自然杀伤细胞2组成员A、程序性死亡因子配体1表达检测对PD-L1阻断免疫治疗肌层浸润性膀胱癌反应性的预测价值

目的:探究自然杀伤细胞2组成员A(NKG2A)及程序性死亡因子配体1(PD-L1)表达检测对PD-L1阻断免疫治疗肌层浸润性膀胱癌反应性的预测价值。方法:选取100例肌层浸润性膀胱癌患者作为研究对象,对其行PD-L1阻断免疫治疗后,根据治疗反应性将其分为缓解组和未缓解组;对缓解组患者随访3个月,将其分为复发组和未复发组。比较两组患者NKG2A和PD-L1在CD4^(+)和CD8^(+)上的表达水平,采用ROC曲线分析NKG2A和PD-L1预测膀胱癌患者治疗反应性的价值。结果:100例研究对象中,缓解组患者72例(72.00%),未缓解组患者28例(28.00%),两组性别、年龄比较无统计学差异(均P>0.05),但缓解组患者肿瘤直径小于未缓解组,NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)表达水平均低于未缓解组(均P<0.05)。膀胱癌患者NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)表达预测免疫治疗后缓解的AUC值分别为0.771、0.724、0.710;联合诊断的AUC为0.836。72例缓解患者中,出现复发29例(40.28%),未出现复发43例(59.72%),两组性别、年龄以及肿瘤直径比较无统计学差异(均P>0.05),但复发组NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)表达水平均高于未复发组(均P<0.05)。NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)表达预测膀胱癌患者缓解后复发的AUC值分别为0.775、0.740、0.728;联合诊断的AUC为0.874。结论:NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)在不同治疗反应性肌层浸润性膀胱癌患者外周血中表达水平不同,三者对于膀胱癌患者PD-L1阻断免疫治疗反应性均有一定的预测价值,且三者联合预测效能最佳。

基于Th1/Th2表达探究特异性免疫对哮喘小鼠肺泡灌洗液炎性反应的影响

目的 基于Th1/Th2表达探究特异性免疫对哮喘小鼠肺泡灌洗液炎性反应的影响。方法 选择40只小鼠分为对照组、模型组、SIT组及地塞米松组,每组10只。除了对照组外均建立哮喘小鼠模型,激发阶段后SIT组注射1 mg的OVA,地塞米松组灌胃0.075 mg/mL溶液,其余大鼠注射等体积的PBS溶液。采用肺功能仪检测气道反应;经瑞氏-吉姆萨染色观察肺泡灌洗液(BALF)炎性细胞;酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中细胞因子IL-13、IL-4、IL-5及INF-γ;HE染色观察肺组织形态;PAS染色观察肺气道上皮杯状细胞活性;流式细胞术检测肺组织中Th1及Th2占比。结果 特异性免疫可显著降低模型小鼠气道高反应性、减少BALF内炎性细胞活性,并可通过升高Th1降低Th2而抑制哮喘发生发展。结论 特异性免疫可缓解哮喘小鼠气道高反应性,抑制炎性反应,并通过改善气道上皮杯状细胞增生而缓解通气,可能与调节Th1/Th2表达相关。

基于Notch信号通路探讨芪蛭皱肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病大鼠Th1/Th2免疫平衡的调节机制

