甲基化荧光PCR检测母血中游离胎儿maspin基因的研究

目的:探讨Taqman探针与甲基化特异性PCR(MSP)技术结合测定孕妇血浆中甲基化maspin(M-maspin)基因和非甲基化maspin(U-maspin)基因的可行性,并分析微量U-maspin的临床意义。方法:选择正常早、中、晚期妊娠妇女各30例为研究对象,健康未妊娠女性30例为对照,提取其血浆游离DNA。通过含目的基因质粒标准品绘制标准曲线,并应用甲基化荧光PCR方法检测各组血浆标本亚硫酸氢盐修饰后M-maspin基因和U-maspin基因的含量,分别代表母源性游离DNA和胎源性游离DNA水平。结果:除3例早期妊娠孕妇外,其余孕妇血浆中均检出了U-maspin基因,平均浓度在早期妊娠组为57拷贝/ml,中期妊娠组为121拷贝/ml,晚期妊娠组为561拷贝/ml;占母源性M-maspin基因的比例分别为1.88%、3.21%、9.58%。结论:母血中U-maspin基因具有游离胎儿DNA的动力学特点,可能成为一种通用胎儿标记物,应用甲基化荧光PCR技术检测孕妇血浆中微量U-maspin基因方法准确、可行。

p16基因甲基化及蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达

目的探讨p16基因甲基化及蛋白在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法应用甲基化特异性PCR法(MS-PCR)及免疫组化SP法检测45例非小细胞肺癌组织、21例肺良性疾病组织中p16基因甲基化及蛋白的表达情况。结果肺良性疾病中p16基因甲基化阳性率低于癌组织,差异有显著性(P=0.001),p16基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05);肺良性疾病中p16蛋白阳性率高于癌组织,差异有显著性(P=0.007);p16蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05)。p16甲基化和p16蛋白表达缺失存在相关性(P=0.004)。结论p16基因甲基化及蛋白的表达情况与非小细胞肺癌的发生、发展有关。

非小细胞肺癌INK4a和ARF基因甲基化与其蛋白共表达关系的探讨

目的:分析INK4a和ARF基因启动子甲基化与其蛋白共表达之间的关系。方法:选择前期实验中p14ARF和p16INK4a蛋白共表达阴性的非小细胞肺癌(NSCLC)患者35例,共表达阳性的NSCLC患者20例作为研究对象,分别称为(p14+p16)阴性组和(p14+p16)阳性组。运用甲基化特异性PCR(MSP)方法对两组患者癌组织INK4a和ARF基因启动子的甲基化状态进行检测。结果:(p14+p16)阴性组有18例发生INK4a基因甲基化,(p14+p16)阳性组有2例发生INK4a基因甲基化,两组差异有显著意义(P<0.01)。(p14+p16)阴性组有8例发生ARF基因启动子甲基化,(p14+p16)阳性组有2例发生ARF基因启动子甲基化,两组差异无显著意义(P>0.05)。INK4a和ARF基因异常甲基化相互之间无显著相关性(P>0.05)。结论:NSCLC患者肺癌组织INK4a基因甲基化是导致p16INK4a蛋白表达阴性的重要机制;INK4a和ARF基因甲基化可能是相对独立的事件。

非小细胞肺癌p16基因甲基化及缺失的研究

目的 研究 p16基因在非小细胞肺癌组织中的甲基化和缺失情况 ,探讨其在肺癌诊断中的价值。方法 应用甲基化相关的PCR及双重PCR ,检测 5 0例肺癌组织和 5 4例正常肺组织中 p16基因第 1外显子 5′端启动子区域CpG岛甲基化及第 2外显子缺失情况。 结果 p16基因在非小细胞肺癌组织中甲基化率为 3 2 .0 % (16/ 5 0 ) ,缺失率为 2 8.0 % (14 / 5 0 ) ;5 4例正常肺组织甲基化率为 3 .7% (2 / 5 4) ,缺失率为 0 ,二组比较 ,甲基化率 (Fisher’sexact=0 .0 0 0 )及缺失率 (Fisher’sexact=0 .0 0 0 )均有显著性差异。结论 甲基化和缺失是非小细胞肺癌 p16基因失活的主要形式 ,检测p16基因甲基化和缺失状态可能有助于肺癌的诊断。

p16基因甲基化在非小细胞肺癌发病中的研究

目的研究p16基因甲基化在非小细胞肺癌(NSCLC)发病过程中的作用及其影响因素,为探索肺癌发病机制提供依据。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测47例NSCLC患者肺癌组织和47例对应癌旁组织中DNA的p16基因甲基化状况,同时收集吸烟等环境暴露资料。结果肺癌组织中p16基因甲基化率44·7%,高于癌旁组织的17%(P<0·01),p16基因甲基化好发于鳞癌(P<0·05),在鳞癌中肺癌组织p16基因甲基化率明显高于癌旁组织,差异有显著性(P<0·01),且p16甲基化和吸烟在鳞癌中高度相关(P<0·01)。结论p16基因甲基化可能参与鳞癌的形成,且与吸烟高度相关。

