非电泳法PCR牛早期胚胎性别鉴定研究

为选出更高效、实用的牛胚胎性别鉴定方法 ,分别用成年牛血样提取的基因组DNA和冷冻的牛早期胚胎细胞DNA为样本 ,以电泳法和非电泳法用相应的性染色体DNA引物做胚胎PCR性别鉴定实验 ,以相对比。血液模板DNA结果与胚胎样本结果都表明 ,使用DYZ - 1引物的非电泳法在比使用SE引物的电泳节约 1h以上时间的同时 ,具有比SE更高的灵敏度。这次研究在我国首次成功地把非电泳PCR法应用到牛胚胎性别鉴定之中 ,减少了胚胎性别鉴定的操作步骤 ,并大大缩短了性别鉴定所需要的时间 ,从而使胚胎移植现场性别鉴定更加可行。

非水毛细管电泳法区分蓝色圆珠笔油墨的研究

建立了一种基于非水毛细管电泳法区分蓝色圆珠笔油墨的方法。确定了笔迹中碱性染料(结晶紫、甲基紫、碱性品蓝、罗丹明6G、碱性艳蓝B和碱性艳蓝BO)的分离条件:缓冲溶液为1.00mmol/L醋酸-100mmol/L醋酸铵的甲醇-水(体积比90:10)体系,分离电压和温度分别为25kV和25℃,检测波长为214nm。通过该方法分析了96支蓝色圆珠笔中的油墨,并依据油墨中所含的染料种类对圆珠笔进行分类,同一类笔又通过聚类分析计量学方法再次进行区分。该法重复性好,结果准确可靠,为圆珠笔字迹鉴定提供了一种科学的方法。

非水毛细管电泳法测定金果榄中巴马汀和药根碱含量

目的非水毛细管电泳法测定不同产地金果榄药材中巴马汀和药根碱含量。方法在石英毛细管(50.0 cm×75μm)中,以75 mmol.L-1醋酸铵-0.1%冰醋酸甲醇溶液为电泳介质,运行电压15 kV,柱温25℃,检测波长265 nm。结果巴马汀和药根碱分别在1.99～99.5 mg.L-1(r2=0.998 5)和2.26～113 mg.L-1(r2=0.998 5)的范围内线性关系良好;其平均加样回收率分别为101.9%(RSD=4.2%)和100.9%(RSD=3.5%)。结论本实验方法快速简便,准确可靠,适用于金果榄等药材中巴马汀和药根碱的含量测定。

非水毛细管电泳法分离测定黄连及其制剂中小檗碱的含量

建立了非水毛细管电泳法分离测定黄连及其制剂中小檗碱的含量。通过对有机溶剂以及醋酸钠浓度的选择,确定使用75mmol/L醋酸钠甲醇溶液含1mmol/L醋酸为分离用缓冲液,可使黄连及其制剂中的小檗碱与其它组分产生良好的分离。本法在小檗碱浓度为25～200μg/ml范围内具有良好的线性关系和重现性。

非水毛细管电泳法测定胃肠宁片中巴马汀小檗碱和药根碱含量

目的建立非水毛细管电泳法同时测定胃肠宁片中巴马汀、小檗碱和药根碱的含量。方法以75 mmol/L醋酸铵甲醇溶液(pH 6.5)为电泳介质,运行电压15 kV,压力进样5 s,柱温25℃,检测波长260 nm。结果该方法能使3种药物在16 min内得到完全分离,巴马汀、小檗碱和药根碱分别在1.494～19.92 mg/L(r=0.9994)、1.485～19.8 mg/L(r=0.9990)、和1.53～20.35 mg/L(r=0.9995)范围内线性关系良好;平均回收率分别为99.4%、100.5%、101.4%。RSD分别为0.40%、0.60%、0.30%。结论本方法简单、可靠,灵敏度高,适用于胃肠宁片中巴马汀、小檗碱和药根碱的含量测定。

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析切割海马伞大鼠海马组织蛋白

目的 :应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统研究切割海马伞后大鼠海马组织蛋白的生化改变 ,为分离、纯化海马中诱导神经干细胞迁移和向神经元分化的信号物质奠定基础。方法 :取SD大鼠 ,行单侧切割海马伞术 ,于术后不同时期取切割侧海马和正常侧海马组织。进行 10 %的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。观察切割海马伞海马和正常海马的蛋白表达差异。结果 :两者在低分子量区存在一条差异性蛋白条带。其中正常海马组织的条带染色最浅 ,切割海马伞海马组织中 10天组和 2 0天组染色较深 ,14天组染色最深。结论 :结合我们过去实验 ,本研究中切割海马伞海马及正常海马组织蛋白出现的差异性条带中 。

非水毛细管电泳法测定葛根中葛根素和大豆苷元的含量

目的:建立非水毛细管电泳法快速分离测定具有神经功效的两种中药活性成份(葛根素和大豆苷元)并应用于葛根中两种组分的含量测定。方法:采用非水毛细管电泳法,以七叶内酯作为内标,90 mmol·L-1胆酸钠-3.0%乙酸-15%乙腈的甲醇液作为缓冲液,熔融石英毛细管柱分离电压:20 kV,检测波长:254 nm,柱温:25℃压力进样:50 mbar×5 s。结果:葛根素和大豆苷元在10~200μg·ml-1与峰面积线性关系良好(r=0.9991和r=0.9990),平均加样回收率分别为96.72%和97.26%,RSD分别为1.94%和2.17%(n=5)。结论:该方法简单、快速、准确、重复性好,可用于葛根的两种组分的含量测定。

