基于非经典Hedgehog信号通路的熊果酸抗结直肠癌的体外研究

目的:研究熊果酸对SMO基因沉默的人结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞HCT-116^(hSMO-)增殖、迁移的影响,并揭示熊果酸基于非经典Hedgehog信号通路的抗CRC机制。方法:以SMO基因沉默的非经典Hedgehog信号通路活化的CRC细胞HCT-116^(hSMO-)为模型,用MTT法检测熊果酸对HCT-116^(hSMO-)细胞增殖的影响;用划痕实验研究熊果酸对HCT-116^(hSMO-)细胞迁移的影响;用qRT-PCR检测熊果酸对HCT-116^(hSMO-)细胞中非经典Hedgehog信号通路相关基因c-Myc、GLI1、SHH、SUFU mRNA水平的影响;用Western Blot检测熊果酸对HCT-116^(hSMO-)细胞中非经典Hedgehog信号通路相关蛋白c-Myc、GLI1、SHH、SUFU表达的影响。结果:熊果酸显著抑制HCT-116^(hSMO-)细胞的增殖和迁移,降低细胞中c-Myc、GLI1、SHH mRNA水平而升高SUFU mRNA水平,并抑制细胞中c-Myc、GLI1、SHH蛋白表达而增强SUFU蛋白表达。结论:熊果酸具有良好的体外抗CRC作用,其机制在于熊果酸能够抑制非经典Hedgehog信号通路活性。

半枝莲通过Hedgehog非经典信号通路抑制结肠肿瘤干细胞自我更新和分化

目的:探究半枝莲醇提物对结直肠干细胞自我更新和分化的影响并阐明其分子作用机制。方法:慢病毒转染结肠肿瘤HT-29细胞,磁珠抗体标记法分选结肠干细胞;用CCK-8法检测半枝莲对肿瘤干细胞的活性;3D培养法、干细胞成球实验、琼脂糖集落实验探究半枝莲对HT-29Smo-CSC的生长更新及其转化的影响。实时荧光定量PCR和Western blot技术检测半枝莲对非经典Hedgehog信号通路基因和蛋白Shh、Ptch1、Gli1、Sufu及其标记基因CD133、靶基因c-Myc、分化基因CK20、增殖基因Ki67、更新基因Nanog的影响。结果:半枝莲能抑制HT-29Smo-CSC活性、生长转化及成球能力,显著下调Gli1、c-Myc、Shh mRNA及蛋白的表达,上调Sufu,下调Ptch1、CD133、CK20、Ki67、Nanog mRNA表达。结论:半枝莲醇提物能抑制HT-29Smo-CSC的增殖和分化,对非经典Hedgehog信号通路关键靶基因和蛋白有显著抑制作用,提示半枝莲能通过非经典Hedgehog信号通路抑制结直肠肿瘤干细胞自我更新和分化。

基于Hedgehog信号通路探讨祛湿通络法抗非酒精性脂肪性肝病肝纤维化研究

目的基于肝纤维化中医发病病因与病机特点,分别评价祛湿法、通络法及祛湿通络法对非酒精性脂肪性肝病肝纤维化小鼠肝组织中Hedgehog信号通路表达的影响,以期为临床运用祛湿通络法治疗肝纤维化提供实验依据。方法将SPF级8周龄C57BL/6J成年雄性小鼠60只按照随机数字表法分为正常组、模型组、西药组、祛湿组、通络组、祛湿通络组,每组10只。除正常组外均予充足的蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饲料喂养,共8周。正常组和模型组按10 mL/(kg·d)灌胃蒸馏水,西药组按0.1 mg/(kg·d)灌胃秋水仙碱药液,祛湿组按7.4 g/kg灌胃茵陈蒿汤,通络组按10.9 g/(kg·d)灌服薛氏三甲散药液,祛湿通络组按18.3 g/(kg·d)灌服自拟方茵陈三甲散药液,每日1次,于8周末处死。分别检测小鼠血清冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)及Ⅲ型前胶原(PCⅢ)含量。采用HE和Masson染色观察各组小鼠肝组织病理变化情况,qPCR和Western blot检测配体Shh,核转录因子Gli1、Gli2和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA相对表达水平和蛋白表达量。结果与模型组比较,祛湿组、通络组、祛湿通络组小鼠经HE和Masson染色均见肝纤维化程度减轻,血清指标AST、ALT、TBIL及肝纤维化指标HA、LN、PCⅢ值均下降(P<0.05),小鼠肝脏组织内Shh、Gli1、Gli2、α-SMA表达水平降低(P<0.05)。结论祛湿法、通络法和祛湿通络法均能改善非酒精性脂肪性肝病肝纤维化小鼠的肝功能,抑制肝纤维化的形成,其中以祛湿通络法综合效果最佳,祛湿通络法对小鼠肝纤维化的抑制作用优于单用祛湿法或通络法。

