原钙黏蛋白7的结构和功能及与肿瘤的关系

钙黏附蛋白是一类钙依赖性的黏附分子,是一种细胞跨膜糖蛋白,介导正常组织、肿瘤组织中细胞-细胞间的黏附作用,原钙黏蛋白(protocadherin,PCDH)是其最大的亚家族。PCDH广泛分布于中枢神经系统,根据基因结构分为非成簇原钙黏蛋白和成簇原钙黏蛋白。PCDH7属于非成簇PCDHs家族,在人类基因组中定位于4p15,主要在人类的脑和心脏中表达,具有与经典钙黏附蛋白相似的作用,介导细胞之间的识别和黏附。在多种肿瘤中均检测到不同程度PCDH7的异常表达,PCDH7可能与肿瘤的增殖、侵袭、转移和预后相关。本文对PCDH7的基因结构和功能与肿瘤的关系作一综述。

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7真核表达及亚细胞定位

【目的】对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白7(nonstructural protein 7,NSP7)进行真核表达及生物信息学分析,从而推测其在PRRSV复制过程中的功能。【方法】按照GenBank数据库中NSP 7基因序列合成目的基因并构建真核表达载体P3×FLAG-CMV-NSP7,瞬时转染Marc-145细胞后通过Western blotting验证蛋白表达,通过间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)对NSP7蛋白进行亚细胞定位,利用生物信息学分析软件预测NSP7蛋白的理化性质、结构及功能。【结果】成功构建P3×FLAG-CMV-NSP7真核表达载体;Western blotting结果显示,获得大小约为2.7 ku的目的条带,证实重组载体在Marc-145细胞中高效表达。IFA结果证实在PRRSV感染初期NSP7蛋白大部分分布于细胞质中,随着感染时间延长NSP7蛋白由细胞质进入细胞核。生物信息学分析结果显示,NSP7蛋白由259个氨基酸编码,分子式为C _(1284) H _(2020) N _(348) O _(379) S_( 8),分子质量为28652.75 u,理论等电点为5.88,为不稳定、亲水蛋白。结构预测发现,NSP7蛋白二级结构包括α-螺旋和β-转角,占比分别为35.91%和5.41%。核定位序列分析发现,NSP7蛋白具有一段跨膜序列RLNKKKRRRMEAVGIF。【结论】本研究成功构建高效表达的PRRSV NSP7真核表达载体,在PRRSV感染初期NSP7蛋白分布于细胞质,感染后期分布于细胞核,NSP7蛋白存在核定位序列。

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7多克隆抗体的制备及鉴定

制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白7(nsp7)的多克隆抗体。根据NCBI上公布的PRRSV nsp7序列,合成基因后克隆至原核表达载体pET28a,对重组菌进行诱导,获得表达并纯化PRRSV nsp7重组蛋白。采用皮下多点注射的方式对新西兰白兔进行免疫接种制备兔多克隆血清,分别使用ELISA、IFA、Western blot等方法验证该多克隆血清与PRRSV以及nsp7重组蛋白的免疫反应性。间接ELISA检测结果显示,制备的多抗血清可以特异性识别原核表达的nsp7,IFA检测结果证实制备的nsp7多抗能特异性结合PRRSV,Western blot结果证实多抗血清能特异性结合PRRSV以及纯化的重组蛋白nsp7。以上结果表明,成功制备了PRRSV nsp7的多克隆抗体。

