含有非甲基化CpG的双歧杆菌DNA对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响

目的:探讨双歧杆菌DNA对小鼠骨髓树突状细胞(BMDC)成熟的影响.方法:纯化提取双歧杆菌DNA,并鉴定DNA制品CpG基序甲基化程度;FACS检测BMDC的吞噬功能和表面标志分子,ELISA法检测BMDC分泌细胞因子水平,3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞增殖能力.结果:双歧杆菌DNA诱导24 h后BMDC高表达Ia,CD40,CD86和CD11 c分子,明显增加IL-6,IL-12(p40),TNF-α的分泌,显著增强同种异体和自体T细胞增殖的能力.结论:双歧杆菌DNA能够促进BMDC成熟,增强BMDC的抗原提呈能力.

非甲基化CG的寡脱氧核苷酸链对慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能的影响(英文)

目的:探讨非甲基化CG的寡脱核苷酸链(CPGODN)对慢性乙型肝炎(CHB)患者树突状细胞(DCs)功能的影响。方法:对10例慢性乙型肝炎患者,10例HBV携带者及10例健康对照者外周血来源DCs进行体外培养。应用流式细胞技术检测DCs的表面分子HLA-DR,CD80和CD86的表达,ELISA检测DCs培养上清中IL-12水平,并在电镜下观察DCs的改变。结果:体外培养第6天的DCs,加入CpGODN继续培养24h后,透射电镜下观察,与完全培养基对照组DCs相比,其表面的空起丰富、增粗,粗面内质网增多,空泡减少甚至消失。流式细胞仪分析显示,CpGODN刺激组CD80,CD86及HLA-DR在CHB患者、HBV携带者及正常人DCs上的表达阳性率均较完全培养基对照组明显升高(P<0.05)。CHB患者、HBV携带者及正常人DCs均用完全培养基培养时,CHB患者及HBV携带者DCs上的HLA-DR,CD86和CD80的表达阳性率较正常人明显下降(P<0.05),但CHB患者和HBV携带者之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。CHB患者、HBV携带者及正常人DCs均用CpGODN刺激时,CHB患者DCs上的HLA-DR和CD86表达阳性率较HBV携带者及正常人明显下降(P<0.05),但HBV携带者和正常人之间比较却无统计学差异(P>0.05);CHB患者和HBV携带者DCs的CD80表达阳性率较正常人明显下降(P<0.05),但CHB患者和HBV携带者之间比较却无统计学差异(P>0.05)。ELISA检测发现CpGODN刺激组DCs分泌IL-12的水平无论在CHB患者、HBV携带者及正常人均较完全培养基对照组明显升高(P<0.05)。无论是完全培养基培养还是CpGODN刺激,CHB患者及HBV携带者DCs分泌IL-12较正常人明显下降(P<0.05),但CHB患者和HBV携带者之间比较却无统计学差异(P>0.05)。结论:CpGODN能够明显促进CHB患者外周血DCs成熟,为CpGODN治疗CHB提供了实验基础。

TRIM38非CpG岛DNA甲基化与胶质瘤异柠檬酸脱氢酶突变的关系研究

目的探讨TRIM38基因非CpG岛DNA甲基化与胶质瘤异柠檬酸脱氢酶(IDH)基因突变之间的关系。方法利用中国胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)数据库的多组学数据和临床资料,比较在IDH野生型或突变型的胶质瘤中,TRIM38非CpG岛DNA甲基化的改变模式以及与基因表达和临床预后的关系。结果共纳入CGGA胶质瘤325例及非肿瘤对照脑组织(NTB组)11例,分析发现IDH野生型胶质瘤TRIM38非CpG岛DNA甲基化和基因表达,相对NTB组分别发生低甲基化(P=0.000)和高表达(P=0.007),且两者之间呈负相关(P=0.017)。生存分析显示,TRIM38非CpG岛DNA甲基化水平与IDH野生型肿瘤的预后有关(P=0.061)。结论IDH突变可能通过限制TRIM38基因非CpG岛DNA低甲基化介导的肿瘤促癌基因表达上调,为IDH突变相关的胶质瘤提供“保护作用”。

CpG-ODN对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞表型和功能的影响

研究含非甲基化CpG基序的寡核苷酸(CpG-ODN)对慢性乙型肝炎患者(CHB)外周血树突状细胞(den- dritic cell,DC)表型和功能的影响。以CpG-ODN刺激CHB和健康者外周血单核细胞衍生的DC成熟,结果显示,与 non-ODN和PBS组比,CpG-ODN能明显提高CHB患者DC的HLA-DR、CD86表达,使其IL-12分泌增加,刺激T 细胞增殖的能力亦显著增强(P<0．05),但不能明显提高CD1a表达。因此,CpG-ODN与TNF-α一样能促进CHB 患者外周血DC成熟进瓶增强其抗原提呈功能;CHB患者的細胞因子环境可能是DC功能沉默的重要原因。

