口蹄疫非结构蛋白3ABC的融合表达及纯化研究

扩增了口蹄疫非结构蛋白 3ABC基因 ,经双酶切后与表达载体pQE30Xa连接 ,构建了重组质粒pQE3ABC ,并转化到宿主菌M15中进行表达 ,并对表达条件进行了优化。Western -blot结果表明 ,所表达的蛋白氨基酸序列正确 ,且表达的融合蛋白可与标准抗FMDV -O抗体特异性结合。本研究在大肠杆菌中成功地表达了口蹄疫非结构蛋白 3ABC 。

昆虫杆状病毒系统表达口蹄疫病毒3ABC基因

以O型口蹄疫病毒为研究对象,经过RTPCP扩增得到非结构蛋白3ABC基因,克隆到转移载体pFastbacHT,将其转入含穿梭载体Bacmid的DH10Bac,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到3ABC的重组穿梭载体Bacmid3ABC,再将其转染昆虫细胞HiFive。PCR鉴定证实3ABC基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,经过SDSPAGE和Westernblot检测,3ABC基因在昆虫细胞中表达了大小约为50kDa的蛋白条带,3ABC基因在BactoBac系统中的成功表达为建立以基因工程产品为抗原、鉴别诊断自然感染和免疫动物的方法提供了技术条件。

河北省部分地区规模化养殖场羊口蹄疫3ABC抗体检测

为初步了解河北省规模化养殖场羊口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体水平,2018年5月在11个场点采集羊血清354份,用口蹄疫3ABC单抗阻断ELISA试剂盒进行抗体检测。结果显示:从不同市区分析,秦皇岛市抗体阳性率最高,为15.65%,其次是保定市、邢台市,分别为11.11%、2.86%;从不同饲养阶段分析,种羊的抗体阳性率明显偏高,为16.82%,羔羊、育成羊分别为6.53%、10.75%;从不同性别分析,母羊阳性率偏高,为11.7%,公羊为8.33%;从不同品种分析,绵羊阳性率高于山羊,分别为12.75%、4.67%。虽然我国目前使用的灭活疫苗可能会导致产生一定的非结构蛋白抗体,但上述结果能够说明河北省存在口蹄疫自然感染羊只。这提示河北省的口蹄疫防治和净化任务仍然繁重,要根除和消灭本病,可选用非结构蛋白纯化程度高的疫苗进行免疫,同时加强3ABC抗体监测和引种检疫,隔离并淘汰阳性动物。

新疆哈密市牛羊口蹄疫3ABC抗体检测情况分析

为初步了解新疆哈密市牛羊口蹄疫病毒3ABC非结构蛋白抗体情况,利用单抗阻断ELISA试验对来自哈密市3个区(县)未进行口蹄疫疫苗免疫的755份牛羊血清进行了检测。结果表明:伊吾县3ABC抗体阳性率显著高于伊州区(P<0.05),伊吾县3ABC抗体阳性率高于巴里坤县(P>0.05),差异不显著。不同饲养方式间抗体阳性率亦存在差异,牧区阳性率(17.03%)、半牧区(16.36%)显著高于农区(6.84%)(P<0.05);不同品种间,哈密本地羊(哈萨克羊)3ABC抗体阳性率为18.6%,显著高于山羊的3ABC抗体阳性率8.16%、多浪羊3ABC抗体阳性率为6.06%(P<0.05);不同性别间,母畜阳性率高于公畜;不同畜龄间,3ABC抗体阳性率与年龄显著相关(P<0.05);实验结果说明,哈密市牲畜存在口蹄疫自然感染的情况,要根除和消灭本病,需进一步加强3ABC抗体监测、引种检疫以及阳性牲畜的隔离、淘汰工作。

口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体阻断ELISA的建立与效果评价

使用组氨酸单克隆抗体作为捕获抗体,口蹄疫病毒非结构蛋白(NSP)3B单克隆抗体作为检测抗体,原核表达的口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC作为抗原,建立了一种以区分疫苗免疫动物与康复带毒动物或持续感染动物为目的,检测口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体的阻断ELISA(FMDV NSP B-ELISA)。使用本研究建立的ELISA检测了大量牛、羊及猪的血清,并用公式(1-样品D450nm/阴性对照D450nm)来计算血清阻断率,最终确定:血清阴断率≥0.46判为阳性,血清阻断率<0.46判为阴性。根据此标准检测试验感染牛、羊及猪血清,敏感性≥85.4%;检测免疫健康牛、羊及猪血清,特异性≥99.2%。通过比较发现本研究建立的ELISA与Ceditest NS ELISA试剂盒有很高的符合率,对感染动物血清与疫区田间牛血清的阳性检出率均高于同类试剂盒。表明,本研究建立的ELISA可以作为田间疫情监测方法,在口蹄疫灭活疫苗免疫动物群体中使用。

贵州省部分地区肉牛布鲁氏菌病和口蹄疫血清学调查分析

为了解贵州省肉牛布鲁氏菌病和口蹄疫流行情况,对省内8个市县的8个养殖场在栏肉牛进行血清学检测。结果显示:抽检的618份肉牛血清中,布鲁氏菌阳性率为0.32%,口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体阳性率为20.22%(125/618),A型和O型抗体阳性率分别为91.1%(563/618)和48.86%(302/618)。调查结果表明:1个被检肉牛场存栏肉牛存在感染布鲁氏菌病风险,8个被检肉牛场存栏肉牛的O型抗体水平均未达到国家农业农村部免疫抗体水平(≥70%)标准。