目的探讨果蝇双翅边缘缺刻同源基因(Notch)信号通路在慢性阻塞性肺疾病(COPD)辅助性T细胞1(Helper T cells 1,Th1)和辅助性T细胞2(Helper T cells 2,Th2)失衡中的作用及芪蛭皱肺颗粒的干预机制。方法70只Wistar大鼠随机挑选10只作为空白对照组,其余大鼠均采用香烟烟雾(CS)联合气管滴注脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)法建立COPD模型,空白对照组及造模组各随机挑选3只大鼠验证造模是否成功。造模结束进行灌胃给药干预,造模组大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组(67.5μg·kg^(-1))及芪蛭皱肺颗粒高中低剂量组(3.24、1.62、0.81 g·kg^(-1)),分别给予生理盐水、醋酸地塞米松混悬液、芪蛭皱肺高、中、低剂量混悬液进行灌胃干预,空白对照组同模型对照组,灌胃等体积生理盐水。经28天造模及28天治疗后,采用动物肺功能测试系统检测吸气峰流速(Peak Inspiratory Flow,PIF)和呼气峰流速(Peak Expiratory Flow,PEF),处死大鼠提取肺脏、脾脏、血清及支气管肺泡灌洗液(BALF),苏木素-伊红(HE)染色评价肺组织病理变化,酶联免疫吸附实验法(ELISA)测定血清及BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,流式细胞仪检测脾脏Th1/Th2细胞水平,免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织Notch1、Hes家族发状分裂相关增强子1(Hes1)、Hey家族发状分裂相关增强子1(Hey1)蛋白水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR,RT-PCR)检测肺组织Notch1、Hes1、Hey1基因表达水平。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠肺功能显著降低(P<0.05),肺组织出现炎性细胞浸润、支气管结构破坏等病变,血清及BALF中TNF-α含量显著升高(P<0.05),脾Th1细胞百分比显著降低(P<0.05),Th2细胞百分比显著升高(P<0.05),肺组织Notch1、Hes1、Hey1蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.05),差异均具有统计学意义;与模型对照组比较,各给药组大鼠肺功能显著升高(P<0.05),肺组织病理损伤均有所减轻,血清及BALF中TNF-α含量显著降低(P<0.05),脾Th1细胞百分比显著升高(P<0.05),Th2细胞百分比显著降低(P<0.05),肺组织Notch1、Hes1、Hey1蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.05),差异均具有统计学意义。结论芪蛭皱肺颗粒通过抑制Notch信号通路调节Th1/Th2平衡,从而改善COPD大鼠肺功能及病理损伤,影响其免疫功能。

二甲双胍抑制mTOR/HIF-1α通路减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中的Th17细胞反应

目的:探讨二甲双胍对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的保护作用及其对体内mTOR/HIF-1α通路及Th17细胞的影响。方法:以MOG35-55免疫雌性C57BL/6小鼠建立EAE模型。随机分为对照组、EAE组和二甲双胍(MET)治疗组,对不同组应用Knoz评分观察小鼠的神经功能评分。在发病高峰期应用流式细胞学检测方法检测各组脾细胞培养上清液中Th17细胞比例,ELISA方法检测上清液及血清中IL-17A浓度。q PCR方法检测小鼠脾中IL-17A、RORγt mRNA表达水平。应用WB方法检测小鼠脾中S6K的活化程度,应用WB和q PCR方法检测脾组织中HIF-1α蛋白表达和mRNA转录水平。结果:与EAE组相比,MET治疗组发病程度减轻(P<0. 01);脾组织中Th17细胞比例降低(P<0. 01),脾细胞培养上清及血清中IL-17A含量减少(P<0. 01);脾组织中IL-17A、RORγt mRNA转录水平降低(P<0. 01);EAE组较对照组S6K1磷酸化程度升高(P<0. 01)。MET治疗组较EAE组S6K1磷酸化程度减低(P<0. 05)。EAE组较对对照组HIF-1α表达增高(P<0. 01)。MET治疗组较EAE组HIF-1α表达降低(P<0. 01)。EAE组与对照组相比HIF-1αmRNA转录增加(P<0. 01)。MET治疗组与EAE组相比HIF-1αmRNA转录降低(P<0. 01)。结论:二甲双胍可以减轻EAE的疾病严重程度,其可能是通过抑制mTOR/HIF-1α通路从而抑制Th17细胞反应而对EAE小鼠起到保护作用。

