不同微结构磷酸三钙材料对Wnt非经典信号通路相关标志物蛋白的表达影响

背景:骨诱导的发生机制目前还不明确,骨诱导过程中支架材料微结构通过调控相关骨向分化信号通路从而发挥关键性作用。目的:探讨不同微结构磷酸三钙材料对MG63细胞中Wnt非经典信号通路相关标志物表达水平的影响。方法:利用H2O2发泡及控制烧结温度合成具有不同微结构的磷酸三钙材料(TCP-compact,TCP-middle,TCP-big),通过压汞实验、扫描电镜扫描确证材料微结构;同时将已确证的3组具有不同微结构磷酸三钙材料与MG63细胞共培养,检测Wnt非经典信号通路的标志物(Wnt5a,FZD1,ROR2,DKK1)的表达。结果与结论:与具有微孔结构材料共培养的细胞中Wnt5a,FZD1,ROR2,DKK1表达水平显著提高(P<0.05),不同孔径的材料之间Wnt5a,ROR2,DKK1表达存在差异(P<0.05);在共培养末期材料组之间4组标记物表达无显著差异(P>0.05)。材料微结构影响Wnt非经典信号通路的表达水平,其相关标志蛋白表达水平的差异为材料微孔结构所调控,在一定范围内材料孔径越大Wnt非经典信号通路被明显促进。

半枝莲通过Hedgehog非经典信号通路抑制结肠肿瘤干细胞自我更新和分化

目的:探究半枝莲醇提物对结直肠干细胞自我更新和分化的影响并阐明其分子作用机制。方法:慢病毒转染结肠肿瘤HT-29细胞,磁珠抗体标记法分选结肠干细胞;用CCK-8法检测半枝莲对肿瘤干细胞的活性;3D培养法、干细胞成球实验、琼脂糖集落实验探究半枝莲对HT-29Smo-CSC的生长更新及其转化的影响。实时荧光定量PCR和Western blot技术检测半枝莲对非经典Hedgehog信号通路基因和蛋白Shh、Ptch1、Gli1、Sufu及其标记基因CD133、靶基因c-Myc、分化基因CK20、增殖基因Ki67、更新基因Nanog的影响。结果:半枝莲能抑制HT-29Smo-CSC活性、生长转化及成球能力,显著下调Gli1、c-Myc、Shh mRNA及蛋白的表达,上调Sufu,下调Ptch1、CD133、CK20、Ki67、Nanog mRNA表达。结论:半枝莲醇提物能抑制HT-29Smo-CSC的增殖和分化,对非经典Hedgehog信号通路关键靶基因和蛋白有显著抑制作用,提示半枝莲能通过非经典Hedgehog信号通路抑制结直肠肿瘤干细胞自我更新和分化。

炎症微环境作用下非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路对牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的:探讨非经典Wnt钙离子信号通路在慢性牙周炎组织来源的牙周膜干细胞中的表达及其对炎症微环境作用下牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法:收集解放军总医院口腔科因治疗需要拔除的无龋前磨牙、第三磨牙及慢性牙周炎牙齿,培养正常及炎症微环境下的牙周膜干细胞(H-PDLSCs,P-PDLSCs)。成骨诱导3d后采用免疫荧光检测CaMKII在细胞内的表达。H-PDLSCs,P-PDLSCs成骨诱导7d后实时定量PCR检测CaMKII、NLK和Runx2 mRNA表达水平,同时采用Western blot检测两种细胞成骨诱导7d后Runx2、ALP、CaMKII、和NLK的表达。结果:免疫荧光结果显示在H-PDLSCs及P-PDLSCs的对照组中CaMKII均有弱阳性表达,成骨诱导3d后两组细胞中CaMKII的表达增强。实时定量PCR结果显示常规培养条件下CaMKII、Runx 2在H-PDLSCs与P-PDLSCs中的表达不存在显著性差异,当成骨诱导后其在两组中的表达量显著增高,但H-PDLSCs组显著高于P-PDLSCs组。P-PDLSCs中NLK的表达水平显著高于H-PDLSCs,成骨诱导后两种组织来源细胞中NLK mRNA的表达水平均有显著性升高但H-PDLSCs组显著高于P-PDLSCs组。非经典信号通路的关键蛋白CaMKII、NLK在成骨诱导7d后其表达水平升高,成骨关键蛋白Runx2及ALP的表达趋势与之一致,但P-PDLSCs低于H-PDLSCs。结论:在慢性炎症微环境中非经典Wnt信号通路参与牙周膜干细胞的成骨分化,Wnt/Ca2+通路中CaMKII、NLK蛋白与干细胞成骨分化正相关。