非小细胞肺癌组织中组蛋白去乙酰化酶7、泛素特异性肽酶10的表达变化及其意义

目的观察非小细胞肺癌(NSCILC)组织中组蛋白去乙酰化酶7(HDAC7)、泛素特异性肽酶10(USP10)的表达变化,探讨其意义。方法98例NSCLC患者,均行肿瘤切除术,术中保留癌组织及癌旁组织。采用免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织HDAC7、USP10,采用Spearman相关性分析法分析NSCLC癌组织中HDAC7与USP10表达的相关性,分析HDAC7、USP10表达与NSCLC患者临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析HDAC7、USP10表达与NSCLC患者预后的关系,采用COX多因素比例风险模型分析NSCLC患者预后的影响因素。结果NSCLC组织、癌旁组织中HDAC7阳性率分别为65.31%(64/98)、6.12%(6/98)(χ^(2)=74.756,P<0.05);NSCLC组织、癌旁组织中USP10阳性率分别为63.27%(62/98)、8.16%(8/98)(χ^(2)=64.800,P<0.05)。肿瘤低分化程度、有淋巴结转移及TNM分期Ⅲ期NSCLC癌组织HDAC7,USP10表达阳性率高于高中分化程度、无淋巴结转移及TNM分期Ⅰ~Ⅱ期(P均<0.05)。NSCLC组织中HDAC7、USP10的表达呈正相关(r=0.714,P<0.05)。与表达阴性者比较,HDAC7、USP10表达阳性的患者3年累积生存率低(χ^(2)=16.300、15.870,P均<0.05)。HDAC7表达阳性、USP10表达阳性、肿瘤低分化程度、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ期是NSCLC患者预后的独立危险因素。结论NSCLC癌组织中HDAC7、USP10高表达,HDAC7、USP10可能协同促进NSCLC的发生发展,HDAC7、USP10高表达NSCLC患者的预后较差。

老年非小细胞肺癌患者EGFR、CyclinD1、CGA、CK7与临床病理特征及预后的关系

目的探讨老年非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体(EGFR)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、嗜铬粒蛋白(CG)A、细胞角蛋白(CK)7与临床病理特征及预后的关系。方法选取老年非小细胞肺癌患者95例,收集手术切除的肿瘤组织和癌旁正常组织标本,免疫组化检测EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性表达率。收集患者人口学特征(性别、年龄、吸烟史),临床病理指标(组织学类型、TNM分期、淋巴结转移情况、分化程度、被膜侵犯情况、肿瘤直径)。出院后采取定期来院复查、不适随访的方式进行3年随访,通过影像学结合病理检查进行诊断,将肿瘤手术切除的残端发生病变纳入复发组,其余纳入未复发组。结果肺癌组织EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.01)。EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性表达率在不同组织学类型、TNM分期、淋巴结转移、分化程度、被膜侵犯情况患者间比较差异有统计学意义(P<0.01)。95例老年非小细胞肺癌患者随访期间病情复发57例(60.00%)。复发组EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性率明显高于未复发组(P<0.01)。两组被膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期、分化程度、肿瘤直径比较差异有统计学意义(P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示,淋巴结转移、TNM分期、分化程度、EGFR、CyclinD1、CGA、CK7是患者预后的独立影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性率对患者预后均具有较高的评估价值,其中各指标联合检测对患者预后的评估价值最高。结论老年非小细胞肺癌患者EGFR、CyclinD1、CGA、CK7高表达,且与病理特征和预后相关,联合检测可用于患者预后评估。