扩散性抗原决定簇特异性Th2/Tr1细胞被动免疫治疗实验性变态反应性脑脊髓炎的研究

目的 :研究用扩散性抗原决定簇特异性Th2 /Tr1细胞被动免疫治疗实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)的有效性和可能性。方法 :应用髓鞘蛋白脂质蛋白 (PLP) 139 15 1诱发EAE小鼠模型 ,通过转染方式建立具有高效表达IL 10特性的抗原特异性Th2 /Tr1样T细胞系 ,在EAE小鼠发病 6d后给予静脉注射。小鼠每天称体重并进行神经功能评分。实验结束时 ,取脊髓进行PLP免疫组化染色 ,应用数字化图像分析技术进行图像分析。结果 :注射扩散性抗原决定簇MBP87 99特异性Th2 /Tr1样T细胞的治疗组小鼠的临床评分明显改善 ,并伴有复发率的下降、首次复发时间的延迟 (P <0 0 5 )。PLP免疫组化染色的图像分析结果显示 ,接受MBP87 99特异性Th2 /Tr1样T细胞治疗组小鼠脊髓内PLP像素水平为正常值的 94 37%± 0 5 2 %,而对照组小鼠为正常PLP水平的 91 94%± 0 5 0 %(P <0 0 0 1) ,与对照组比较 ,治疗组小鼠脊髓内脱髓鞘病变下降 30 %。结论 :扩散性抗原决定簇特异性Th2 /Tr1细胞被动免疫治疗可明显减少脱髓鞘病变 ,改善EAE的临床症状 ,为多发性硬化的免疫治疗提供了理论依据。

基于GEO数据库的慢性自发性荨麻疹基因集富集及免疫细胞浸润分析

目的:基于基因表达数据库(GEO)对慢性自发性荨麻疹(CSU)表达谱芯片数据筛选差异表达基因并进行基因集富集分析(GSEA)和免疫细胞浸润分析,深入了解CSU的发病机制。方法:从GEO数据库中获取GSE72541芯片数据,利用R软件获取差异表达基因并构建蛋白质相互作用(PPI)网络;利用GSEA软件进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;利用ssGSEA方法对表达谱进行免疫细胞浸润分析。结果:与血小板活化及其功能密切相关的基因在CSU血清中上调,与Th1细胞趋化相关的基因在CSU血清中下调;与凝血级联反应、血管通透性的调节、免疫及炎症反应以及神经精神的调控等方面相关的生物过程及信号通路在CSU组上调;免疫细胞浸润分析显示活化的B细胞、未成熟B细胞、滤泡辅助性T细胞以及Th2细胞在CSU组显著下调。结论:血小板活化、凝血级联反应与Th1/Th2免疫细胞失衡在CSU的发病中有重要意义。

牙源性间充质干细胞来源的外泌体在牙周免疫调节的研究进展

外泌体(exosomes,EXOs)是细胞间通讯的重要介质,其内含有多种物质,包括miRNA、mRNA、DNA和蛋白质等,可通过多种方式作用于靶细胞。外泌体作为“无细胞治疗”手段,具有广阔的医学应用前景。EXOs的内含物随供体细胞及其状态的变化而变化,因此来自不同类型细胞的EXOs可能表现出不同的生物学效应。牙源性间充质干细胞来源的EXOs因其在组织再生医学和免疫调节领域表现出的生物学特性而受到越来越多的关注。在牙周免疫调节过程中促炎型(M1型)/抗炎型(M2型)巨噬细胞以及辅助性T细胞(Th17)/调节性T细胞(Treg)之间的平衡转化是研究热点。现有研究表明,牙源性间充质干细胞来源的EXOs能够促进巨噬细胞和T细胞的转化并且这种功能可能取决于周围微环境以及干细胞的组织来源等因素,如牙髓间充质干细胞来源的EXOs中的miR-1246通过抑制NF-κB P65从而促进M2型巨噬细胞的极化;根尖牙乳头间充质干细胞来源的EXOs通过促进DNA去甲基化酶Tet2(Tet methylcytosine dioxygenase 2,Tet2)介导的FoxP3的去甲基化,维持FoxP3的稳定表达,促进Treg转化,从而缓解牙周炎局部炎症。此外炎症相关因子可以影响牙源性间充质干细胞来源的EXOs的免疫调节活性,如脂多糖预处理的牙囊间充质干细胞来源的EXOs可通过ROS/JNK信号通路降低RANKL/OPG比例,并通过ROS/ERK信号通路促进巨噬细胞向M2型极化;肿瘤坏死因子-α和干扰素-α两种促炎细胞因子预处理的牙龈间充质干细胞来源的EXOs通过高表达CD73和CD5L从而促进M2型巨噬细胞的极化;牙周炎患者牙周膜间充质干细胞来源的EXOs促进巨噬细胞向M1表型极化。本文综述牙源性间充质干细胞来源的EXOs在牙周免疫调节过程中对两种细胞平衡转化影响的研究进展,为EXOs治疗牙周炎提供参考。

