Fast Read_(10)尿沉渣定量分析板计数非离心法应用探讨

目的 探讨应用非离心尿液进行尿液细胞定量分析的可能性。方法 选取门诊及住院病人红、白细胞阳性尿标本各 30份 ,分别取非离心尿液与离心尿沉渣灌FastRead10 定量计数板 ,计数尿中红、白细胞 ,作对比分析。结果 红细胞数 :非离心法为 (85 .3± 16 .2 )个 / μl;离心法为 (5 0 .6± 14.7)个 / μl。白细胞 :非离心法为 (78.6± 19.4)个 / μl,离心法为(5 7.2± 17.8)个 / μl。经配对t检验 ,非离心法与离心法计数值差异非常显著 (P <0 .0 1) ,非离心法计数值明显高于离心法计数值。结论 非离心新鲜尿液直接计数可替代离心法作尿液定量分析。

梯度离心时不同离心力对精子DNA完整性及人工授精结局的影响

目的 研究宫腔内人工授精(IUI)精液处理过程中不同离心力对精液相关参数及妊娠率、流产率的影响。方法 选取2017年6月至2019年12月大连市妇女儿童医疗中心(集团)共150个周期123对夫妇的IUI临床资料作为研究对象,按照离心力分为300×g组、400×g组、500×g组,比较三组间年龄、不育年限、周期数、内膜厚度等基线资料及精液处理前后的浓度、前向运动精子百分比(PR)、优质精子回收率、精子DNA碎片指数(DFI)、妊娠率、流产率等指标。结果 三组年龄、不孕年限、周期数、内膜厚度、女方体重指数、精液浓度、PR及优质精子回收率比较,差异无统计学意义(P>0.05);300×g组精子DFI处理前后比较,差异具有统计学意义(P<0.05);400×g、500×g组处理前后精子DFI比较,差异无统计学意义(P>0.05);三组妊娠率、流产率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 辅助生殖过程中处理精液时300×g离心力可适当提高精子DNA完整性,不同离心力优化精液对IUI妊娠率、流产率无影响。

全血中性粒细胞分离方法对fMLP诱导极性化的影响

目的比较Percoll非连续密度梯度离心法和Dextran沉降法两种常用的中性粒细胞分离方法 ,为中性粒细胞极性化研究提供有效手段。方法取健康成年人外周血,采用Percoll非连续密度梯度离心法和Dextran沉降法分离中性粒细胞,分别检测分离后的中性粒细胞的极性、纯度、存活率,比较二者对极性信号分子F-actin的聚合和胞内Ca2+的影响。结果二者在极性率、纯度、存活率方面并不存在显著性差异,但Dextran沉降法在fMLP诱导细胞极性3min内对F-actin的聚合产生抑制作用,同时可使胞内Ca2+升高的Ca2+峰降低约25%。结论对PMNs极性功能研究时,两种分离方法都可以选择。Percoll非连续密度梯度离心法更有优势,但在需要纯化大量PMNs时,Dextran沉降法也是一种好的选择。

四种常用的人中性粒细胞分离方法的比较

目的:比较Percoll非连续密度梯度离心法、Ficoll-Hypaque密度梯度离心法、裂解红细胞法和Dextran作用下红细胞自然沉降法四种常用的人中性粒细胞分离方法。方法:取健康人外周静脉血,分别采用以上四种方法进行中性粒细胞分离,对其细胞纯度、回收率、存活率进行比较。结果:Percoll非连续密度梯度离心法与Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离得到的细胞纯度均大于90%,两者间比较无统计学差异(P>0.05);裂解红细胞法和Dextran作用下红细胞自然沉降法分离得到的细胞纯度略低于Percoll非连续密度梯度离心法(P<0.01)与Ficoll-Hypaque密度梯度离心法(P<0.05)。Dextran作用下红细胞自然沉降法的回收率低于Percoll非连续密度梯度离心法(P<0.01)、Ficoll-Hypaque密度梯度离心法(P<0.01)和裂解红细胞法(P<0.05);Percoll非连续密度梯度离心法回收的中性粒细胞存活率明显高于Ficoll-Hypaque密度梯度离心法(P<0.05),裂解红细胞法(P<0.01)和Dextran作用下红细胞自然沉降法(P<0.01)。结论:Percoll非连续密度梯度离心法分离中性粒细胞,纯化程度好,回收率高,是一种简单、高效的中性粒细胞分离方法,适于临床和科研中广泛应用。