基于非经典Hedgehog信号通路的熊果酸抗结直肠癌的体外研究

目的:研究熊果酸对SMO基因沉默的人结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞HCT-116^(hSMO-)增殖、迁移的影响,并揭示熊果酸基于非经典Hedgehog信号通路的抗CRC机制。方法:以SMO基因沉默的非经典Hedgehog信号通路活化的CRC细胞HCT-116^(hSMO-)为模型,用MTT法检测熊果酸对HCT-116^(hSMO-)细胞增殖的影响;用划痕实验研究熊果酸对HCT-116^(hSMO-)细胞迁移的影响;用qRT-PCR检测熊果酸对HCT-116^(hSMO-)细胞中非经典Hedgehog信号通路相关基因c-Myc、GLI1、SHH、SUFU mRNA水平的影响;用Western Blot检测熊果酸对HCT-116^(hSMO-)细胞中非经典Hedgehog信号通路相关蛋白c-Myc、GLI1、SHH、SUFU表达的影响。结果:熊果酸显著抑制HCT-116^(hSMO-)细胞的增殖和迁移,降低细胞中c-Myc、GLI1、SHH mRNA水平而升高SUFU mRNA水平,并抑制细胞中c-Myc、GLI1、SHH蛋白表达而增强SUFU蛋白表达。结论:熊果酸具有良好的体外抗CRC作用,其机制在于熊果酸能够抑制非经典Hedgehog信号通路活性。

雌激素微环境下非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路调控人牙周膜干细胞成骨分化的研究

目的:探讨雌激素作用下非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells hPDLSCs)成骨分化的调控。方法:将第3代hPDLSCs分为空白组、对照组、雌激素组、抑制剂组,成骨诱导7d检测ALP活性,Real-time PCR检测各组Wnt信号通路基因及成骨基因表达水平。结果:ALP检测结果示对照组较空白组ALP活性增加(P<0.05),雌激素组和抑制剂组较对照组ALP活性增加(P<0.05),但雌激素组和抑制剂组ALP活性差异无统计学意义(P>0.05)。Real-time PCR检测结果显示对照组较空白组Wnt信号通路基因β-catenin、CaMKⅡ、NLK及成骨基因RUNX2、OCN表达增加(P<0.05),雌激素组和抑制剂组较对照组Wnt信号通路基因β-catenin、CaMKⅡ、NLK及成骨基因RUNX2、OCN表达增加(P<0.05);抑制剂组较雌激素组β-catenin表达下降(P<0.05),而CaMKⅡ、NLK表达增加(P<0.05),但两组成骨基因RUNX2、OCN表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:雌激素可能通过增强非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路的活化促进hPDLSCs的成骨分化。

NIBP在结肠癌NF-κB非经典激活通路中的作用及其临床意义

目的:检测结肠癌患者组织中NIK-IKKβ结合蛋白(NIK,IKKβ-binding protein,NIBP)、磷酸化p100(p-p100)、p52和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关通路蛋白:CD44、波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,探讨NIBP蛋白的表达与非经典核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路的关系及其在结肠癌发生、发展、浸润和转移中的作用.方法:采用免疫组织化学SP法分别检测50例正常结肠黏膜、20例结肠腺瘤以及114例结肠癌患者组织中NIBP、p-p100、p52、CD44、Vimentin和E-cadherin的表达.结果:免疫组织化学结果显示有转移结肠癌组织中NIBP、p-p100、p52、CD44和Vimentin的阳性表达均高于无转移结肠癌以及结肠腺瘤和正常结肠黏膜组织,而E-cadherin则正好相反(P<0.05);且NIBP、p-p100、p52、CD44、Vimentin和E-cadherin在结肠癌组织中的表达与浸润深度、TNM临床分期、淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05);结肠癌组织中NIBP与p-p100、p52表达之间,C D44与p52、E-cadherin及Vimentin表达之间均存在明显相关性(P<0.05).结论:NIBP可能通过激活非经典NF-κB信号通路诱导EMT的发生,从而促进结肠癌的发生、发展、浸润和转移.