Th1/Th2型免疫反应相关基因在巨噬细胞RAW264.7应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激时的表达谱研究

本研究旨在解析巨噬细胞RAW264.7在应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激时其Th1、Th2型免疫反应相关基因的差异表达规律,为进一步揭示巨噬细胞抗细粒棘球绦虫原头蚴免疫调控机制奠定理论基础。将细粒棘球绦虫原头蚴和巨噬细胞RAW264.7共培养6、24、72 h,收集RAW264.7细胞,提取总RNA,构建cDNA文库,利用RNA sequencing技术进行测序分析。结果表明,当细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)与巨噬细胞RAW264.7共培养6、24、72 h后,和PBS对照组相比,PSC处理组分别有848、3745和7009个基因的表达出现显著差异变化,其中上调的基因分别为415、1159和2237个,下调的基因分别为433、2586和4772个。对Th1、Th2型免疫反应相关基因的差异表达分析结果显示,当巨噬细胞RAW264.7与细粒棘球绦虫原头蚴共培养6 h时,共有31个Th1、Th2型免疫反应相关基因的表达出现显著变化,其中15个基因出现显著上调,16个出现显著下调。当巨噬细胞RAW264.7与细粒棘球绦虫原头蚴共培养24 h时,共有111个Th1、Th2型免疫反应相关基因的表达出现显著变化,其中34个基因出现显著上调,78个出现显著下调。当巨噬细胞RAW264.7与细粒棘球绦虫原头蚴共培养72 h时,共有212个Th1、Th2型免疫反应相关基因的表达出现显著变化,其中50个基因出现显著上调,162个出现显著下调。这些差异表达的基因主要包括富亮氨酸重复序列蛋白LRRCs、G蛋白偶联受体GPCRs、C型凝集素受体CLRs、清道夫受体SRs等,同时还有一些模式识别受体PRR下游信号分子以及一些PRR下游效应分子。同时分析结果显示,当细粒棘球绦虫原头蚴与巨噬细胞RAW264.7共培养6、24 h时,其Th1型的免疫反应相关的细胞因子编码基因,诸如Tnfrsf1a、Ifnar1的Tnfrsf12a等,它们的表达显著上调;而72 h时,其Th2型免疫反应相关细胞因子编码基因,诸如IL4和IL6等,它们的表达显著上调。同时研究随机选取了部分差异表达的基因进行了qRT-PCR验证,结果表明其表达趋势与RNA-seq结果一致。本研究系统解析了巨噬细胞RAW264.7应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激不同时间段其相关基因的差异表达谱特性,初步筛选了巨噬细胞RAW264.7应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激固有免疫相关的基因,为进一步解析这些差异表达基因在巨噬细胞RAW264.7应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激时发挥作用以及调控机制奠定了基础。