ZO-1基因甲基化状态在非霍奇金淋巴瘤骨髓检测中的临床意义

目的探讨紧密连接蛋白-1(ZO-1)基因启动子区甲基化状态在非霍奇金淋巴瘤(NHL)检测中的临床意义。方法采用甲基化特异性PCR方法(MS-PCR)分析10例非血液系统肿瘤者骨髓及45例NHL患者骨髓标本的ZO-1基因启动子区甲基化状况。结果ZO-1基因在10例良性血液病及正常人中呈完全非甲基化状态,在39例初治、复发、未完全缓解的淋巴瘤患者中甲基化阳性率53.85%(P<0.05)。在39例初治或复发或未达到完全缓解的NHL患者中28例Ⅲ、Ⅳ期的NHL患者ZO-1基因甲基化阳性率64.29%,11例Ⅰ、Ⅱ期的NHL患者ZO-1基因甲基化阳性率27.27%(P<0.05)。初治、复发患者28例中甲基化阳性16例(57.14%),经治疗达到部分缓解的11例患者中甲基化阳性5例(45.45%),临床缓解的6例患者均为完全非甲基化。结论ZO-1基因启动子区高甲基化与疾病分期及缓解明显相关,它可以作为判断NHL进展和评价预后的辅助指标,并以此指导临床治疗。

非霍奇金淋巴瘤组织中p73基因印迹状态及甲基化

目的:探讨p73基因启动子区甲基化及基因印迹状态与非霍奇金淋巴瘤的关系。方法:取淋巴结活检新鲜标本40例,其中非霍奇金淋巴瘤20例(B细胞淋巴瘤16例,T细胞淋巴瘤4例),淋巴结反应性增生20例。采用逆转录聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(RT-PCR-RFLP)的方法及甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)的方法分别检测上述组织中p73基因的印迹状态及启动子区域CpG岛的甲基化状态。结果:20例非霍奇金淋巴瘤p73基因杂合子表型8例,其中p73基因单等位基因表型7例;20例淋巴结反应性增生中p73基因杂合子表型6例,其中p73基因单等位基因表型5例,2组间等位基因表型比较差异无统计学意义(P>0.999)。20例非霍奇金淋巴瘤组织中p73基因启动子区甲基化频率为35.0%,而20例淋巴结反应性增生中均无p73基因启动子区甲基化(P=0.008)。结论:p73基因异常甲基化可能与非霍奇金淋巴瘤的发生有关。

非小细胞肺癌11个肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化的研究

目的观测11个基因在非小细胞肺癌中的甲基化谱,探讨肺癌基因诊断的新途径。方法应用甲基化特异性的PCR(m ethyl-spec ific PCR,MSP)。方法检测甲基化率,回收产物测序。结果11个基因中有6个基因在癌组织中的甲基化率均>40%并且高于癌旁组织,6个基因的甲基化率分别是APC 61%,RASSF1 a 55%,p73 45%,p16 INK4 a 43%,CDH13 43%及RAR-β41%,>65岁组RASSF1 a、p16 INK4 a和RAR-β甲基化率高于≤65岁组;吸烟史组APC、RASSF1 a、p16 INK4 a和CDH13的甲基化率高于无吸烟史组;腺癌组APC、CDH13和RAR-β甲基化率高于鳞癌组,而鳞癌组p16 INK4 a甲基化率高于腺癌组;RASSF1 a和p16 INK4 a甲基率随TNM临床分期而逐渐增加。结论6个基因甲基化率的发生具有肿瘤特异性,并且相关基因的甲基化与NSCLC患者的病理生理密切相关,我们的研究为早期诊断NSCLC提供帮助。