非经典Wnt信号在骨稳态中的作用

Wnt信号通路是由经典及非经典两类通路组成的一个复杂的蛋白网络,其在骨代谢疾病和肿瘤疾病等研究中至关重要.对于骨代谢疾病早期报道多集中于经典信号通路,但随着研究的不断深入,非经典Wnt信号通路在调控骨稳态(骨形成和骨吸收)中的作用日益受到关注.本文对非经典Wnt配体及其在骨稳态中的作用进行阐述,了解非经典Wnt信号的靶向调控为治疗骨质疏松症等骨稳态失衡相关疾病提供潜在研究方法及新的靶点.

Wnt信号通路调控免疫应答的研究进展

Wnt蛋白是一类分泌型糖蛋白,通过自分泌或旁分泌发挥作用,是一组调控胚胎形成期间细胞间信号传导、高度保守的分泌型信号分子。Wnt信号通路分为β-catenin依赖的经典信号通路以及非经典信号通路,广泛参与细胞的增殖、迁移和分化等过程。值得关注的是,Wnt信号通路调控巨噬细胞、T细胞、B细胞等多种免疫细胞的分化与发育,并通过多种机制调控免疫应答过程。此外,Wnt信号通路对肝星状细胞、内皮细胞等具有免疫特性细胞的生物学功能也发挥调控作用。本文对Wnt信号通路调控免疫应答的研究进展作一综述。

间充质干细胞向成骨细胞分化中的Wnt信号通路

背景:研究表明Wnt信号通路在间充质干细胞向成骨分化中具有重要作用。目的:归纳总结Wnt信号通路的机制、调控以及其参与间充质干细胞成骨分化的作用。方法:应用计算机检索Pubmed和CNKI数据库中1998年9月至2013年3月相关文献,在标题和摘要中以"Wnt,间充质干细胞,Wnt信号通路,成骨细胞分化,经典Wnt信号传导通路,非经典Wnt信号传导通路"或"Wnt,Mesenchymal stem cells,Wnt signaling pathways,osteoblastic differentiation,canonical Wnt signaling,non-canonical Wnt signaling"为检索关键词进行检索。最后选择31篇符合标准的文献进行综述。结果与结论:Wnt信号传导通路在间充质干细胞向成骨细胞中充当着关键的角色,包括经典Wnt信号、非经典Wnt信号以及其内部多种因子都参与间充质干细胞增殖和分化的调控。经典Wnt信号传导通路与非经典Wnt信号传导通路能联合调控人间充质干细胞的多向性分化,其中Wnt信号传导通路在参与在间充质干细胞向成骨分化的过程中,Wnt11,FZD6,sFRP2,sFRP3和Ror2等因子的表达升高,而Wnt9a和FZD7的表达下降。但Wnt信号的各因子如何相互影响,如何利用Wnt信号的机制促使间充质干细胞更快、更准确地分化值得更进一步探讨与研究。

BAFF通过非经典NF-κBB途径对Raji细胞增殖调节作用的研究

目的研究BAFF对Raji细胞促增殖作用的机制,分析其对非经典NF-κBB信号途径的调节作用,并初步探讨RIPK2与BAFF/BAFF-R介导的信号通路的相关性。方法以不同浓度重组人BAFF刺激Raji细胞,MTT法分析BAFF对Raji细胞的促增殖作用,应用实时荧光定量PCR(real time q-PCR)与蛋白质印迹实验(Western blotting)检测Raji细胞中BAFF、BAFF-R、NIK、p52、Bcl-XL及RIPK2的表达。结果 BAFF能促进Raji细胞的增殖,且具有明显的剂量效应与时间效应依赖关系;BAFF、BAFF-R、NIK、p52、Bcl-XL及RIPK2在mRNA及蛋白水平的表达均随重组人BAFF浓度的增加而升高(P<0.05)。结论重组人BAFF刺激Raji细胞后能激活非经典NF-κB信号途径,并引起下游靶蛋白Bcl-XL等抗凋亡因子的过表达,促进肿瘤细胞的存活和增殖。BAFF可以上调RIPK2的表达,提示RIPK2与非经典NF-κB信号途径之间可能存在功能联系。

CNTF及其信号转导通路的实验研究现状

神经营养因子及其信号转导通路是从分子水平对疾病的发病机制进行阐释,该领域的研究日益受到人们的重视。查阅文献,对近年来的研究热点CNTF及其信号转导通路,以及在针灸治病机理研究中的应用归纳总结如下,以期为今后的实验研究提供理论依据。