营养支持及干预对重度溃疡性结肠炎患者肠道菌群、Th细胞免疫应答、炎症反应的影响

目的:探讨营养支持及干预对重度溃疡性结肠炎患者肠道菌群、Th细胞免疫应答、炎症反应的影响。方法:选择2014年8月~2017年1月间在本院确诊并接受治疗的UC患者90例,经随机数表法分为对照组、营养干预组各45例。对照组患者接受UC临床常规治疗,营养干预组患者在常规治疗同时加入营养支持及干预。对比两组肠道菌群分布、Th1/Th2细胞因子含量、炎症介质含量的差异。结果:干预前,两组肠道菌群分布、Th1/Th2细胞因子含量、炎症介质含量的差异无统计学意义。干预后,营养干预组中肠杆菌、肠球菌的数量低于对照组,乳酸杆菌、双歧杆菌、丁酸梭菌的数量高于对照组;血清中IL-2、IFN-γ的含量低于对照组,IL-4、IL-10的含量高于对照组;血清中MCP-1、MIP-1a、HMGB-1的含量低于对照组。结论:重度溃疡性结肠炎患者接受营养支持及干预,可进一步均衡肠道菌群分布及Th1/Th2免疫应答,抑制全身炎症反应。

黑骨藤皂苷对特应性皮炎小鼠的治疗作用及对Th1型免疫反应的影响

目的探讨黑骨藤皂苷对特应性皮炎(AD)小鼠的治疗作用及对Th1型免疫反应的影响。方法 30只BLAB/c雌性小鼠随机分为正常组8只,模型组10只,黑骨藤皂苷组12只。除正常组外,其余两组均需造模。将小鼠腹部体毛剃去,用1.5%2,4-二硝基氯苯(DNCB)(丙酮∶橄榄油=4∶1)溶液100μL涂在腹部剃毛处初次致敏,2周后在小鼠耳廓内外两侧相同位置涂1%DNCB溶液20μL,1周重复刺激3次,连续2周,共造模30 d。从初次致敏起,黑骨藤皂苷组给予黑骨藤皂苷(0.002 g/d)灌胃,正常组和模型组分别给予等体积生理盐水灌胃,连续灌药30 d。从再次致敏当天(造模第14天)用游标卡尺测量每只小鼠两耳中部厚度,以后每次DNCB刺激前测量1次并记录,观察小鼠两耳外观肿胀情况。在末次耳部DNCB刺激12 h后取材,采用临床症状评分评价小鼠耳朵大体外观;切取耳部皮肤做病理切片,HE染色观察小鼠耳朵组织表皮厚度,甲苯胺蓝染色观察肥大细胞浸润情况;采用免疫组化法检测耳组织CD68蛋白的表达;采用ELISA法测定血清IgE、TNF-α、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达。结果与模型组比较,不同时间正常组与黑骨藤皂苷组左耳厚度均降低(P<0.05或<0.01)。正常组、模型组、黑骨藤皂苷组临床症状评分组间两两比较,P均<0.01。正常组、模型组、黑骨藤皂苷组耳部组织表皮厚度组间两两比较,P均<0.01;真皮层肥大细胞浸润数目组间两两比较,P均<0.01。与正常组比较,模型组组织CD68及血清TNF-α、IgE、MCP-1水平均升高;与模型组比较,黑骨藤皂苷组组织CD68蛋白及血清TNF-α、IgE、MCP-1水平均降低(P<0.05或<0.01)。结论黑骨藤皂苷对AD小鼠有治疗作用,可抑制Th1型免疫反应。