Ficoll和Percoll法分离结直肠癌相关巨噬细胞的比较

目的：比较Percoll非连续密度梯度离心法、Ficoll-Hypaque 密度梯度离心法分离结直肠癌中的巨噬细胞的效果，并进一步探讨贴壁分离巨噬细胞的最适宜贴壁时间。方法：取结直肠癌患者的肿瘤组织，制成单个细胞的悬液，分别使用100％ Ficoll、35％ Percoll 以及25％与65％双梯度 Percoll 进行巨噬细胞分离，37℃培养2 h后，去除未贴壁的细胞，使用免疫荧光实验来检测巨噬细胞的纯度。之后，将Ficoll分离得到的单个核细胞，分别培养1、2、4和9 h后比较巨噬细胞的纯度。结果：Ficoll-Hypaque 密度梯度离心法分离的巨噬细胞的纯度为60．18％，Percoll 非连续密度梯度离心法分离的巨噬细胞的纯度分别为54．33％和10．93％，均低于Ficoll法分离所得到的巨噬细胞的纯度（P ＜0．05）。 Ficoll分离后贴壁1、2、4 h 分离得到的巨噬细胞纯度均达到60％以上，高于贴壁培养9 h得到的巨噬细胞的纯度（34．67％）。结论： Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离巨噬细胞，纯化程度好，是一种简单、高效的巨噬细胞分离方法，适于临床和科研中广泛应用。贴壁培养2～4h是贴壁分离巨噬细胞最适宜的时间。

还原性谷胱甘肽对兔骨髓间充质干细胞体外冷藏保存活性保护作用研究

目的观察冷藏保存对兔骨髓间充质干细胞生长活性的影响及还原性谷胱甘肽对其可能存在的保护作用。方法日本雄性大耳白兔12只,取出兔骨髓后,采用Percoll非连续性密度梯度离心法分离出单个核细胞,取原代培养后细胞经免疫磁珠分析和流式细胞术鉴定后进行传代培养。第3代传代培养细胞分别在体外4℃冷藏后分为对照组(0h)和实验组。实验组分为冷藏6h(6h组),12h(12h组)和24h(24h组)。部分冷藏12h单个核细胞分别加入0.5mmol/L和1.0mmol/L还原性谷胱甘肽(GSH)共培养,分别为12h+0.5mmol/L GSH组和12h+1.0mmol/L GSH组。对各组进行8天生长曲线的绘制并完成活性的测定。采用SPSS 17.0软件进行配对t检验分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果对照组分离出单个核细胞12天可铺满瓶底。细胞原代培养后,流式细胞仪显示经免疫磁珠分选的细胞CD29阳性率达91.7%,表达CD29,CD44,CD90,不表达CD19,CD45,CD34。生长曲线显示,6h组,12h+0.5mmol/L GSH组,12h+1.0mmol/L GSH组与对照组的细胞增殖能力差异均无统计学意义(均P>0.05)。统计学显示12h组和24h组的细胞增殖能力与对照组,6h组,12h+0.5mmol/L GSH组及12h+1.0mmol/L GSH组的细胞相比差异有统计学意义(均P<0.01);24h组的细胞增殖能力与12h组的细胞相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Percoll非连续性密度梯度离心法对于兔骨髓的骨髓间充质干细胞分离起着良好的效果。体外4℃冷藏保存对骨髓间充质干细胞的生长活性起着抑制效果,且随着冷藏时间的延长而更加明显。还原性谷胱甘肽对冷藏保存后的骨髓间充质干细胞起着保护活性的作用。