非水毛细管电泳测定黄柏饮片中4种生物碱的含量

目的:建立非水毛细管电泳法同时测定不同产地、种属黄柏饮片中小檗碱、巴马汀、药根碱及木兰碱含量的方法。方法:未涂渍标准熔融石英毛细管(75μm×64.5 cm,有效长度56 cm)为分离通道,电泳介质:40 mmol/L乙酸钠-40mmol/L乙酸铵-无水甲醇缓冲液(pH5.8),分离电压:25 kV,检测波长:210 nm,毛细管温度:20℃,压力进样:5 kPa,6 s。结果:4种生物碱的浓度与峰面积的线性关系良好(r>0.999 1);加样回收率为98.22%～100.54%。结论:该方法简单、准确,重复性较好,可用于黄柏饮片内在质量的评价和控制。

非水毛细管电泳的最新研究进展

非水毛细管电泳经历了飞速地发展,研究的范围也在不断地扩大,涵盖了基础研究和分析运用两个方面.非水毛细管电泳在理论、研究方法、技术挑战都引起了人们的注意.在有关运用方面的文献中,非水毛细管电泳法所做出的成绩更是不可磨灭.本文对2000年以来非水毛细管电泳应用的研究进展进行了综述.

家畜早期胚胎性别鉴定方法综述

家畜早期胚胎的性别鉴定在动物生产实际中具有重要意义。随着科学技术的不断进步,动物早期性别鉴定方法也在不断发展,目前已研究出了许多家畜早期胚胎性别鉴定方法。本文主要对家畜性别决定机理、早期胚胎性别鉴定常见的方法做一综述,特别对生产实用的PCR法及非电泳PCR法做一介绍,旨在为相关人员提供参考。

蜥蜴及其伪品石龙子鉴别方法比较

目的比较蜥蜴Eremias argus Peters及其伪品石龙子Eumeces chinensis(Gray)的鉴别方法。方法采用薄层色谱法(TLC)、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Native-PAGE)对不同来源的10批蜥蜴药材和3批石龙子药材进行对比研究。结果不同来源蜥蜴药材及其伪品石龙子薄层色谱在相同位置出现相同颜色的斑点,不能对两者进行区分;SDS-PAGE结果显示,不同来源的蜥蜴有3条共有谱带,其中1条是区别于石龙子的特征谱带,且3批石龙子样品在14.6 kDa处的蛋白条带染色程度明显高于蜥蜴;Native-PAGE结果显示,10批蜥蜴样品3条共有谱带中1条是区别于石龙子的特征谱带,3批石龙子样品7条共有谱带中有3条特征谱带,二者特征谱带位置差别很大,进行遗传距离聚类分析,SDS-PAGE法不能将蜥蜴和石龙子完全分开,Native-PAGE法可将2种药材聚为2类。结论 Native-PAGE法可作为中药蜥蜴与其伪品石龙子的快速鉴别方法。

非水毛细管电泳法快速测定盐酸哌唑嗪片中主药的含量

目的:建立以非水毛细管电泳法快速测定盐酸哌唑嗪片中主药含量的方法。方法:采用石英毛细管,缓冲液为60mmol·L-1醋酸铵-醋酸-乙腈(79∶1∶20)的甲醇液,检测波长为220nm,电压为20kV,柱温为25℃,经0.45μm微孔滤膜过滤后进样,进样量为50mbar×3s。结果:哌唑嗪检测浓度在1～50μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9994,n=6);平均加样回收率为97.3%,RSD=1.32%。结论:所建立的方法快速、简便、准确,可用于盐酸哌唑嗪片中主药的含量测定。

非水毛细管电泳测定延胡索饮片中4种生物碱的含量

目的:建立非水毛细管电泳法(NACE)同时测定不同批次延胡索饮片中延胡索乙素、原阿片碱、盐酸小糪碱及黄连碱含量的方法。方法:以40 mmol.L–1醋酸钠-60 mmol.L-1醋酸铵-无水甲醇缓冲液(pH 6.0)为电泳介质,未涂渍标准熔融石英毛细管(75μm×64.5 cm,有效长度56 cm)为分离通道,分离电压为25 kV,检测波长为270 nm,毛细管温度为20℃,压力进样为50 mbar,6 s。结果:4种生物碱的浓度与峰面积的线性关系良好(r>0.999 2);加样回收率为96.33%～98.10%。用此法测定了延胡索饮片中4种生物碱的含量,得到满意结果。结论:该方法简单、准确,重复性较好,可用于延胡索饮片内在质量的评价和控制。

蛇毒血凝酶纯度分析方法研究

目的:建立蛇毒血凝酶纯度测定方法。方法:分别采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和等电聚焦法(IEF),对凝胶考染并扫描;采用体积排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC),使用TSK G3000SW(7.8 mm×300 mm)凝胶柱,流动相为55 mmol.L-1柠檬酸钠-0.01%Tween 80溶液;流速0.5 mL.min-1,检测波长280 nm;采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),使用C8Vydac(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%三氟乙酸溶液(A)-含0.1%三氟乙酸的90%乙腈(B),梯度洗脱,流速0.8 mL.min-1,;柱温为45℃,检测波长:280 nm。结果:4种方法测得蛇毒血凝酶的纯度分别为89.3%,88.5%,95.4%,87.4%。结论:对于蛇毒血凝酶纯度测定,非还原SDS-PAGE、IEF及RP-HPLC法均可准确地反映其样品纯度。