非肌肉肌球蛋白ⅡA型在肿瘤转移中的研究进展

目的对现有的非肌肉肌球蛋白ⅡA型(NMIIA)对肿瘤转移中的作用现状进行综述,为NMIIA在肿瘤转移中的相关研究提供理论基础。方法检索相关文献,深入总结NMIIA在肿瘤细胞中转移的专用机制。结果NMIIA是一种细胞膜骨架的重要组成蛋白,又可与肌动蛋白共同作用使细胞发生运动。近年来研究发现,NMIIA的表达与多种癌症的恶性程度密切相关,在肿瘤转移中发挥作用,其中NMIIA可受ROCK、NudCL2、TFPI-2和S100A4等上游蛋白调控,进而影响AKT/mTOR、F-actin等蛋白功能,同时NMIIA也可以调节线粒体分裂,参与EMT进程促进肿瘤转移。结论基于已有的文献总结,我们发现NMIIA在肿瘤转移中起重要作用并且作用机制复杂,NMIIA是解决肿瘤转移的重要研究方向之一。

非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端蛋白的真核表达及在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞中的作用

前期研究结果证明抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的抗独特型抗体特异性结合Marc-145细胞上的非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(Nonmuscle myosin heavy chainⅡ-A,NMHCⅡ-A)蛋白,其结合位点位于NMHCⅡ-A的羧基端。本研究通过真核表达NMHCⅡ-A的羧基端(PRA)蛋白,验证其对PRRSV感染Marc-145细胞的作用。通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达PRA蛋白。Western blot和间接免疫荧光鉴定PRA蛋白的表达及其与Marc-145细胞的结合。通过病毒中和试验、荧光聚焦中和试验和荧光定量PCR检测PRA蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的作用。Western blot和间接免疫荧光结果表明,PRA蛋白在真核细胞中得到成功表达,其最高表达量为接种1个MOI杆状病毒后96h时。PRA蛋白特异性结合Marc-145细胞,使PRRSV感染Marc-145细胞延迟24h并且感染效率降低60%。真核表达的NMHCⅡ-A羧基端蛋白能特异性结合Marc-145细胞并有效降低PRRSV的感染。这些结果为进一步阐明NMHCⅡ-A在PRRSV感染细胞过程中的作用提供了新的依据。

非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A单克隆抗体的制备及其靶位点区域的鉴定

为制备非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHC-II A)的单克隆抗体(MAb),本研究将编码NMHC-Ⅱ A羧基端1 651～1 960氨基酸的表达重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞Rosseta中诱导表达,重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,分离小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG 4000介导融合。ELISA方法检测筛选阳性杂交瘤细胞,制备腹水并纯化MAb,以间接免疫荧光和免疫沉淀方法鉴定MAb的特异性,western blot检测MAb靶位点区域。结果表明,通过筛选得到1株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系,其抗体亚型为IgG1,细胞培养上清和腹水效价分别为1∶2 560和1∶1.0×106;该MAb能够特异性结合相应抗原,并结合Marc-145细胞;western blot结果显示该抗体与NMHC-Ⅱ A的1 812～1 894氨基酸位点结合。该抗体的制备为研究NMHC-Ⅱ A在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中的作用奠定了基础。

慢病毒载体介导的shRNA沉默非肌肉肌球蛋白重链ⅡA对骨髓间充质干细胞旁分泌的影响

目的观察慢病毒介导shRNA沉默非肌肉球蛋白重链ⅡA(MYH9)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)旁分泌功能的影响。方法采用脂质体法将含MYH9干扰序列的pHBLV-U6-ZsGreen-Puro(实验组)质粒转染到293T细胞,以转染pHBLV-U6-ZsGreen-Puro空载质粒的细胞为空载组,以正常未转染细胞为对照组,包装产生的病毒液感染BMSCs。用荧光显微镜观察荧光蛋白表达;以β-actin为内参,分别用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫印迹(Western blot)检测MYH9 mRNA及蛋白表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测其培养基上清液中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、促血管生成素1(ANG-1)和促血管生成素2(ANG-2)的含量。结果成功构建重组质粒pHBLV-U6-MYH9-ZsGreen-Puro,转染293 T细胞产生高滴度慢病毒,荧光显微镜下可见被慢病毒感染的rBMSCs表达强绿色荧光蛋白,qRT-PCR和Western blot结果显示2条慢病毒感染MYH9 mRNA表达水平明显下调,显著低于对照组和空载组(P<0.05);沉默MYH9基因后,实验组的ANG-1和bFGF在增殖末期较对照组和空载组有明显上升(P<0.05),ANG-2和VEGF未见明显差异(P>0.05)。结论 pHBLV-U6-MYH9-ZsGreen-Puro慢病毒包装质粒转染BMSCs后,BMSCs旁分泌能力未受明显影响。