RUNX3基因启动子甲基化与早期非小细胞肺癌的预后

目的:探讨RUNX3基因启动子甲基化与非小细胞肺癌(NSCLC)预后的关系。方法:酚/氯仿法提取80例术后接受顺铂辅助化疗NSCLC患者的肺癌组织标本DNA,巢氏甲基化特异性PCR(nMSP)检测RUNX3启动子甲基化状态,并回顾性分析甲基化状态与临床病理特征、术后无病生存、总生存的关系。结果:80例NSCLC肿瘤样本中20例检测到RUNX3基因启动子甲基化(25.0%)。RUNX3启动子基因甲基化与病理类型相关(P=0.020),且腺癌(36%)高于鳞癌(11%)。N分期(OR:4.898,P<0.001)、RUNX3基因启动子甲基化(OR:20.293,P=0.011)是影响术后无病生存的独立危险因素。单因素K-M生存分析、Cox多因素分析表明RUNX3基因甲基化(RR:2.345,95%CI:1.130～4.865,P=0.022)是影响总生存的独立危险因素。结论:RUNX3基因甲基化是影响术后NSCLC无病生存和总生存的独立影响因素。

非小细胞肺癌患者血浆 RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO 基因甲基化状态观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)、ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)、3-0-硫基转移酶-2(3-OST-2)、死亡相关蛋白激酶(DAPK)、膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)等基因启动子区域的甲基化状态。方法采用甲基化特异PCR技术对63例NSCLC患者血浆中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因是否甲基化进行观察,并以25例健康人作对照。结果 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率分别为46.0%、50.8%、26.9%、34.9%、41.3%;健康人血浆中甲基化PTPRO基因检出率为12.0%,而甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK均未检出;两者甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率相比,P均<0.05。NSCLC患者血浆中上述5种甲基化基因联合检测的敏感度为88.9%、特异度为88.0%。血浆甲基化RUNX3基因检出率与NSCLC的病理类型、临床分期以及分化程度有关(P均<0.05);甲基化RASSF1A基因检出率与NSCLC的分化程度有关(P<0.05)。结论 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率明显高于健康人。联合检测血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因有可能会有助于NSCLC的早期诊断及其生物学行为的判断。

非小细胞肺癌组织中Apaf-1基因表达及启动子区甲基化研究

目的:探讨Apaf1基因表达及启动子区甲基化在非小细胞肺癌(nonsmallcelllungcancer,NSCLC)发生中的作用。方法:应用免疫组化、半定量RTPCR和甲基化特异性PCR方法分析45例NSCLC及癌旁正常对照组织中Apaf1(apoptoticproteaseactivatingfactor1)基因的表达及启动子区甲基化情况。结果:60%(27/45)NSCLC组织Apaf1表达明显下调,与癌旁正常组织相比差异有统计学意义,P=0.0005。在Apaf1基因表达明显下调的27例NSCLC中19例出现甲基化,表达水平无明显变化的18例NSCLC中5例出现甲基化;二者对比差异有统计学意义,P=0.005。45例癌旁正常对照组织未检测到Apaf1基因启动子甲基化,提示启动子区甲基化是Apaf1基因表达下调的主要原因。结论:Apaf1基因与NSCLC相关,启动子区甲基化是该基因失活的重要机制。

支气管灌洗液P16基因启动子甲基化在非小细胞肺癌诊断中的应用

目的观察支气管灌洗液P16基因启动子甲基化在非小细胞肺癌（NSCLC）诊断中的临床应用价值。方法检索Pubmed、Medline、CNKI、维普及万方数据库,收集公开发表的关于支气管灌洗液P16基因启动子甲基化用于NSCLC诊断的相关研究。采用STATA11.0统计软件对诊断试验的敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比及ROC曲线下面积进行Meta分析。结果共纳入10项研究。支气管灌洗液P16基因启动子甲基化诊断NSCLC的敏感性为0.61（95%CI：0.57~0.65）,特异性为0.81（95%CI：0.78~0.85）,阳性似然比为5.71（95%CI：2.56~12.73）、阴性似然比为0.47（95%CI：0.40~0.57）、诊断ROC曲线下面积为0.72（95%CI：0.68~0.76）。结论支气管灌洗液P16基因启动子甲基化诊断肺癌的敏感性和特异性均较高,可作为NSCLC微创诊断方法。