炎症微环境作用下非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路对牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的:探讨非经典Wnt钙离子信号通路在慢性牙周炎组织来源的牙周膜干细胞中的表达及其对炎症微环境作用下牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法:收集解放军总医院口腔科因治疗需要拔除的无龋前磨牙、第三磨牙及慢性牙周炎牙齿,培养正常及炎症微环境下的牙周膜干细胞(H-PDLSCs,P-PDLSCs)。成骨诱导3d后采用免疫荧光检测CaMKII在细胞内的表达。H-PDLSCs,P-PDLSCs成骨诱导7d后实时定量PCR检测CaMKII、NLK和Runx2 mRNA表达水平,同时采用Western blot检测两种细胞成骨诱导7d后Runx2、ALP、CaMKII、和NLK的表达。结果:免疫荧光结果显示在H-PDLSCs及P-PDLSCs的对照组中CaMKII均有弱阳性表达,成骨诱导3d后两组细胞中CaMKII的表达增强。实时定量PCR结果显示常规培养条件下CaMKII、Runx 2在H-PDLSCs与P-PDLSCs中的表达不存在显著性差异,当成骨诱导后其在两组中的表达量显著增高,但H-PDLSCs组显著高于P-PDLSCs组。P-PDLSCs中NLK的表达水平显著高于H-PDLSCs,成骨诱导后两种组织来源细胞中NLK mRNA的表达水平均有显著性升高但H-PDLSCs组显著高于P-PDLSCs组。非经典信号通路的关键蛋白CaMKII、NLK在成骨诱导7d后其表达水平升高,成骨关键蛋白Runx2及ALP的表达趋势与之一致,但P-PDLSCs低于H-PDLSCs。结论:在慢性炎症微环境中非经典Wnt信号通路参与牙周膜干细胞的成骨分化,Wnt/Ca2+通路中CaMKII、NLK蛋白与干细胞成骨分化正相关。

Hedgehog信号通路在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义

Hedgehog(Hh)信号通路在肿瘤的发生和发展过程中发挥重要调控作用。本研究探讨Hh信号通路中Gli1和Gli2在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)中的表达及意义。分别采用实时定量RT-PCR和免疫组织化学的方法分析检测18例NHL和10例淋巴结反应性增生组织中Gli1、Gli2 mRNA和蛋白表达水平。结果表明,NHL组织中Gli1和Gli2 mRNA中位表达水平经β-actin校正后分别为2.05和2.31,明显高于淋巴结反应性增生组织(分别为0.82和0.89),且Gli1与Gli2 mRNA表达水平呈正相关(r=0.63,p<0.01),Gli2 mRNA水平与NHL临床分期(p=0.03)具有相关性;Gli1和Gli2蛋白在NHL中的阳性率分别为80%和68%,明显高于对照组,且Gli1和Gli2蛋白表达呈正相关(r=0.62,p<0.05);Gli1和Gli2蛋白表达均与NHL分期相关(p=0.05,p=0.01),而Gli1和Gli2基因及蛋白表达水平与NHL患者年龄比例、性别比例、B症状及分型方面无明显相关性(p>0.05)。结论:Hh信号通路中Gli1和Gli2在NHL患者组织中高表达,并对NHL患者临床分期及预后具有指导意义。进一步对Hh信号通路在NHL中作用机制的深入探讨将有助于揭示NHL的发生、发展的机理,并有望成为NHL未来治疗的重要突破点。