来氟米特对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠T细胞亚群及Th1型细胞因子的影响

目的探讨来氟米特(Leflunomide,LEF)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型发病防治作用及可能的免疫学机制。方法将30只雌性C57BL/6小鼠随机分为EAE对照组及高、低剂量LEF防治组,每组10只。通过注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)免疫介导构建EAE模型。从造模前三天开始起EAE对照组及高、低剂量LEF防治组分别予以生理盐水和LEF 8mg/kg/d与2mg/kg/d灌胃,连续10天。观察小鼠发病情况及外周血中T细胞亚群及IFN-γ、IL-2水平的变化。结果两组使用LEF小鼠临床症状较轻,发病高峰期外周血T细胞亚群CD4+、CD8+分布比例较EAE对照组明显升高(P<0.01),CD4+/CD8+值明显降低(P<0.01);发病高峰期外周血IL-2、INF-γ含量较EAE对照组明显降低(P<0.01),且高剂量组降低更明显(P<0.01)。结论 LEF对EAE具有防治作用,且效果与LEF剂量有关。其防治作用可能与调节T淋巴细胞亚群分布及抑制IFN-γ、IL-2水平有关。

肺癌患者化疗前后Th1/Th2细胞因子免疫反应状态变化及对预后的影响

目的探究肺癌患者化疗前后Th1/Th2细胞因子免疫反应状态变化及对预后的影响。方法选取晚期肺癌患者90例作为观察组,另选取同期健康体检者40例作为对照组。观察组均行培美曲塞联合顺铂化疗,检测对比两组化疗前后白介素4(IL-4)、IL-6、IL-10、干扰素γ(IFN-γ)水平。并根据疗效分为有效者、无效者,比较不同疗效患者化疗前后IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ水平,分析上述指标对疗效的预测价值,并进行生存分析。结果观察组化疗前、化疗2个周期后第4、15、21 d血清IL-4、IL-6、IL-10水平高于对照组,IFN-γ低于对照组,观察组化疗2个周期后第4、15、21 d血清IL-4、IL-6、IL-10水平低于化疗前,IFN-γ水平高于化疗前(P<0.05);化疗前有效者血清IL-4、IL-6、IL-10水平低于无效者,IFN-γ水平高于无效者(P<0.05);有效者化疗2个周期后第4、15、21 d血清IL-4、IL-6、IL-10水平低于化疗前及无效者,IFN-γ水平高于化疗前及无效者(P<0.05);Logistic回归分析,IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ水平与晚期肺腺癌患者化疗疗效显著相关(P<0.05);Pearson相关性分析,化疗前及化疗2个周期后第4、15、21 d血清IFN-γ水平与IL-4、IL-6、IL-10水平呈负相关(P<0.05);IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ预测疗效均具有较高AUC值,尤以联合预测最高;血清IL-4、IL-6、IL-10高表达者生存率低于低表达者,IFN-γ高表达者生存率高于低表达者(P<0.05)。结论晚期肺癌患者存在Th1/Th2细胞因子免疫反应状态紊乱,培美曲塞联合顺铂化疗对改善机体免疫平衡有效;IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10水平与化疗疗效显著相关,联合检测可提高疗效与预后价值,为个体化治疗提供参考。

异源反应性NK细胞对骨髓移植小鼠脾脏Th1/Th2细胞亚群的影响

目的:观察异源反应性自然杀伤细胞(NK细胞)对骨髓移植小鼠脾脏辅助性T细胞Th1/Th2亚群的影响。方法:以BALB/c和CB6F1小鼠为受体,在γ射线照射后通过尾静脉输入C57BL/6J小鼠的骨髓细胞和脾脏单个核细胞,建立移植物抗宿主病模型;然后输入供体的NK细胞,检测受体小鼠脾脏中Th1/Th2淋巴细胞亚群和外周血中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)的变化。结果:与单纯输入骨髓细胞和单个核细胞组小鼠相比,输入异源反应性NK细胞后,BALB/c和CB6F1小鼠脾脏中Th1细胞比例均下降,Th2细胞比例均上升,CB6F1小鼠脾脏中Th2虽有升高但没有统计学意义;外周血中IL-10水平显著升高,IFN-γ的水平显著下降。结论:异源反应性NK细胞可能通过降低脾脏中Th1细胞亚群比例和升高Th2细胞亚群比例减轻移植物抗宿主病。