p16基因甲基化对非小细胞肺癌发病的影响

目的探讨p16基因甲基化对非小细胞肺癌发病的影响。方法原发性肺癌患者47例及同期无呼吸系统疾病又未患任何肿瘤同性别者94例作对照,采用甲基化特异性PCR等技术,检测p16基因甲基化。结果p16基因甲基化在肺癌组织和正常肺组织中检出率分别为44.7%(21/47)和17.0%(8/47),两者有显著差异(P<0.05)。37例非小细胞肺癌吸烟者中有21例肺癌组织发生p16基因甲基化,而10例非小细胞肺癌非吸烟者中无一例肺癌组织发生p16基因甲基化。p16基因甲基化与年龄、饮酒、肺癌病理分型及肺癌临床分期之间均无明显的相关性(P>0.05)。结论p16基因甲基化与非小细胞肺癌发生的关系非常密切,p16基因甲基化与吸烟有关。检测p16基因甲基化与否,可能有助于肺癌的诊断。

多个抑癌基因启动子区域CpG岛异常甲基化与非小细胞肺癌关系及临床意义的研究

目的:分析多个抑癌基因启动子区域CpG岛异常甲基化与非小细胞肺癌关系。方法:收集原发性非小细胞肺癌患者肺癌组织与癌旁正常组织,提取DNA并利用甲基化特异PCR(MSP)方法进行抑癌基因甲基化检测,对资料进行Logistic回归分析。结果:对94例肺癌患者资料进行的分析结果表明,91.49%肺癌患者肺癌组织中抑癌基因发生了甲基化,明显高于相应的癌旁正常组织(40.43%)(P<0.01)。其中p16^(INK4a)、DAPK、MGMT、TIMP-3和RARβ基因的甲基化频率分别是41.49%、50.00%、17.02%、24.47%和68.09%,比癌旁正常组织高且具有统计学意义。抑癌基因甲基化对肺鳞癌、中央型肺癌和临床Ⅲ期及以上期肺癌的影响相对比较大,并随着甲基化指数的增加而显著增加。吸烟显著增加抑癌基因甲基化,尤其是p16^(INK4a)和DAPK基因甲基化,分别是不吸烟者的21.714倍和15.268倍(P<0.01)。而且,吸烟时间或吸烟指数与抑癌基因甲基化之间显示出剂量-反应关系。结论:吸烟增加抑癌基因甲基化的危险性,肺癌发病与多个抑癌基因甲基化密切相关。

人非小细胞肺癌组织中HIN-1基因甲基化的检测与分析

目的:检测HIN-1(high in normal-1)基因在非小细胞肺癌中的甲基化情况,探讨其与非小细胞肺癌患者临床病理特征及预后的关系。方法:采用基因甲基化特异性PCR检测73例非小细胞肺癌和20例正常肺组织中HIN-1基因启动子的甲基化情况,分析HIN-1基因甲基化水平与非小细胞肺癌患者临床病理特征及预后的关系。结果:非小细胞肺癌患者HIN-1基因甲基化的检出率为68.49%,而正常对照组中未检出HIN-1基因的甲基化,两者有显著差异(P<0.01)。HIN-1基因甲基化情况与肺癌患者的临床分期、有无淋巴结转移、肿瘤分级及患者的预后相关(P<0.01),而与患者的性别、年龄及肿瘤的组织学类型无关(P>0.05)。结论:HIN-1基因甲基化在非小细胞肺癌中检出率较高,其启动子高甲基化可能与非小细胞肺癌的发展及预后具有一定的关系。

非小细胞肺癌患者血清p16基因启动子甲基化分析

目的:分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中p16基因启动子区域甲基化状况及其临床意义。方法:运用甲基化特异性PCR技术,检测65例NSCLC患者血清p16基因启动子区域甲基化情况,并分析与临床病理资料的关系。结果:NSCLC患者血清p16基因甲基化检出率为43.1%(28/65),而正常对照组和良性肺部疾病组未检出;p16基因甲基化检出率与NSCLC病理类型、分期及转移状态无明显关系。结论:p16基因启动子区域甲基化是NSCLC早期辅助诊断的分子标记物之一。

外周血血浆中p16基因异常甲基化对非小细胞肺癌患者的检测意义

目的了解非小细胞肺癌患者外周血血浆中p16基因异常甲基化发生情况及其在非小细胞肺癌临床辅助诊断中的应用价值。方法选取72例肺部手术患者的血浆和组织标本,其中49例为非小细胞肺癌,23例为良性肺部疾病,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSPCR)方法检测了p16基因启动子的异常甲基化情况。结果在非小细胞肺癌患者的血浆和肿瘤组织中,p16基因甲基化检出率分别为55.1%和63.3%;非小细胞肺癌患者血清、肿瘤组织中p16基因的甲基化异常事件与肿瘤分期、分型无明显相关性。在23例良性肺部疾病,其血浆和手术切除标本均未检测出p16基因启动子的异常甲基化存在。结论检测非小细胞肺癌患者血浆中p16基因异常甲基化情况有可能成为有价值的非小细胞肺癌临床辅助诊断手段。