hedgehog信号通路的负调控基因在早期非小细胞肺癌中的甲基化状态及其意义

目的:研究hedgehog信号通路的负调控基因生长停顿特异蛋白1(growth arrest specific1,GAS1)、人类hedgehog相互作用蛋白(human hedgehog interacting protein,HHIP)和patched1(PTCH1)在早期非小细胞肺癌(NSCLC)中的甲基化状态并初步探讨此3个基因对早期NSCLC的诊断价值。方法:收集Ⅰ期NSCLC患者85例(NSCLC组)并以同期住院的23例非肿瘤性肺部疾病患者作为对照组。采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)检测GAS1、HHIP和PTCH1在5个NSCLC细胞株A549、NCI-H1299、NCI-H460、LTEP-a-2、SPC-A-1中的甲基化状态及其在NSCLC组患者的肺癌组织中、对照组的肺部病变组织中的甲基化状态;分析3个基因诊断Ⅰ期NSCLC的敏感性和特异性。结果:hedgehog信号通路的3个负调控基因除在NCI-H1299中均呈去甲基化状态外,在其他4个肺癌细胞株中均有1～2个基因呈甲基化状态。GAS1、HHIP和PTCH1在NSCLC组的甲基化率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。GAS1用于临床Ⅰ期NSCLC诊断时敏感性和特异性分别为69.41%、69.57%;HHIP分别为49.41%、82.61%;PTCH1则分别为34.12%、100.0%。结论:PTCH1、HHIP和GAS1在Ⅰ期NSCLC中存在显著的异常甲基化,提示hedgehog的异常激活可能参与了NSCLC的发生和发展。对3个基因在早期NSCLC患者血浆游离DNA中甲基化状态的进一步研究可望为NSCLC的早期诊断提供新的肿瘤分子学标志物。

探讨Hedgehog信号通路在TGF-β1诱导非小细胞肺癌上皮间质转化中的作用

目的：探讨Hedgehog信号通路在上皮来源的A549细胞上皮-间质转化中的作用，方法通过一组试验验证生长转化因子β1（TGF-β1）A549细胞增殖及相关细胞标记物的影响。结果（1）MTT结果显示，各组细胞生长良好，细胞数量和时间成正比，逐渐增多，加入5ng/ml TGF-β1刺激12h，24h，48h后，A549细胞的增值与对照组相比，无统计学意义（P＞0.05）。（2）在5ng/ml的TGF-β1刺激下，A549细胞与对照组相比，蛋白质表达增加30%以上。（3）阻隔后的A549细胞，Vimentin和E-cadherin蛋白质表达情况减少20%。结论 Hedgehog信号通路在TGF-β1诱导非小细胞肺癌上皮间质转化中有明显作用。

Hedgehog信号通路在非小细胞肺癌的研究进展

Hedgehog(Hh)信号转导通路与肿瘤的关系逐渐受到重视,该通路不但在胚胎时期的细胞分化、组织发育及器官形成中扮演重要角色,而且研究显示Hh信号通路在多种恶性肿瘤与细胞系中激活,包括肺癌、胰腺癌、基底细胞癌、乳腺癌等,参与肿瘤的增殖分化、细胞凋亡、血管新生、侵袭转移等过程,因此,Hh可能会成为肿瘤治疗一个新的靶点。非小细胞肺癌(NSCLC)目前发病率及死亡率均居恶性肿瘤首位,也是学者研究的热点,本文就Hedgehog在NSCLC中的研究进展作一综述。

miR-132调节非小细胞肺癌hedgehog信号通路受体基因PTCH1及细胞增殖、迁移和侵袭（英文）

目的研究miR-132在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系H1299中的作用及相应的靶基因。方法real-time PCR检测7种细胞系中miR-132的表达量。用CCK-8检测稳定株细胞H1299-pEGP-miR-132与H1299-pEGP-miR-null的生长速率的变化。使用稳定株细胞H1299检测miR-132对于细胞克隆形成、细胞迁移和细胞侵袭的影响。用Transwell结合matrigel的方法检测H1299-pEGP-miR-132细胞与H1299-pEGP-miR-null细胞在72h时细胞迁移和侵袭的变化,同时在H1299-pEGP-miR-132细胞中使用anti-miR-132进行了相关的实验验证。运用生物信息学方法预测miR-132的靶基因,并运用双荧光实验、real-time PCR和Western blot验证。在H1299-pEGP-miR-132细胞中共同转染anti-miR-132和PTCH1siRNA检测其对细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果 miR-132在肺癌细胞系中呈现高表达,在NSCLC细胞H1299中miR-132通过靶向调节PTCH1基因的表达发挥作用。H1299-pEGP-miR-132细胞的增殖(P<0.01)、迁移(P<0.05)、侵袭(P<0.05)能力明显高于对照组。在H1299-pEGP-miR-132细胞中转入PTCH1siRNA后细胞增殖能力升高(P<0.05),迁移和侵袭能力降低(P<0.001)。H1299-pEGP-miR-132细胞15天形成的克隆数目是对照组细胞的1.41倍(P<0.05)。Western blot法检测显示miR-132使H1299中PTCH1蛋白表达量显著降低(0.68倍),anti-miR-132使PTCH1表达量显著升高(1.97倍)。结论 miR-132可能参与NSCLC的细胞增殖、迁移和侵袭。它的致癌性部分归因于对Hh信号通路关键的负调控蛋白PTCH1的调节。