肾组织血小板反应蛋白1型结构7A域及神经表皮生长因子样蛋白-1 检测在M型磷脂酶A2受体阴性膜性肾病中的临床意义

目的探讨肾组织血小板反应蛋白1型结构7A域(THSD7A)及神经表皮生长因子样蛋白-1(NELL1)检测在M型磷脂酶A2受体(PLA2R)阴性膜性肾病中的诊断及治疗指导意义。方法选取浙江中医药大学附属杭州市中医院2014至2021年肾穿刺活检确诊为PLA2R阴性膜性肾病共116例,通过免疫组织化学方法检测肾组织THSD7A及NELL1的阳性表达情况,比较各组间临床病理特征及治疗与预后。结果116例PLA2R阴性膜性肾病中THSD7A阳性23例,NELL1阳性9例,其中两者双阳性1例。THSD7A阳性较阴性者IgG4阳性率更高(P=0.010);膜性肾病Ⅰ期占比更少,Ⅱ期占比更多(P=0.002);基底膜增厚更明显(P=0.034)。NELL1阳性较阴性者C1q及IgG2的阳性率更低(P=0.029,P=0.001);炎细胞浸润更多(P=0.033);多部位沉积物更少(P=0.001);基底膜增厚更不明显(P<0.001);不典型膜性肾病比例更低(P=0.010)。继发因素分析显示THSD7A阳性者有1例确诊为乙状结肠癌,NELL1阳性者均未发现恶性肿瘤。生存分析提示THSD7A阳性组肾病复合缓解率(完全缓解或部分缓解)显著低于阴性组(P=0.016),而NELL1阳性组肾病复合缓解率显著优于阴性组(P=0.015),两指标单一阳性组间比较显示NELL1单一阳性组肾病复合缓解率显著优于THSD7A单一阳性组(P<0.001)。结论THSD7A及NELL1阳性膜性肾病更倾向于原发性膜性肾病,且无恶性肿瘤提示价值,但对膜性肾病患者的预后具有一定的预测价值。

致密砂岩储层孔隙结构特征对可动流体赋存的影响:以鄂尔多斯盆地庆城地区长7段为例

分析孔隙结构和可动流体分布特征是储层研究的关键要素,也是当前研究的重点与热点,对致密砂岩油气勘探及提高油气采收率具有重要意义。以鄂尔多斯盆地庆城地区长7段致密砂岩储层为例,通过物性测试、铸体薄片、扫描电镜、高压压汞和核磁共振实验,结合分形理论,分析了致密砂岩储层孔隙结构、非均质性和可动流体分布特征,讨论了孔喉结构和非均质性对可动流体赋存的影响。结果表明:研究区长7段储层储集空间主要由微纳米级孔隙贡献,孔隙连通性较差,孔喉半径主要分布在0.050~0.500μm;孔喉结构非均质性较强,分形维数分布在2.65~2.90;流体可动性较差,可动流体饱和度分布在16.68%~51.74%,可动流体多分布在中孔和小孔内。研究区长7段储层可分为3类:从Ⅰ类到Ⅲ类储层,剩余粒间孔和粒间溶蚀孔发育变少,孔隙连通性变差,孔喉尺寸变小,较大孔喉变少,非均质性变强,流体可动性变差,中孔和大孔内可动流体含量趋于降低,可动流体倾向于在小孔内赋存。研究成果为致密砂岩油气勘探及油气采收率提高提供了理论依据。

盖塔病毒非结构蛋白NSP1多克隆抗体的制备及鉴定

试验旨在获得能够特异性识别盖塔病毒(Getah virus, GETV)非结构蛋白NSP1的抗体,用于鉴定NSP1蛋白及其分布。采用RT-PCR技术扩增GETV的非结构蛋白NSP1基因,构建了NSP1蛋白的原核表达质粒pET-NSP1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)诱导大量表达。纯化原核表达的目的蛋白,免疫BALB/c小鼠,制备了NSP1蛋白的多克隆抗体,间接ELISA效价达1∶10^(5)以上。Western blot和免疫荧光试验(IFA)结果显示,NSP1蛋白多克隆抗体与GETV有良好的反应性。NSP1蛋白多克隆抗体的制备,为进一步研究该蛋白在盖塔病毒复制周期中的功能奠定了基础。

