N端标记GFP-TFF3蛋白在非洲绿猴肾成纤维细胞表达和定位

目的构建pEGFP-N1-TFF3融合蛋白表达载体,并检测其在非洲绿猴肾成纤维细胞(COS7细胞)内的表达和定位。方法提取HT29细胞的mRNA,反转录为cDNA;以此为模板PCR扩增hTFF3(286bp-462bp)基因;通过EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切位点将hTFF3基因定向插入真核表达载体pEGFP-N1中;将构建的重组质粒测序成功后,转染至人肾细胞(HEK293细胞)中,荧光显微镜观察GFP-TFF3融合蛋白的表达,并提取蛋白进行Western Blot检测;利用激光扫描共聚焦显微镜观察GFP-TFF3融合蛋白在COS7细胞内的定位情况。结果酶切及测序结果证明hTFF3基因成功克隆至真核表达载体pEGFP-N1中,Western Blot检测结果显示其融合蛋白分子量约为34kDa,激光扫描共聚焦显微镜观察结果显示GFP-TFF3融合蛋白在COS7细胞内定位以细胞核为主,在细胞质内少量表达。结论成功构建了pEGFP-N1-TFF3真核表达载体,GFP-TFF3蛋白定位于COS7的细胞核和细胞质中。

细胞基质流感疫苗的研究

流行性感冒(influenza,简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,疫苗接种仍是最有效的防御措施之一。传统制备人用流感疫苗是使用鸡胚,但由于其生产周期长、操作繁琐等缺点,研究人员积极研发了细胞培养生产流感疫苗,以达到省时、高效的目的。目前,犬肾细胞(madin-darby canine kidney cells, MDCK)、非洲绿猴肾细胞(Vero)和人胚胎成视网膜细胞(PER.C6)已获得药物监管机构的许可,并应用于临床研究。现就鸡胚及三种细胞培养生产的流感疫苗作一简要概述。

时刻警惕传染性法氏囊病的发生

传染性法氏囊病病毒属于双核糖核酸病毒，能在鸡胚及鸡胚成纤维细胞、肾细胞、非洲绿猴肾细胞及幼素领猴肾细胞等各种细胞上生长良好，并产生病理变化。

犬瘟热的流行与防控措施

犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的犬科、鼬科和浣熊科动物的一种急性热性传染病。病的特征是双相热型,各黏膜的卡他性炎症,后期可发生非化脓性脑膜脑脊髓炎,出现明显的神经症状。本病传染性强,病死率高,常可造成严重的经济损失。1病原体犬瘟热病毒为副粘病毒科麻疹病毒属成员。病毒可在鸡胚及鸡胚成纤维细胞上增殖,出现细胞病变,并形成蚀斑。用犬肾原代细胞进行培养,可形成合胞体及核内、胞浆内包涵体。此外,病毒还可以在非洲绿猴肾细胞(vero细胞)、犬肺巨噬细胞及睾丸细胞上生长。