Sonic Hedgehog信号通路与非小细胞肺癌的相关研究进展

肺癌是当今世界上严重威胁人类健康与生命的一种恶性肿瘤,其发病率在逐年增加。最新流行病学数据显示,我国肺癌发病率已占据恶性肿瘤发病率的第1位。尽管在过去的数十年间对肺癌进行了较为深入的研究,但肺癌患者的早期诊断及远期存活并无显著改善。而非小细胞肺癌（NSCLC）占所有肺癌病例的80%～85%,并且大部分患者就诊时已属于中晚期,疗效不佳。

雌激素微环境下非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路调控人牙周膜干细胞成骨分化的研究

目的:探讨雌激素作用下非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells hPDLSCs)成骨分化的调控。方法:将第3代hPDLSCs分为空白组、对照组、雌激素组、抑制剂组,成骨诱导7d检测ALP活性,Real-time PCR检测各组Wnt信号通路基因及成骨基因表达水平。结果:ALP检测结果示对照组较空白组ALP活性增加(P<0.05),雌激素组和抑制剂组较对照组ALP活性增加(P<0.05),但雌激素组和抑制剂组ALP活性差异无统计学意义(P>0.05)。Real-time PCR检测结果显示对照组较空白组Wnt信号通路基因β-catenin、CaMKⅡ、NLK及成骨基因RUNX2、OCN表达增加(P<0.05),雌激素组和抑制剂组较对照组Wnt信号通路基因β-catenin、CaMKⅡ、NLK及成骨基因RUNX2、OCN表达增加(P<0.05);抑制剂组较雌激素组β-catenin表达下降(P<0.05),而CaMKⅡ、NLK表达增加(P<0.05),但两组成骨基因RUNX2、OCN表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:雌激素可能通过增强非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路的活化促进hPDLSCs的成骨分化。

不同微结构磷酸三钙材料对Wnt非经典信号通路相关标志物蛋白的表达影响

背景:骨诱导的发生机制目前还不明确,骨诱导过程中支架材料微结构通过调控相关骨向分化信号通路从而发挥关键性作用。目的:探讨不同微结构磷酸三钙材料对MG63细胞中Wnt非经典信号通路相关标志物表达水平的影响。方法:利用H2O2发泡及控制烧结温度合成具有不同微结构的磷酸三钙材料(TCP-compact,TCP-middle,TCP-big),通过压汞实验、扫描电镜扫描确证材料微结构;同时将已确证的3组具有不同微结构磷酸三钙材料与MG63细胞共培养,检测Wnt非经典信号通路的标志物(Wnt5a,FZD1,ROR2,DKK1)的表达。结果与结论:与具有微孔结构材料共培养的细胞中Wnt5a,FZD1,ROR2,DKK1表达水平显著提高(P<0.05),不同孔径的材料之间Wnt5a,ROR2,DKK1表达存在差异(P<0.05);在共培养末期材料组之间4组标记物表达无显著差异(P>0.05)。材料微结构影响Wnt非经典信号通路的表达水平,其相关标志蛋白表达水平的差异为材料微孔结构所调控,在一定范围内材料孔径越大Wnt非经典信号通路被明显促进。

Hedgehog信号通路及其与非小细胞肺癌关系的研究进展

Hedgehog(Hh)信号通路的结构组成包括作为配体的Hh分泌蛋白,分布于靶细胞膜上的受体Patched蛋白、Smoothened蛋白,转录因子蛋白家族,主要校正器蛋白及下游的驱动蛋白、蛋白激酶A、环磷腺苷等;其通过信号串联传导信息。Hh信号通路不但在正常肺组织中扮演着重要角色,而且在非小细胞肺癌细胞系中被激活,参与肿瘤的增殖分化、细胞凋亡、侵袭转移、复发等过程; Hh信号已成为治疗非小细胞肺癌、逆转肿瘤耐药的重要研究靶点。

NIBP在结肠癌NF-κB非经典激活通路中的作用及其临床意义

目的:检测结肠癌患者组织中NIK-IKKβ结合蛋白(NIK,IKKβ-binding protein,NIBP)、磷酸化p100(p-p100)、p52和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关通路蛋白:CD44、波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,探讨NIBP蛋白的表达与非经典核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路的关系及其在结肠癌发生、发展、浸润和转移中的作用.方法:采用免疫组织化学SP法分别检测50例正常结肠黏膜、20例结肠腺瘤以及114例结肠癌患者组织中NIBP、p-p100、p52、CD44、Vimentin和E-cadherin的表达.结果:免疫组织化学结果显示有转移结肠癌组织中NIBP、p-p100、p52、CD44和Vimentin的阳性表达均高于无转移结肠癌以及结肠腺瘤和正常结肠黏膜组织,而E-cadherin则正好相反(P<0.05);且NIBP、p-p100、p52、CD44、Vimentin和E-cadherin在结肠癌组织中的表达与浸润深度、TNM临床分期、淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05);结肠癌组织中NIBP与p-p100、p52表达之间,C D44与p52、E-cadherin及Vimentin表达之间均存在明显相关性(P<0.05).结论:NIBP可能通过激活非经典NF-κB信号通路诱导EMT的发生,从而促进结肠癌的发生、发展、浸润和转移.