口腔鳞状细胞癌组织TRIM14和HOXB7蛋白表达与患者临床病理特征及预后的关系

目的 探讨三结构域蛋白14(TRIM14)、同源异型盒基因B7(HOXB7)蛋白在口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者癌组织中的表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。方法 收集2016年1月至2018年1月行手术治疗的OSCC患者148例的癌组织与癌旁正常组织,免疫组化法分析组织中TRIM14、HOXB7表达情况;Kaplan-Meier生存曲线分析OSCC患者癌组织TRIM14、HOXB7表达水平与生存率之间的关系;COX回归分析OSCC患者预后不良的影响因素。结果 OSCC癌组织TRIM14、HOXB7高表达率均高于癌旁正常组织(P<0.05)。OSCC癌组织TRIM14、HOXB7表达与肿瘤T分期、M分期、淋巴结转移、周围组织浸润、分化程度相关(P<0.05)。OSCC患者5年生存率为49.32%(73/148),Kaplan-Meier生存曲线表明TRIM14、HOXB7高表达患者生存率低于TRIM14、HOXB7低表达患者(χ^(2)=14.480、24.841,P<0.001)。多因素COX分析结果显示,T3-T4分期、M1分期、淋巴结转移、周围组织浸润、癌组织TRIM14、HOXB7高表达均是OSCC患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论 OSCC患者癌组织TRIM14与HOXB7蛋白表达水平均上调,其表达与患者临床病理特征和5年生存预后明显相关。

猪流行性腹泻病毒Nsp7基因真核表达载体的构建及表达

PEDV Nsp7蛋白是猪流行性腹泻病毒的一种非结构蛋白,它在病毒复制过程中表达,并与感染细胞的内质网和细胞膜相关,是病毒基因组翻译的两个大型复制酶的关键辅助因子。为了对PEDV Nsp7蛋白进行更加深入的研究,试验从病变猪小肠中提取总RNA,并通过RT-PCR扩增获取PEDVNsp7基因,最终将其连接到pCMV-Myc载体上。试验结果显示,成功构建了pCMV-Myc-Nsp7的重组质粒,并通过Western Blot技术和免疫荧光技术在真核细胞中验证了其蛋白表达情况,为后续研究PEDV Nsp7的生物学功能奠定了良好的基础。

复方斑蝥胶囊联合紫杉醇、卡铂治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察及对血清NRP-1、B7-H3水平的影响

目的:观察复方斑蝥胶囊联合紫杉醇、卡铂治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效及对血清神经纤毛蛋白1 (NRP-1)、B7-H3水平的影响。方法:选取80例晚期非小细胞肺癌患者,按照随机数字表法分为对照组和研究组各40例。对照组给予紫杉醇加卡铂化疗方案,研究组在对照组基础上加用复方斑蝥胶囊治疗。比较2组临床疗效,简易智能精神状态检查量表(MMSE)、日常生活能力量表(ADL)评分,CD3^(+)、CD4^(+)和自然杀伤(NK)细胞以及血清NRP-1、B7-H3水平。结果:研究组总有效率为75.00%,对照组为40.00%,2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组MMSE、ADL评分均较治疗前升高(P<0.05),且研究组2项评分均高于对照组(P<0.05)。治疗后,2组CD4^(+)、NK细胞水平均较治疗前升高(P<0.05),CD8^(+)水平较治疗前降低(P<0.05);且研究组CD4^(+)、NK细胞水平高于对照组(P<0.05),CD8^(+)水平低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组血清NRP-1、B7-H3水平均较治疗前降低(P<0.05),且研究组2项水平均低于对照组(P<0.05)。结论:复方斑蝥胶囊联合紫杉醇加卡铂化疗治疗晚期非小细胞肺癌疗效显著,可有效改善患者免疫功能,下调血清NRP-1、B7-H3水平,提高患者认知功能与生活能力。

IFITM3、BTBD7、PEA3在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:分析干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)、结构域蛋白7(BTBD7)、多瘤病毒增强子激活剂3(PEA3)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及相关性研究。方法:选取2021年2月~2022年2月江门市人民医院进行肺癌手术治疗的80例患者为研究对象,在进行手术过程中,切取其肺癌患者癌组织,为本研究组织标本,同时切取相应的癌旁组织,进行数据的比较。使用免疫组化法检测IFITM3、BTBD7、PEA3表达。观察IFITM3、BTBD7、PEA3在非小细胞肺癌中的表达及相关性。结果:与癌旁组织比较,癌组织IFITM3、BTBD7、PEA3阳性表达率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组织IFITM3、BTBD7、PEA3表达与患者年龄、性别、肿瘤直径、吸烟史、组织学分型比较差异均无统计学意义(P>0.05)。NSCLC组织中于IFITM3、BTBD7、PEA3表达于TNM分期、分化程度、胸膜转移、淋巴结转移,差异均有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组织IFITM3、BTBD7之间表达呈正相关(r=0.518,P=0.001);NSCLC组织BTBD7、PEA3表达呈正相关(r=0.604,P=0.001);NSCLC组织IFITM3、PEA3表达呈正相关(r=519,P=0.001)。结论:NSCLC IFITM3、BTBD7、PEA3表达呈上调状态,三者之间具有密切相关性,与其表达的高低变化与TNM分期、分化程度、胸膜转移、淋巴结转移等临床病理症状之间具有相关性,由此表明,IFITM3、BTBD7、PEA3可能参与NSCLC的发展过程。

