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PEDV nsp15基因真核表达载体的构建及蛋白的表达
1
作者
张宁
郑亮
+4 位作者
杨超玥
吴志军
张华
曹宏伟
肖莉杰
《黑龙江八一农垦大学学报》
2023年第1期72-77,共6页
猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)含有一种名为Nsp15的非结构蛋白,为了研究Nsp15蛋白在侵染宿主细胞时产生的作用,成功构建了PEDV Nsp15基因的真核表达载体。通过PCR技术扩增Nsp15基因片段,经双酶切连接到pCMV-...
猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)含有一种名为Nsp15的非结构蛋白,为了研究Nsp15蛋白在侵染宿主细胞时产生的作用,成功构建了PEDV Nsp15基因的真核表达载体。通过PCR技术扩增Nsp15基因片段,经双酶切连接到pCMV-Myc载体上,酶切鉴定及测序结果证实PEDV Nsp15基因成功克隆到pCMV-Myc载体中,并将重组质粒命名为p CMV-Myc-Nsp15。将重组质粒pCMV-Myc-Nsp15转染至IPEC-J2细胞中,利用Western Blot和间接免疫荧光技术检测pCMV-Myc-Nsp15的表达以及定位情况。结果显示,pCMV-Myc-Nsp15在IPEC-J2细胞中成功表达,并且在胞质胞核均匀分布。为进一步研究PEDV Nsp15蛋白的功能奠定基础。
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关键词
猪流行性腹泻病毒
真核表达载体
非结构蛋白15
下载PDF
职称材料
传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp15的体外表达及其单克隆抗体的制备
被引量:
2
2
作者
李乐超
石婷婷
+4 位作者
郎咸勇
牟小东
王丹丹
周继勇
廖敏
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期52-57,共6页
以实验室保存的肾型传染性支气管炎病毒(IBV)毒株SC021202作为模板,扩增IBV非结构蛋白nsp15基因后,成功构建了原核表达载体PET-28a(+)-nsp15,将其转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达出约45ku的目的蛋白。纯化的nsp15蛋白可与IBV感染鸡血清发...
以实验室保存的肾型传染性支气管炎病毒(IBV)毒株SC021202作为模板,扩增IBV非结构蛋白nsp15基因后,成功构建了原核表达载体PET-28a(+)-nsp15,将其转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达出约45ku的目的蛋白。纯化的nsp15蛋白可与IBV感染鸡血清发生良好反应。用纯化的重组nsp15蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体。经过3轮有限稀释和筛选阳性克隆,最终获得3株稳定分泌nsp15蛋白抗体的细胞株,分别为1A6、2B6和4D7。Western-blot分析显示,3株单克隆抗体都与nsp15蛋白有很好的特异性反应。IFA检测显示,nsp15单克隆抗体与IBV感染的细胞和nsp15基因转染的细胞均出现明显的反应。IBV nsp15单克隆抗体的制备为传染性支气管炎流行病学的监测、鉴别诊断及对其蛋白功能的进一步研究奠定了基础。
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关键词
传染性支气管炎病毒
非结构蛋白15
单克隆抗体
原文传递
题名
PEDV nsp15基因真核表达载体的构建及蛋白的表达
1
作者
张宁
郑亮
杨超玥
吴志军
张华
曹宏伟
肖莉杰
机构
黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院
黑龙江八一农垦大学动物科技学院
出处
《黑龙江八一农垦大学学报》
2023年第1期72-77,共6页
基金
黑龙江八一农垦大学博士科研启动基金(XDB2015-18)。
文摘
猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)含有一种名为Nsp15的非结构蛋白,为了研究Nsp15蛋白在侵染宿主细胞时产生的作用,成功构建了PEDV Nsp15基因的真核表达载体。通过PCR技术扩增Nsp15基因片段,经双酶切连接到pCMV-Myc载体上,酶切鉴定及测序结果证实PEDV Nsp15基因成功克隆到pCMV-Myc载体中,并将重组质粒命名为p CMV-Myc-Nsp15。将重组质粒pCMV-Myc-Nsp15转染至IPEC-J2细胞中,利用Western Blot和间接免疫荧光技术检测pCMV-Myc-Nsp15的表达以及定位情况。结果显示,pCMV-Myc-Nsp15在IPEC-J2细胞中成功表达,并且在胞质胞核均匀分布。为进一步研究PEDV Nsp15蛋白的功能奠定基础。
关键词
猪流行性腹泻病毒
真核表达载体
非结构蛋白15
Keywords
PEDV
eukaryotic expression vector
Nsp
15
分类号
S858.26 [农业科学—临床兽医学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp15的体外表达及其单克隆抗体的制备
被引量:
2
2
作者
李乐超
石婷婷
郎咸勇
牟小东
王丹丹
周继勇
廖敏
机构
浙江大学农业部动物病毒学重点实验室
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期52-57,共6页
基金
国家自然科学基金项目(31302104)
现代农业产业技术体系岗位专家项目(CARS-41-11)
文摘
以实验室保存的肾型传染性支气管炎病毒(IBV)毒株SC021202作为模板,扩增IBV非结构蛋白nsp15基因后,成功构建了原核表达载体PET-28a(+)-nsp15,将其转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达出约45ku的目的蛋白。纯化的nsp15蛋白可与IBV感染鸡血清发生良好反应。用纯化的重组nsp15蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体。经过3轮有限稀释和筛选阳性克隆,最终获得3株稳定分泌nsp15蛋白抗体的细胞株,分别为1A6、2B6和4D7。Western-blot分析显示,3株单克隆抗体都与nsp15蛋白有很好的特异性反应。IFA检测显示,nsp15单克隆抗体与IBV感染的细胞和nsp15基因转染的细胞均出现明显的反应。IBV nsp15单克隆抗体的制备为传染性支气管炎流行病学的监测、鉴别诊断及对其蛋白功能的进一步研究奠定了基础。
关键词
传染性支气管炎病毒
非结构蛋白15
单克隆抗体
Keywords
infectious bronchitis virus
nonstructural protein
15
monoclonal antibody
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PEDV nsp15基因真核表达载体的构建及蛋白的表达
张宁
郑亮
杨超玥
吴志军
张华
曹宏伟
肖莉杰
《黑龙江八一农垦大学学报》
2023
0
下载PDF
职称材料
2
传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp15的体外表达及其单克隆抗体的制备
李乐超
石婷婷
郎咸勇
牟小东
王丹丹
周继勇
廖敏
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
原文传递
已选择
0
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参考文献
引证文献
统计分析
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