Hedgehog信号通路在肝脏疾病中的研究进展

Hedgehog信号通路是高度保守的信号通路,在胚胎发育和生长调控方面发挥着诸如细胞增殖、细胞黏附、细胞迁移、细胞分化和胚胎形成的作用。Hedgehog信号通路还参与多个成熟器官组织的伤口愈合,尤其在肝脏损伤修复方面发挥重要作用,但其过度活化可导致肝脏纤维化及肝癌的发生。本文将对各种慢性肝脏疾病中Hedgehog信号通路的作用机制进行总结归纳,为肝脏肿瘤靶向治疗及抗肝纤维化寻找新靶点提供理论依据。

Hedgehog信号通路在常见肝脏疾病中的基础研究进展

非酒精性脂肪肝、肝纤维化及肝癌是常见的肝脏疾病。但其发病机制仍不明确。而Hedgehog信号通路在组织更新及修复损伤中发挥重要作用,且包括枯否细胞在内的存在于肝组织的细胞既是Hedgehog信号通路配体的产生细胞,同时也是效应细胞,提示Hedgehog信号通路在维持肝脏生理病理方面的重要地位。此外,在肝纤维化、非酒精性脂肪肝及肝癌中均已发现突变的Hedgehog信号通路,说明Hedgehog信号通路参与了其发病过程。未来,深入研究Hedgehog信号通路在非酒精性脂肪肝、肝纤维化及肝癌中的作用,对其临床诊断、探测Hedgehog信号通路与疾病的相关性及研究特异性治疗靶点和药物具有重要意义。

非经典Wnt信号在骨稳态中的作用

Wnt信号通路是由经典及非经典两类通路组成的一个复杂的蛋白网络,其在骨代谢疾病和肿瘤疾病等研究中至关重要.对于骨代谢疾病早期报道多集中于经典信号通路,但随着研究的不断深入,非经典Wnt信号通路在调控骨稳态(骨形成和骨吸收)中的作用日益受到关注.本文对非经典Wnt配体及其在骨稳态中的作用进行阐述,了解非经典Wnt信号的靶向调控为治疗骨质疏松症等骨稳态失衡相关疾病提供潜在研究方法及新的靶点.

长链非编码RNA在骨肉瘤相关信号通路中的作用研究进展

骨肉瘤是一种常见于儿童和青少年群体的骨肿瘤,其发病机制尚不明确。长链非编码RNA(lncRNA)通过在染色质结构、转录和转录后水平调控基因表达,在肿瘤发生发展中发挥重要作用。lncRNA可通过Wnt/β-catenin、Notch、PI3K/AKT、Hedgehog等信号通路参与骨肉瘤的发生、迁移、侵袭和化疗耐药性,从而调控肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡等生物学功能,与骨肉瘤的发生发展、临床治疗和患者预后密切相关,在肿瘤诊断和预后生物标志物方面具有广阔的研究前景。

Hedgehog信号通路的研究进展

Hedgehog(Hh)蛋白可以调节后生胚胎以及成体结构,Hh信号通路失调可以导致多种疾病的发生。现有的Hh信号通路包括以调节Gli家族蛋白为主的所谓的经典途径,但是也有最近的一些研究提示Hh信号存在着非依赖Gli蛋白家族的所谓的非经典途径。本文探讨Hh可能的信号通路。

人类免疫缺陷病毒通过激活核因子κB非经典通路从而控制树突细胞的免疫调节表型

人类免疫缺陷病毒（HIV）通过激活Toll样受体7（TLR7）调节浆细胞样树突细胞（pDC）的功能，诱导Ⅰ型干扰素和炎症细胞因子产生。同时，pDC上调吲哚胺2，3-双加氧酶（IDO）的表达，这是诱导调节性T细胞（Treg）的重要因子，从而下调免疫激活。该研究证实核因子kB（NF-kB）非经典信号通路在建立这种pDC免疫调节表型中具有十分重要的意义。