中晚期非小细胞肺癌MGMT基因甲基化表达与中医证型的相关性研究

目的:探讨中晚期非小细胞肺癌患者外周血血浆、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methy lguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子的甲基化状态与中医证型的相关性,为中晚期非小细胞肺癌的中医辨证分型提供客观指标。方法:对广西中医学院附属瑞康医院肿瘤科收治的100例中晚期非小细胞肺癌患者按肺脾气虚证、肺阴虚证、气滞血瘀证、气阴两虚证、痰热阻肺证五种中医证型进行分组,利用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法检测非小细胞肺癌患者外周血血浆MGMT基因启动子的甲基化状态,通过比较各中医证型MGMT表达水平的差异,探讨非小细胞肺癌中医辨证分型与MGMT表达水平的相关性。结果:本研究结果提示,肺脾气虚证、肺阴虚证、气滞血瘀证、气阴两虚证、痰热阻肺证五种中医证型的MGMT启动子甲基化阳性率分别为85.00%、90.00%、15.00%、75.00%、20.00%,经样本间两两比较秩和检验(Nemenyi),气滞血瘀证、痰热阻肺证两组与其他各组间均有显著差异(P<0.01或P<0.05)。气滞血瘀证、痰热阻肺证两组间无显著性差异(P>0.01或P>0.05)。肺脾气虚证、肺阴虚证、气阴两虚证三组间无显著性差异(P>0.01或P>0.05)。结论:气滞血瘀证、痰热阻肺证肺癌患者较易出现耐药现象。

胃肠道间质瘤中maspin基因表达及其启动子甲基化的临床意义

目的探讨胃肠道间质瘤(GIST)中maspin基因表达及启动子甲基化在预测肿瘤生物学行为、评估预后中的作用。方法采用免疫组织化学法及甲基化特异性PCR分别检测52例GIST中maspin基因蛋白表达及其启动子甲基化情况,并对患者进行随访;分析maspin基因蛋白表达及启动子甲基化与GIST生物学行为及预后的关系。结果 maspin基因蛋白表达率及启动子甲基化率分别为67.3%(35/52)和26.9%(14/52),两者表达均与GIST侵袭危险性、复发转移显著相关,且两者间存在显著负相关。38例获访的GIST患者中,maspin蛋白表达与患者生存期显著相关(P<0.05),但maspin基因启动子甲基化与患者生存期无显著相关(P>0.05)。结论启动子甲基化可能是maspin表达减少或缺失的重要原因,且在GIST发生发展过程中起着重要作用,两者检测可用来评价GIST生物学行为,能否预测患者预后尚需进一步研究。

P16基因甲基化和GSTM1基因多态性与非小细胞肺癌易感性研究

[目的]研究P16基因甲基化、谷胱甘肽硫转移酶M1基因(GSTM1)多态性和环境暴露与非小细胞肺癌(NSCLC)的关系。[方法]采用病例对照研究方法选择47例NSCLC患者和94例对照,用甲基化特异性PCR(MSP)检测P16基因甲基化,GSTM1基因多态性用限制性片断长度多态性PCR(PCR-RFLP)测定。[结果]肺癌组接触粉尘、毒物频率高于对照组(P﹤0.01),食用蔬菜水果、饮用消毒水频率肺癌组低于对照组(P﹤0.01);肺癌组织甲基化率44.7%,高于癌旁组织的17%(P﹤0.01),甲基化和吸烟高度相关(P﹤0.01);GSTM1多态性分布无统计学意义(P﹥0.05),粉尘接触、吸烟和GSTM1缺陷型有协同作用,P16甲基化和GSTM1多态性关系不明显。[结论]接触粉尘、毒物明显增加NSCLC危险性,食用蔬菜水果和消毒水降低NSCLC危险性;吸烟致P16基因甲基化参与NSCLC的形成,粉尘、吸烟可能增加GSTM1缺失型患NSCLC危险性,未发现P16甲基化和GSTM1多态性有交互作用。