非甲基化的CpG寡核苷酸对鼠巨噬细胞Toll样受体9及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响

目的探讨非甲基化的CpG寡核苷酸(CpG-ODN)对鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7 Toll样受体9(TLR-9)的表达及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响。方法体外培养小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7,置24孔培养板中,随机将细胞分为四组,分别为CpG-ODN组,Non-CpG-ODN组,CpG-ODN+氯喹组和对照组,分别添加CpG-ODN(0.3μg/ml),Non-CpG-ODN(0.3μg/ml),CpG-ODN+氯喹组(CpG-ODN和氯喹各0.3μg/ml),培养基。逆转录聚合酶链反应及Western blot检测24h后巨噬细胞TLR-9的表达,放免法及ELISA法检测刺激前后巨噬细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)及IL-12的表达水平。结果刺激24h后,巨噬细胞TLR-9mRNA的表达,CpG-ODN组与Non-CpG-ODN组比较,差异有统计学意义(t值为7.12,P<0.01);CpG-ODN组与对照组比较,差异有统计学意义(t值为8.04,P<0.01);CpG+氯喹组与Non-CpG-ODN组比较,差异有统计学意义(t值为4.25,P<0.05);CpG+氯喹组与对照组比较,差异有统计学意义(t值为5.58,P<0.01)。TLR-9蛋白,CpG-ODN组为1.35±0.18,高于Non-CpG(1.01±0.04)及对照组(0.91±0.10),差异有统计学意义(t值分别为3.21、3.67,P值均<0.05)。CpG-ODN+氯喹组为1.34±0.15,高于Non-CpG及对照组,差异有统计学意义(t值分别为3.71、4.10,P值均<0.05),而CpG-ODN组及CpG-ODN+氯喹组比较,差异无统计学意义(t值为0.10,P>0.05)。细胞上清液中TNF-α水平CpG-ODN组[(0.48±0.12)ng/ml]高于Non-CpG-ODN组[(0.29±0.23)ng/ml]、CpG-ODN+氯喹组[(0.32±0.24)ng/ml]和对照组[(0.29±0.19)ng/ml],差异有统计学意义(t值分别为2.84、2.38、3.25,P值均<0.05);IL-6,IL-12水平:CpG-ODN组分别为[(27.69±15.61)pg/ml和(48.59±25.17)pg/ml]与Non-CpG-ODN组分别为[(17.02±10.66)pg/ml和(59.58±32.89)pg/ml]、CpG-ODN+氯喹组分别为[(28.58±24.08)pg/ml和(41.30±13.17)pg/ml]和对照组分别为[(16.12±17.70)pg/ml和(61.54±39.69)pg/ml],差异无统计学意义(t值分别为1.94、0.75,P值均>0.05)。结论CpG-ODN刺激可引起鼠巨噬细胞TLR-9表达增高,Th1类细胞因子分泌增加。

CpG协同calpain DNA疫苗诱导BALB/c鼠T_H1免疫应答和抗日本血吸虫感染

目的 探讨含非甲基化CpG单核苷酸 (CpG ODN)协同calpainDNA疫苗抗日本血吸虫感染的保护性作用、诱导的免疫应答类型及其免疫机理。方法 calpain基因从原核表达载体pGEX 2TK亚克隆到含小鼠IL 2基因启动序列的真核表达载体pVAC ,构建含日本血吸虫疫苗候选分子cal pain基因的真核表达体系pVAC calpain的DNA疫苗 ,构建的DNA疫苗与CpGODN免疫BALB c小鼠 ,在不同阶段采血测定免疫鼠抗体的动态变化、RT PCR分析免疫鼠细胞因子IFN γ、IL 4、IL 12的表达 ,加强免疫 1周后用日本血吸虫尾蚴攻击感染免疫鼠 ,用减虫率、减卵率及其病理组织学指标考核保护性免疫的效果。结果 pVAC calpain的DNA疫苗体系诱导了IgG抗体的产生 ,免疫 3周后细胞因子IFN γ、IL 4、IL 12的表达表现出差异。特别是在CpG ODN和pVAC calpain免疫组IFN γ、IL 12有高度表达 ,而IL 4的表达受到相对抑制 ,对攻击感染的日本血吸虫表现出了 4 5 %的减虫效果 ,虫卵肉芽肿的面积显著性的减少。结论 CpGODN协同日本血吸虫calpainDNA疫苗诱导了TH1为主的免疫应答 ,并能部分抵抗日本血吸虫感染和减轻感染鼠由于TH2免疫应答所导致的虫卵肉芽肿反应 ,提示CpGODN能够协同calpainDNA疫苗抗日本血吸虫感染和缓解日本血吸虫免疫病理反应。