Wnt信号通路分子调控细胞迁移的研究进展

Wnt信号通路决定着生物很多重要的生命环节，包括细胞迁移，细胞极化，神经形成以及胚胎发育过程中器官的发生。细胞迁移是所有生物所必须的。对于多细胞生物，从胚胎发育之初，胚胎的形态形成就依赖大量细胞的正确迁移。在这篇综述中，我们主要概括了Wnt信号通路以及Wnt信号通路控制细胞迁移的一些研究进展。

非经典Wnt信号通路在2型糖尿病大鼠非酒精性脂肪性肝炎发生与发展中的作用

探讨非经典Wnt信号通路在2型糖尿病大鼠非酒精幽旨肪性肝炎（NASH）发生与发展中的作用。方法将雄性SD大鼠24只随机等分为对照组和模型组。对照组喂以基础饲料，模型组喂以高糖高脂饲料。4周后，模型组注射链脲佐菌素（30mg／kg）诱导2型糖尿病（T2DM）。各组继续对应饲料喂养至12周，模型组成功造模为T2DM-NASH模型。取血清及肝脏组织。检测血清葡萄糖、ALT、ASR水平;苏木素-伊红及油红O染色观察肝脏病理改变;免疫组织化学、Western blot检测肝脏Wnt5a、NF-1cB P65蛋白的表达；实时PCR定量检测肝脏Wnt5a mRNA、NF-KBp65 mRNA的表达，分别与对照组比较。数据以均数士标准差（x±s）表示，采用t检验和直线相关与回归分析进行统计学分析。结果对照组和T2DM-NASH组中，血清葡萄糖分别为（6．25±1．28）mmol／L和（31．21±0．86）mmol／L，t=-36．204；血清ALT分别为（31．00±3．69）U／L和（301．50±8．62）U／L，f=-99．94;血清AST分别为（77．58±1．83）U／L和（344．75±1．82）U/L，t=-358．85，P值均〈0．01。苏木素-伊红及油红O染色显示肝细胞脂肪变性及肝组织炎症。免疫组织化学结果显示对照组和T2DM-NASH组的WntSa表达量（积分吸光度）分别为1．15FA士577．45和4．04E5士2．42FA，f=-56．24;NF-kB p65表达量（积分吸光度）分别为1．28FA±1．59E3和4．21E5±1．68E4，t=-83．895，P值均〈0．01。Westeem blot结果显示T2DM-NASH组WntSa蛋白相对表达量和对照组相比为4．21±0．34比1．00±0．25，t=17．030;T2DM—NASH组NF—KB P65蛋白相对表达量和对照组相比为4．93±0．76比1．00±0．13，f=11．438，P值均〈0．01。实时定量PCR结果显示T2DM-NASH组Wnt5a mRNA相对表达量和对照组相比为9．53±0．64比1．04±0．35，f=20．165，P〈0．011;T2DM-NASH组NF-KBp65 mRNA表达量和对照组相比为0．60±0．13比0．74±0．10，t=-1．802，P=0．125。相关性分析结果表明T2DM-NASH组肝组织WntSa蛋白表达水平分别与血清ALT、AST水平存在正相关性（r=0．64，P〈0．05；r=0．59，P〈0．05）。肝组织WntSa与NF-1cBp65蛋白表达存在正相关性（r=0．58，p〈0．05）。结论Wnt5a可能通过激活NF-kB介导炎症反应参与到T2DM合并NASH的发生与发展。

非经典Wnt信号通路在骨发育和骨代谢中的作用

非经典Wnt信号通路主要包括Wnt-平面细胞极性通路（Wnt-PCP pathway）和Wnt-钙离子通路（Wnt-Ca2＋ pathway）.非经典Wnt信号通路在骨发育和骨代谢中的作用广泛,可以调控骨髓间充质干细胞（BMSCs）的生长发育;调节膜内成骨、软骨内成骨和肢体形态发育;调控骨吸收和骨形成;并与一些病理性代谢密切相关.本文拟对其作用、特点和研究现状作一综述.