非肌肉肌球蛋白Ⅱ(NMⅡ)的研究进展

非肌肉肌球蛋白Ⅱ(non-muscle myosinⅡ,NMⅡ)的功能贯穿从单个细胞到人的整个基础生物功能,比如有丝分裂、细胞迁移、胞质分裂、囊泡转移修复和分泌等。它的表达与细胞的各项功能息息相关,因此具有重大研究意义。本文就此相关研究作一综述。

慢病毒载体介导的shRNA沉默非肌肉肌球蛋白重链ⅡA(MYH9)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)旁分泌的影响

目的 观察慢病毒介导shRNA沉默MYH9是否影响BMSCs的旁分泌功能.方法 将MYH9干扰序列经双酶切后与 pHBLV-U6-ZsGreen-Puro真核载体连接,在脂质体介导下将重组质粒转染293T细胞,包装产生的病毒液感染BMSCs.用荧光显微镜观察荧光蛋白表达;分别用实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测MYH9 mRNA及蛋白表达;elisa检测其培养基上清液中VEGF、bFGF、ANG-1和ANG-2的含量.结果 成功构建重组质粒pHBLV-U6-MYH9-ZsGreen-Puro,转染293 T细胞产生高滴度慢病毒,荧光显微镜下可见被慢病毒感染的rBMSCs表达强绿色荧光蛋白,qRT-PCR和western blotting结果显示两条慢病毒感染组MYH9mRNA表达水平明显下调,显著低于对照组和空载组 (P<0.05);沉默MYH9基因后,实验组的ANG-1和bFGF在增殖末期较对照组和空载组有明显上升(P<0.05),ANG-2和VEGF未见明显差异(P>0.05).结论 pHBLV-U6-MYH9-ZsGreen-Puro 慢病毒包装质粒转染BMSCs后,BMSCs旁分泌能力未受明显影响.

RNA干扰技术抑制人内皮细胞非肌肉肌球蛋白重链ⅡA(MYH9)表达的研究

目的:构建人MYH9(非肌肉肌球蛋白重链ⅡA)的siRNA表达体系,抑制原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)MYH9基因的表达。方法:针对人MYH9基因序列,构建siRNA表达质粒,通过酶切和测序鉴定确定其序列正确性。分别转染重组质粒pGCsi-MYH9-1/2/3至HUVEC细胞,通过半定量RT-PCR和蛋白质印迹,分别检测在转染后24h、48h、72h MYH9在mRNA转录水平及蛋白表达的变化。结果:在构建的3种重组质粒中,pGCsi-MYH9-2、pGCsi-MYH9-3在转染后24h均表现出一定的干扰作用,转染后48h干扰作用最强,转染后72h干扰作用减弱;pGCsi-MYH9-3的干扰作用最明显,转染后48h,能明显下调HUVEC的MYH9蛋白表达,抑制率平均可达71.2%,此时MYH9基因mRNA转录明显减少,抑制率为86.5%。结论:在转染后48h pGCsi-MYH9-3可明显抑制HUVEC细胞内源MYH9的表达,为进一步研究MYH9在相关疾病中的功能奠定基础。

非肌肉肌球蛋白Ⅱ研究进展

非肌肉细胞中存在的肌球蛋白Ⅱ称为非肌肉肌球蛋白Ⅱ(non-muscle myosinⅡ,NMⅡ),与肌肉中肌球蛋白Ⅱ具有类似的化学结构,其活性受自身轻链和重链磷酸化水平调节。除了作为一种分子马达为细胞内各种分子运动提供动力外,NMⅡ还参与细胞迁移、黏附、胞质分裂等各种生理活动。