非小细胞肺癌组织SOCS2、SLC7A11表达变化及其与三维适形放疗效果的关系

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织细胞因子信号转导抑制因子2(SOCS2)、胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)的表达变化,并探讨其与患者临床特征及三维适形放疗效果的关系。方法选取拟行三维适形放疗的NSCLC患者90例(留取穿刺活检获取的部分癌组织),同期因肺错构瘤行手术治疗的患者40例(留取术中获取的正常肺组织)。采用免疫组化法检测NSCLC组织及正常肺组织SOCS2、SLC7A11阳性表达情况,并分析NSCLC组织中两者的相关性,比较不同临床特征的NSCLC患者癌组织SOCS2、SLC7A11阳性表达率。评价NSCLC患者三维适形放疗的疗效,多因素Logistic回归分析癌组织SOCS2、SLC7A11表达对疗效的影响。结果NSCLC组织SOCS2阳性表达率为24.44%、SLC7A11阳性表达率为77.78%,正常肺组织分别为95.00%、10.00%,两组比较P均<0.05。NSCLC组织SOCS2、SLC7A11阳性表达率呈负相关关系(r=-0.669,P<0.05)。TNM分期ⅢA期、高中分化、无淋巴结转移的NSCLC患者癌组织SOCS2阳性表达率分别高于TNM分期ⅢB期、低分化、淋巴结转移者,而SLC7A11阳性表达率分别低于TNM分期ⅢB期、低分化、淋巴结转移者(P均<0.05)。90例NSCLC患者三维适形放疗有效60例、无效30例。三维适形放疗有效的NSCLC患者癌组织SOCS2、SLC7A11阳性表达率分别为31.67%、70.00%,无效者分别为10.00%、93.33%,两者比较P均<0.05。癌组织SLC7A11阳性是影响NSCLC患者三维适形放疗疗效的独立危险因素、癌组织SOCS2阳性是其独立保护因素(P均<0.05)。结论NSCLC组织SOCS2表达降低而SLC7A11表达升高,两者共同参与了NSCLC的发生发展并且可以影响患者的三维适形放疗疗效。

SARS-CoV-2非结构蛋白Nsp2上调A549细胞泛素水平并被泛素化修饰研究

目的 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)因其强大的感染力肆虐全球,因此深入研究病毒与宿主的相互作用是揭示SARS-CoV-2致病机制的重要途经。方法 利用同源重组方法 将SRAS-CoV-2的非结构蛋白Nsp1~Nsp16构建到真核表达载体上,并通过Western blot检测Nsp1~Nsp16重组质粒的蛋白表达情况。接着使用Western blot检测Nsp2对细胞总泛素水平的影响,并通过细胞免疫荧光检测Nsp2在细胞中的分布情况。最后通过免疫共沉淀技术对Nsp2与泛素之间的相互作用关系进行检测。结果 Western blot检测显示Nsp1~Nsp16重组质粒能够在A549细胞中正常表达;筛选发现非结构蛋白Nsp2能在细胞质中上调细胞总泛素表达水平;免疫共沉淀检测进一步发现Nsp2能与泛素蛋白发生相互作用。结论 成功构建了SARS-CoV-2非结构蛋白Nsp1~Nsp16真核细胞表达载体,并发现非结构蛋白Nsp2可以增加细胞总泛素表达水平并被泛素化修饰。提示Nsp2通过泛素途径参与到SARS-CoV-2与宿主的相互作用,有助于深入了解病毒与宿主的作用机制。

