３１ｄ为原胚形成期，３２～４８ｄ为胚状体发育期．脱分化过程中的ＤＮＡ，ＲＮＡ和蛋白质含量低于再分化过程，淀粉含量高于再分化过程．胚性愈伤组织形成过程中，ＲＮＡ和酸溶性蛋白质含量上升，淀粉含量下降．原胚形成和胚状体发育过程中，ＤＮＡ含量上升，淀粉含量进一步下降．

花色模式植物—非洲紫罗兰

综述了非洲紫罗兰形态特征以及研究进展,从分子水平上概述了建立花色模式植物—非洲紫罗兰所应具备的基因工程技术条件,阐述了花色素种类、花色影响因素和花色改变途径,并提出展望。

外源激素对非洲紫罗兰叶分化芽的影响

非洲紫罗兰在西北地区首次引种成功。在其组织培养中,用其叶为外植体,探讨了外源激素对分化芽的影响。结果表明:MS+NAA^(0.1)+6-BA^(0.1)对芽的分化最有利;试管苗的生根壮苗及继代,以1/2B_(?)+IAA_(0.2)为最适培养基;而试管苗的移栽,关键在于移栽后必须用玻璃或塑料薄膜覆盖近月,使其空气湿度达到90%移栽成活率达90%以上,均可成为商品苗。

非洲紫罗兰组培体系中卡那霉素的抗性筛选

采用组织培养技术,在非洲紫罗兰组培过程中的愈伤组织诱导、芽的分化、生根阶段分别进行不同浓度卡那霉素(Kan)的抗性筛选。结果表明,在愈伤组织诱导阶段,Kan浓度为60 mg/L时外植体的愈伤诱导受到抑制;在芽的分化阶段,Kan浓度为80 mg/L时芽的增殖受到抑制;在生根阶段,Kan浓度为120 mg/L时生根受到抑制。

适于AFLP分析的非洲紫罗兰DNA提取方法研究

以非洲紫罗兰同一植株的叶片和茎段为试材,采用新鲜组织提取、烘干组织提取、冷冻干燥组织提取的3种不同预处理方法,并采用DNA Kit、CTAB-Ⅰ、CTAB-Ⅱ3种提取方法,比较分析了DNA片断大小及不同方法提取DNA的纯度与得率,以期确定适用于多酚、多糖、水分含量高的非洲紫罗兰的DNA提取方法。结果表明:采用冷冻干燥组织提取法,经改良的CTAB?Ⅱ法,即在2次抽提步骤中,加入一步利用CTAB沉淀液沉淀DNA的方法最适合非洲紫罗兰DNA提取。这样得到的基因组DNA可作为后续分子水平研究的优良PCR模板。

非洲紫罗兰有机型无土栽培研究

以非洲紫罗兰为试材 ,泥炭、蛭石和炉渣为栽培基质材料 ,再添加消毒鸡粪和复合肥 ,进行有机无土型栽培试验 ,分析比较不同基质组合对非洲紫罗兰生长发育及开花的影响 ,结果表明 ,非洲紫罗兰有机型无土栽培基质组合以泥炭∶炉渣∶蛭石 =4∶3∶1为最佳 ,其次为泥炭∶炉渣∶蛭石 =2∶1∶1。

不同花色品种非洲紫罗兰花色素成分初步分析

通过对不同花色花瓣色素组成的分析,可以为花色显色机理研究提供依据。本文通过对14种不同花色非洲紫罗兰的特征显色反应和紫外-可见光谱扫描进行分析,结果表明:所选非洲紫罗兰花色品种中的色素由类黄酮组成,白色非洲紫罗兰仅含黄酮类化合物,其它花色品种主要由花色素苷和黄酮类化合物组成。本试验为非洲紫罗兰花色素成分的进一步分离和鉴定以及其作为花色模式植物的研究奠定了基础,同时对花色分子育种和改良提供了信息。

非洲紫罗兰组织培养体系的建立

以紫色白边单瓣花的非洲紫罗兰叶片为试材进行了组织培养技术的研究。结果表明:以叶片为外植体进行组织培养时,愈伤组织诱导最适培养基为MS+0.2 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA,培养3周左右诱导率达100%;继代增殖时最适培养基为MS+0.02 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA;无需生根培养,直接瓶外炼苗,栽植于以m(草炭土)∶m(珍珠岩)=1∶1的基质中生长最好,成活率可达95%以上。