CpG-ODN联合HBsAg体外对慢性乙肝患者外周血树突状细胞STAT、SOCS通路的影响

目的研究含非甲基化CpG基序的免疫刺激寡核苷酸(CpG-ODN)联合重组HBsAg对慢性乙肝(CHB)患者外周血树突状细胞(dendriticcell,DC)表面标志、功能及胞浆信号传导与转录激活因子(STAT)、细胞信号转导抑制因子(SOCS)表达的影响。方法由CHB患者和健康者外周血单核细胞诱导扩增DC,以CpG2ODN或联合HBsAg刺激DC,并与TNF2α比较,评价其对DC表面标志、分泌IL212p70及刺激同种T细胞增殖能力的影响;应用Westernblot法检测DC胞浆STAT1、3、4、5、6以及SOCS1、3蛋白的表达。结果与PBS组比,TNF2α、CpG-ODN或联合HBsAg能明显提高CHB患者DC表面分子HLA-DR表达,IL-12p70分泌增加,刺激同种T细胞增殖能力增强,CpG-ODN联合HBsAg还能明显提高CD1a的表达;CpG-ODN或联合HBsAg、TNF2α对DC胞浆STAT1、4、6和SOCS1、3的表达呈不同程度增强作用,对STAT3、5的表达无明显影响。结论CpG-ODN与TNF-α一样能促进CHB外周血DC分化、成熟;CpG2ODN或联合HBsAg能增强DC的特异性抗原提呈作用;其作用机制可能是通过调节DC细胞内STAT1、4、6以及SOCS1、3等信号蛋白的表达。

含CpG基序寡核苷酸对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞的免疫激活研究

目的研究含非甲基化 CpG 基序的寡核苷酸(CpG-ODN)对慢性乙型肝炎患者(CHB)外周血树突状细胞(DC)表型和功能的影响。方法以 CD14磁性分选微珠分离 CHB 患者外周血高纯度单核细胞;以重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)、重组人白细胞介素-4(hIL-4)诱导扩增 DC;以 CpG-ODN 刺激 DC 成熟,并与肿瘤坏死因子(TNF)-α比较,评价其对 DC 表达表面分子人类白细胞组织相容性抗原(HLA)-DR、CD86、CD1a,分泌 IL-12p70以及刺激同种 T 细胞增殖能力的影响。结果与 non-ODN 和磷酸盐缓冲液(PBS)组比较,CpG-ODN 能明显提高 CHB 患者外周血 DC 表面分子 HLA-DR、CD86的表达,使 IL-12分泌增加,刺激同种异体 T 细胞增殖的能力亦显著增强(P=0.017和0.023),但不能明显提高 CD1a 的表达;CpG-ODN 的上述刺激作用接近或略逊于hTNF-α,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CpG-ODN 与 hTNF-α一样能够促进 CHB 患者外周血 DC 成熟进而增强其抗原提呈功能。

我国登革2型病毒43株PrM-E基因的DNA免疫原性研究

目的 观察我国登革 2型病毒 43株PrM E基因的DNA免疫原性及非甲基化细菌性CpG对DNA免疫效果的影响。方法 采用RT PCR和分子克隆技术构建PrM E基因片段 ,并将其插入真核表达载体pBK CMV中。在证明其可在哺乳动物细胞中高效表达的基础上 ,进一步用重组质粒DNA免疫小鼠。通过间接免疫荧光法对采集的鼠血清中的病毒特异抗体进行检测。结果 用含PrM E基因的重组质粒DNA免疫小鼠可诱导产生登革 2型病毒特异的抗体 ,且产生的抗体在小鼠体内可持续 3周以上。用含CpG的pUC19质粒和重组质粒的共免疫与单独免疫重组质粒所诱导的抗体水平没有显著差别。结论 我国登革 2型病毒PrM E基因重组质粒DNA具有一定的免疫原性。在本实验条件下 ,含非甲基化细菌性CpG的pUC19质粒DNA ,对PrM E基因的DNA免疫效果没有促进作用。