轮状病毒重组非结构蛋白NSP486-175蛋白的表达及其致泻能力的研究

目的:构建轮状病毒重组NSP486-175表达蛋白,对其致泻能力进行初步评价。方法:从轮状病毒SA11病毒株中提取RNA,逆转录为cDNA,利用PCR技术扩增目的基因并制备E.coliDH5α感受态细胞,酶切pMD19T-NSP4,pMD19T-NSP486-175质粒和pET28a(+)质粒构建轮状病毒重组NSP486-175表达质粒,诱导其表达NSP486-175蛋白,经Glutathione SepharoseTM 4B纯化并鉴定。取新生6天乳鼠40只,随机分为四组,每组各10只。第1组腹腔注射0.5nmol重组蛋白,第2组腹腔注射1.0nmol重组蛋白,第3组腹腔注射1.5nmol重组蛋白,第4组腹腔注射生理盐水作为对照组。观察其对小鼠的腹泻和生长发育的影响。结果:第1组的腹泻率为20%,第2组的腹泻率为30%,第3组的腹泻率为70%,第4组的腹泻率为10%,四组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中第3组的腹泻率最高。在体重增长情况方面,在第96小时时,第1组平均增加体重(2.11±0.04)g,第2组平均增加体重(2.06±0.11)g,第3组平均增加体重(1.95±0.15)g,第4组平均增加体重(2.60±1.06)g,四组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:本实验成功重组、表达并纯化出轮状病毒重组非结构蛋白NSP486-175蛋白,证实了其可以引起小鼠腹泻并影响其生长发育。

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP7的克隆

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学技术筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)反式激活新型靶基因. 方法:以HCV NS5A表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5A转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,提取mRNA并进行SSH分析.对于所获基因片段序列分析表明, 其中之一为新型基因片段,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源陛,利用表达序列标签(EST)序列的搜索和比对,进行电子拼接,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新型基因序列.从HepG2细胞提取总RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实,命名为NS5ATP7,在GenBank中注册,注册号为AF529368. 结果:NS5ATP5基因的编码序列全长为894个核苷酸(nt), 编码产物由297个氨基酸残基(aa)组成. 结论:HCV NS5A反式激活新型靶基因NS5ATP5的筛选与克隆,为进一步研究HCV NS5A反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定了基础.

牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白p7 的克隆和原核表达纯化

为了对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)p7蛋白进行表达和纯化,本研究开展p7基因克隆、原核表达载体构建和原核表达分析。依据GenBank数据库中BVDV毒株NADL的p7基因设计引物,以BVDV NADL的cDNA为模版,PCR扩增p7基因,测序鉴定后将其克隆至pCold-MBP原核表达载体中;优化蛋白诱导的IPTG浓度,过夜低温诱导p7蛋白表达,并使用Ni-TED琼脂糖树脂进行蛋白纯化。结果显示,成功克隆p7基因,与GenBank数据库中p7基因同源性100%;成功构建pCold-MBP-p7载体;IPTG浓度为1.2mM时诱导效果最佳;成功表达和纯化MBP-p7融合蛋白。结论:诱导表达纯化获得MBP-p7融合蛋白,为后续构建p7蛋白的多克隆和单克隆抗体提供重要的材料和平台。