非洲紫罗兰花瓣细胞pH值测定及F3'5'H基因片段克隆

以白色和蓝色品种的非洲紫罗兰舌状花瓣为材料,测定其细胞液pH值,并利用RT-PCR技术,以NCBI上登记的马铃薯、矮牵牛、龙胆草、金鱼草和瓜叶菊的F3'5'H基因片段保守区域为模板,克隆F3'5'H基因片段,为花色显色机理研究提供理论依据。实验结果表明:蓝色品种非洲紫罗兰细胞液的pH值大于白色品种非洲紫罗兰花瓣细胞液的pH值,随着花期的延长,两个品种非洲紫罗兰细胞液的pH值变化不断增大,且白色品种非洲紫罗兰花瓣细胞液的pH值变化大于蓝色品种非洲紫罗兰花瓣细胞液的pH值;其范围均在3.0～7.0之间,呈弱酸;在两种花色品种非洲紫罗兰中,都得到了F3'5'H因片段的cDNA序列长度为392 bp,与马铃薯、矮牵牛、龙胆草、金鱼草和瓜叶菊的F3'5'H基因保守区域片段的同源性分别为63.0%、55.4%、52.8%、49.0%和47.7%。

非洲紫罗兰组织离体培养及快速繁殖

以MS为基本培养基研究了离体条件下非洲紫罗兰叶片外植体的快速繁殖技术。结果表明 :6 -BA诱导外植体出芽的效率明显优于KT和ZT ,其中 6 -BA 0 .5mg·L-1+NAA 0 .5mg·L-1的组合诱导效率最高 ,诱导频率可达 10 0 % ;1/2MS附加NAA 0 .2mg·L-1并添加 0 .2 %活性炭的培养基诱导生根最为适宜 ,生根率达 10 0 %。

非洲紫罗兰叶片再生体系的建立

以非洲紫罗兰幼嫩叶片为外殖体，以MS为基本培养基，添加不同浓度6-BA、NAA、GA等，探讨了外源激素对其愈伤形成、不定芽分化、增殖与不定根形成的影响。试验表明，采用MS＋6-BA0．1～2．0mg／L（单位下同）＋NAA0．01～0．5培养基，愈伤诱导率在20％以上；采用MS＋6-BA0．1～1．0＋NAA0.01～0.5＋GA0．1～1.0培养基，对芽的生长及增殖效果好，并指出GA有提高不定芽长势和成苗率的作用；采用1／2MS＋NAA0．1～0．5或IBA0．1或IAA0．1～0．5，20d内生根率可达97%以上。在腐叶土：珍珠岩=5：3的基质中驯苗，成活率可达90％以上。

抗生素对非洲紫罗兰不定芽再生的影响

以非洲紫罗兰无菌幼叶为试材,分别研究了3种抑菌抗生素(头孢霉素、头孢氨苄、羧苄青霉素)和3种筛选抗生素(硫酸卡那霉素、硫酸新霉素、G418)对非洲紫罗兰离体叶片不定芽再生的影响。结果表明:羧苄青霉素和头孢霉素是非洲紫罗兰遗传转化过程中适宜的抑菌抗生素,其适宜浓度均为300mg/L,而头孢氨苄对非洲紫罗兰离体叶片的毒害作用较大,不适宜作为其转化过程中的抑菌抗生素;硫酸卡那霉素和G418对非洲紫罗兰不定芽再生有较强的抑制作用,可以作为筛选抗生素,其适宜的筛选浓度分别为50mg/L和5mg/L,而硫酸新霉素不适宜作为非洲紫罗兰遗传转化的筛选抗生素。

非洲紫罗兰幼嫩叶片离体培养的技术研究

以非洲紫罗兰幼嫩叶片为外植体,以MS为基本培养基,添加不同浓度BA、NAA、GA等探讨了外源激素对其愈伤形成、不定芽分化、增殖与不定根形成的影响。试验表明:采用MS+0.1～2.0mg/L(单位下同)6-BA+0.01～0.5NAA培养基,愈伤诱导率在20%以上;采用MS+0.1～1.06-BA+0.01～0.5NAA+0.1～1.0GA培养基对芽的生长及增殖效果好,并提出GA具提高不定芽长势和成苗率的作用;采用1/2MS+0.1～0.5NAA或0.1IBA或0.1～0.5IAA,20d内生根率可达97%以上。在腐叶土∶珍珠岩=5∶3的基质中驯苗,成活率可达90%以上。