来氟米特对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠T细胞亚群及Th1型细胞因子的影响

目的探讨来氟米特(Leflunomide,LEF)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型发病防治作用及可能的免疫学机制。方法将30只雌性C57BL/6小鼠随机分为EAE对照组及高、低剂量LEF防治组,每组10只。通过注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)免疫介导构建EAE模型。从造模前3 d开始起EAE对照组及高、低剂量LEF防治组分别予以生理盐水8 mg/(kg·d)、LEF 2 mg/(kg·d)灌胃,连续10 d。观察小鼠发病情况及外周血中T细胞亚群及IFN-γ、IL-2水平的变化。结果 LEF各防治组小鼠临床症状较轻,发病高峰期外周血T细胞亚群CD4+、CD8+分布比例较EAE对照组明显升高(P<0.01),CD4+/CD8+值明显降低(P<0.01);发病高峰期外周血IL-2、INF-γ含量较EAE对照组明显降低(P<0.01),且高剂量降低更明显(P<0.01)。结论 LEF对EAE具有防治作用,效果与LEF剂量有关,其防治作用可能与调节T淋巴细胞亚群分布及抑制IFN-γ、IL-2水平有关。

谷氨酸钠和地塞米松对大鼠神经细胞代谢性谷氨酸受体1免疫反应性的影响

为了探讨糖皮质激素的抗痫效应 ,分别用成年大鼠以及培养的新生大鼠的神经细胞 ,在经谷氨酸钠和地塞米松处理后 ,进行免疫细胞化学染色。观察其代谢性谷氨酸受体 1(m GL U R1)免疫反应性的变化 ,并对实验结果进行图像分析。结果发现 :经谷氨酸钠致痫处理后 ,大鼠海马 CA1区以及培养的神经细胞的 m GL UR1免疫反应阳性细胞均较正常对照组增多 ,平均光密度值增加 ;再经地塞米松处理后 ,m GL UR1免疫反应阳性细胞则较致痫组减少 ,平均光密度值减少。上述改变经统计学分析均有显著性差异。结果提示 :地塞米松可以抑制谷氨酸钠诱发的癫痫发作 ,其作用途径之一可能是通过抑制 m GL U

氧化型甘露聚糖修饰的LL/2c肿瘤细胞疫苗诱导Th1免疫反应

目的 :观察氧化型甘露聚糖修饰的LL/2c肿瘤细胞疫苗 (oxidativemannan -conjugatedLL/2c,ox-M -L)能否诱导Th1抗瘤免疫反应。方法 :乙醇固定的LL/2c细胞 (fixedLL/2c ,f-L)、ox -M -L腹腔免疫小鼠 ,取脾脏制备T淋巴细胞悬液 ,采用ELISA检测体外刺激的T细胞INF -γ、IL - 4分泌 ,51Cr释放实验观察CTL(cytotoxicTlymphocytes,CTL)杀伤活性。结果 :ox -M -L免疫小鼠的T细胞经丝裂霉素C预处理的LL/2c体外刺激 ,其INF -γ分泌显著提高 :51Cr释放实验显示出对LL/2c细胞特异性的CTL杀伤活性 ,且这种杀伤活性具有CD8+T细胞的依赖性。未修饰的LL/2c免疫小鼠的T细胞诱导了较高的IL - 4分泌 ,但未显示出CTL杀伤活性。结论 :LL/2c肿瘤细胞作为抗原 ,经氧化型甘露聚糖修饰有效的诱导了Th1类型的抗瘤免疫反应。