EGFR突变NSCLC组织LncRNA TCF7L2表达及临床病理特征和预后分析

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)转录因子7类似物2(TCF7L2)在表皮生长因子受体基因(EGFR)突变的非小细胞肺癌(NSCLC)组织表达及其与病人临床病理特征和预后相关性。方法 选取2019年3月—2021年6月河北北方学院附属第一医院治疗的EGFR突变NSCLC病人104例为研究对象,分别取其癌组织和癌旁组织应用逆转录PCR(RT-PCR)检测LncRNA TCF7L2的表达,比较不同组织TCF7L2表达及其与临床病理特征和预后的相关性。结果 RT-PCR检测结果显示,癌组织中LncRNA TCF7L2表达量显著高于癌旁组织(t=12.410,P<0.05)。与LncRNA TCF7L2低表达病人比较,高表达者发生淋巴结转移更多、肿瘤体积更大(χ^(2)=4.579、7.762,P<0.05);LncRNA TCF7L2高表达病人6、9和12个月的生存率较低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 LncRNA TCF7L2在EGFR突变NSCLC病人癌组织表达高于癌旁组织,且TCF7L2高表达病人的淋巴结转移风险较高、肿瘤体积较大,其生存率可能较低。

H7N9亚型禽流感病毒非结构蛋白1(NS1)基因序列分析及2013上海分离株NS1的原核表达

目的：对2013年3月发生的感染人的新型H7N9亚型禽流感病毒的非结构蛋白1（NS1）基因序列进行同源性分析,构建NS1重组质粒并表达。方法：从GenBank获得2006-2013年不同来源的H7N9亚型病毒NS1序列,并进行同源性比较;利用PCR方法从H7N9亚型禽流感病毒株A/Shanghai/4664T/2013（H7N9）基因组cDNA中扩增得到全长NS1基因,并将该片段定向克隆到原核表达载体pET28a上,构建重组质粒pET28a-NS1,经酶切鉴定,将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞后,IPTG诱导表达,且进行Western印迹分析。结果：经序列分析,2013年暴发的H7N9型禽流感病毒的NS1基因核苷酸序列同源性为95%-100%,与之前暴发的H7N9型流感病毒NS1基因序列的同源性为86.4%-90.7%,表明2次暴发的该型流感分离株属于不同的进化分支;PCR扩增得到约680 bp的NS1基因序列,所克隆的NS1基因在原核细胞中的表达产物主要以包涵体形式存在,SDS-PAGE检测结果表明重组蛋白相对分子质量为25×103,Western印迹分析证实表达产物为H7N9禽流感病毒NS1蛋白。结论：为进一步研究H7N9亚型流感病毒NS1蛋白功能及基于NS1蛋白的抗病毒药物奠定了基础。

可溶性B7-H4蛋白、溴结构域蛋白4、S100钙结合蛋白A4在非小细胞肺癌中的表达及与患者预后的关系

目的探讨可溶性B7-H4蛋白(sB7-H4)、溴结构域蛋白4(BRD4)、S100钙结合蛋白A4(S100A4)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及与患者预后的关系。方法取98例NSCLC患者的肿瘤组织和50例肺良性病变患者的正常肺组织,免疫组化法检测sB7-H4、BRD4及S100A4蛋白的表达情况。随访2年,记录两组患者的预后情况,NSCLC患者预后的影响因素采用多因素Logistic回归分析;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估sB7-H4、BRD4、S100A4单独及联合检测对NSCLC患者预后的预测价值。结果肿瘤组织中sB7-H4、BRD4及S100A4蛋白高表达率均明显高于正常肺组织(P﹤0.01)。随访2年,98例NSCLC患者生存73例,死亡25例。死亡NSCLC患者肿瘤组织中sB7-H4、BRD4及S100A4蛋白高表达率均高于生存患者(P﹤0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,有远处转移、分化程度为低中分化、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、sB7-H4蛋白高表达、BRD4蛋白高表达、S100A4蛋白高表达均是NSCLC患者预后生存的独立危险因素(P﹤0.01)。ROC曲线显示,sB7-H4+BRD4+S100A4联合检测预测NSCLC患者死亡的AUC为0.890(95%CI:0.751~1.000),高于三者单独检测的0.809、0.850、0.764。结论sB7-H4、BRD4及S100A4蛋白在NSCLC患者中高表达,且高表达是影响NSCLC患者预后生存的独立危险因素,三指标联合检测对患者的预后评估有重要价值。