应激与糖皮质激素受体信号通路

近年来,集约化养殖中应激问题受到广泛关注。为了解应激对畜牧业的影响,本文主要阐述由糖皮质激素受体(GR)介导的应激通路。糖皮质激素受体介导机体应激反应存在2条主要路径:经典的信号通路,GR受配体激活改变构型,转移入核,结合到靶基因GR结合原件上,募集其他辅助激活因子修饰组蛋白、完成染色质重构,使紧缩的染色质变为松弛型,结合其他转录因子,形成转录起始复合物,启动基因转录;糖皮质激素(GC)暴露还可通过细胞质膜上的GRs限制细胞间的间隙连接(gap junction),不依赖基因转录或称为非经典的细胞信号传递,并能转化为经典信号通路。

马凡氏综合征血管病变的基础研究进展

马凡氏综合征(marfan syndrome,MFS)是一种常染色体显性遗传性结缔组织病,主要累及心血管系统、眼及骨骼系统。心血管的病变主要为主动脉瘤与主动脉夹层,而其破裂是引起患者死亡的主要原因。新近研究发现,引起MFS血管病变发生发展的原因与转化生长因子β(TGF-β)的过度激活及其非经典信号转导通路有着很大的关系,同时研究结果显示,miR-29b在早期MFS主动脉病变的进展中起着关键作用。

BMP信号通路在哺乳动物牙齿发育中的研究进展

骨形态发生蛋白（Bone Morphogenetic Protein,BMP）在哺乳动物牙齿发育起始、形态发生及细胞分化中发挥至关重要的作用.最新研究发现,牙间充质中BMP信号胞内传导不通过BMP公认存在的经典和非经典途径,而是通过一条全新的依赖于pSmad1/5/8,却不依赖于Smad4的非典型BMP经典传导途径来完成.

Wnt4、Wnt7a在不同程度脊髓损伤小鼠中的差异表达

【目的】观察非经典Wnt信号通路相关基因、平面细胞极性(PCP)相关基因在不同程度脊髓损伤(SCI)后的表达变化。【方法】采用LISA脊髓撞击器构建小鼠脊髓损伤模型,实验分为SCI0.65组(损伤深度为0.65mm)、SCI0.45组(损伤深度为0.45mm)和Sham组(假手术);通过BMS评分和CatWalk9.0步态分析系统测试小鼠术后运动功能;应用VonFrey纤毛和冷热板检测小鼠术后神经病理性疼痛;利用Real-timePCR法检测小鼠脊髓损伤节段和腰4腰5(L4-5)节段非经典Wnt信号通路相关基因和PCP相关基因的表达变化。【结果】①在损伤后第7、10、25、42天,SCI0.65组BMS评分明显低于SCI0.45组(P<0.05);CatWalk9.0步态分析结果表明SCI后损伤组小鼠四肢协调率低于Sham组(P<0.01)。②脊髓损伤后第28天损伤组小鼠均出现机械性痛觉超敏并且持续至42d,且损伤程度越重,机械性痛阈值越低(P<0.001);脊髓损伤后小鼠冷热痛异常,但是与损伤程度无关。③脊髓损伤造模后42d,SCI0.45组和Sham组小鼠脊髓组织中Wnt4与Wnt7a表达无显著变化,SCI0.65组Wnt4表达上调、Wnt7a表达下调(P<0.05)。【结论】①小鼠SCI后产生神经病理性疼痛。不同程度的脊髓损伤对机械痛表现出不同的敏感性。②Wnt4和Wnt7a的表达变化提示它们可能在脊髓损伤后运动神经回路的可塑性中起重要作用。

Gremlin促血管生成作用的研究进展

Gremlin是半胱氨酸结超家族的成员,在发育过程中通过抑制骨形态形成蛋白(BMP)途径发挥作用,属于BMP拮抗剂。然而,Gremlin还有一些与BMP信号通路无关的功能。近年来的研究发现,Gremlin还是一种新型的VEGFR2激动剂,与血管生成相关性疾病有关。因此,Gremlin作为一种新型促血管生成因子,Gremlin-VEGFR2是血管生成的非经典途径信号通路。本文就Gremlin通过VEGFR2途径促血管生成作用在相关疾病中的研究进展做一综述。

脂肪细胞因子Sfrp5的研究进展

分泌型卷曲相关蛋白5（Sfrp5）是分泌型卷曲相关蛋白家族（Sfrps）的一员，作为Wnt信号通路的抑制剂，可通过调控Wnt信号转导通路参与胚胎发育、细胞增殖及肿瘤生成等过程。最近研究表明Sfrp5是一种脂肪细胞因子，前体脂肪细胞分化成熟过程中被强烈诱导表达；其也可通过阻断脂肪组织Wnt信号通路，促进脂肪细胞分化，增加饮食诱导的肥胖。Sfrp5表达水平与肥胖和糖尿病相关，通过减弱非经典Wnt信号转导通路而减轻机体胰岛素抵抗。深入研究Sfrp5的生物学功能，将为治疗肥胖及相关代谢性疾病提供新的机会。