川羌除痹汤联合西药对类风湿性关节炎患者免疫功能及Th1/Th2型细胞因子的影响

目的:观察川羌除痹汤联合西药对类风湿性关节炎患者免疫功能及Th1/Th2型细胞因子的影响。方法:将84例类风湿性关节炎(RA)患者随机分为观察组(42例)和对照组(42例),对照组给予塞来昔布、来氟米特治疗,观察组在对照组的基础上给予川羌除痹汤治疗,疗程均为8周。记录两组中医症候积分、晨僵持续时间、关节压痛数与关节肿胀数、细胞免疫功能及Th1/Th2型细胞因子的变化,并对两组的临床疗效进行比较。结果:治疗组总有效率92.86%显著优于对照组总有效率73.81%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组中医症候积分、关节压痛数、晨僵持续时间、关节肿胀数明显降低,观察组以上指标低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+均明显增加,CD8+明显降低,观察组以上指标均优于对照组(P<0.05)。治疗后,两组IL-6、TNF-α明显降低,IL-4、IL-10明显增加,观察组以上指标均优于对照组(P<0.05)。结论:川羌除痹汤可显著改善RA患者临床症状,缓解疼痛,并改善细胞免疫功能,调节Th1/Th2型细胞因子表达,抑制炎症反应,其疗效优于单纯的西医疗法。

电针对大鼠足背炎性痛病灶局部P物质、IL-1β免疫反应性的影响

目的 :研究电针治疗福尔马林所致炎性痛的神经免疫机制。方法 :采用福尔马林试验 ,在大鼠一侧足背皮下注射 5%福尔马林 50 μL制备局部炎性痛病灶 ,应用痛行为学及免疫组织化学方法 ,观察电针胆经“环跳”穴、“阳陵泉”穴 (刺激参数为 1～ 3V ,4～ 1 6Hz,3 0min)对大鼠痛行为反应、炎症反应及足背炎性痛病灶局部组织P物质、IL 1 β免疫反应性的影响。结果 :①电针能显著抑制福尔马林导致的大鼠缩腿、舔爪等自发痛行为反应 (P <0 0 1 ) ;②电针能减轻福尔马林导致的局部炎症反应并显著翻转炎性痛病灶局部表皮、真皮及皮下组织P物质阳性神经纤维和IL 1 β阳性细胞免疫反应性增强现象 (P <0 0 1 )。结论 :SP与IL 1 β参与了福尔马林所致的炎性痛反应过程 ,电针可能通过抑制炎性痛病灶局部感觉神经末梢合成和释放SP及减少免疫细胞向病灶局部游走、合成并释放IL 1 β从而发挥消炎镇痛作用。

蝙蝠蛾被毛孢菌丝体通过激活TLR2、TLR4和Dectin-1诱导Th1型免疫反应

目的:研究蝙蝠蛾被毛孢菌丝体(MHCS)对抗原呈递细胞树突状细胞(Dendritic cells,DCs)成熟和功能的调节作用。方法:利用流式细胞术、实时荧光定量PCR、Western blot和混合淋巴细胞培养等实验方法,检测了MHCS对DCs成熟和功能相关表面分子、细胞因子表达以及Toll样受体(TLR)2、TLR4和Dectin-1相关信号转导通路蛋白活性的调节作用。结果:MHCS显著上调DCs表面分子CD11c、MHCⅠ和MHCⅡ、辅助刺激分子CD40、CD80和CD86以及模式识别受体TLR2、TLR4和Dectin-1的表达;促进Th1型细胞因子IL-12产生,抑制Th2型细胞因子IL-10、IL-13和TGF-β1产生;诱导TAK1和IRF3磷酸化活性增加。MHCS也显著刺激幼稚型Th细胞增殖,诱导幼稚型Th细胞向Th1方向分化。利用中和性抗体,分别阻断DCs细胞TLR2、TLR4或Dectin-1活性,可部分抑制MHCS诱导的DCs成熟。结论:MHCS能促进DCs成熟,诱导Th1型免疫反应。MHCS的这些作用与其激活模式识别受体TLR2、TLR4或Dectin-1有关。