药物抑制非肌肉肌球蛋白Ⅱ对小鼠囊胚发育的影响

目的探讨非肌肉肌球蛋白Ⅱ(non-muscle myosinⅡ,NMⅡ)ATP酶抑制剂(-)-Blebbistatin对小鼠早期胚胎体外发育过程及其干性相关基因表达的影响。方法采用SPF级ICR品系小鼠,对10只雌鼠采用孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素进行诱导超数排卵,雌鼠与雄鼠1︰1合笼。分别于E 0.5、E 1.5、E 2.5(受孕0.5、1.5、2.5天)收集胚胎。桑椹胚随机分为对照组和实验组,对照组液滴为20μl Ksom培养基,实验组液滴为加入25μM(-)-Blebbistatin的20μl Ksom培养基,体外培养24小时。进行免疫荧光标记,观察小鼠胚胎中微丝骨架的分布情况,以及桑椹胚中nanog、Oct4、sox2、ssea1和estrogen等5个干性相关基因的表达情况。结果小鼠早期胚胎的发育经历细胞分裂后裂球数目增加、桑椹胚致密化、囊胚期囊胚腔的扩张过程。(-)-Blebbistatin组胚胎则无法形成囊胚腔进入囊胚时期,大多数胚胎裂球松散,整体呈扁塌状。实验共重复3次,实验组胚胎共62枚,均未能形成囊胚;对照组胚胎共60枚,全部形成囊胚。(-)-Blebbistatin抑制NMⅡ后小鼠胚胎干性相关基因nanog,Oct4,sox2,ssea1,estrogen的表达均明显低于对照组(P值均﹤0.05)。结论抑制NMⅡATP酶活性会阻滞小鼠囊胚的体外发育,并降低干性相关基因的表达。

多物种中非肌肉肌球蛋白ⅡA相关功能的研究进展

非肌肉肌球蛋白ⅡA(non-muscle myosin ⅡA, NM ⅡA)由非肌肉肌球蛋白重链9(Non-muscle myosin heavy chain 9,MYH9)基因编码,是非肌肉肌球蛋白Ⅱ的家族成员,在多种细胞中表达,参与调控细胞收缩、细胞迁移和细胞形状维持等细胞生理过程。NM ⅡA对脑、肾、血管等发育至关重要,其基因突变导致MYH9相关疾病(MYH9-related disease,MYH9-RD)。此外,近年来有研究表明NM ⅡA还参与其他生理和病理过程的调节,如血管新生和肿瘤进展等。本文将对人、小鼠和斑马鱼中NM ⅡA相关功能的研究进展进行综述。

非肌性肌球蛋白重链9基因相关疾病的研究进展

非肌性肌球蛋白重链9基因相关疾病(MYH9-RD)是一组罕见的人类常染色体显性遗传的巨大血小板减少症,其发病机制、基因型与表型之间的相互关系等目前还不甚明确,本文作者对近年来MYH9相关疾病方面的研究做一综述。

非肌性肌球蛋白重链9基因相关疾病的研究进展

非肌性肌球蛋白重链9(MYH9)基因相关疾病是由MYH9基因突变所引起的一组罕见的常染色体显性遗传性疾病,临床表现以巨大血小板、血小板减少和中性粒细胞包涵体为主,部分患者还可出现感音神经性耳聋、先天性白内障或间质性肾炎等症状。近年来国内外关于MYH9基因相关疾病的报道较多,但其发病机制、基因型与表型之间的关系等尚未明确。本文就MYH9基因相关疾病的研究进展进行综述。

非变性Ⅱ型胶原蛋白对老年db/db小鼠运动机能的改善作用

目的:探讨非变性Ⅱ型胶原蛋白(UCⅡ)对增龄导致的db/db小鼠运动机能下降的改善作用。方法:将正常喂养至老年的db/db小鼠随机分为模型对照组、UCⅡ干预组、阳性对照组,以同周龄的db/m小鼠为正常对照组,喂养至25周的db/db小鼠作为青年对照组,干预12周后评估其爬网时间和步态特征,继续干预4周后评价其骨形态计量学特征,计算腓肠肌指数。结果:UCⅡ干预组腓肠肌指数明显大于模型对照组(P<0.05)。骨密度最大为UCⅡ干预组(439.11 mg/cm^(3)),与同年龄组之间存在统计学差异(P<0.05)。相比于模型和青年对照组,UCⅡ干预组骨小梁相对体积和数量显著增加(P<0.05)。UCⅡ干预显著提升db/db老年小鼠的爬网能力(P<0.05)。相比于模型对照组,UCⅡ干预组小鼠步幅、摆动速度、步速、步调和步序比增加,摆动时长、支撑相时长降低,并且小鼠腓肠肌指数与支撑相时长、爬网时间呈正相关(P<0.05,系数>0.5),小鼠骨密度与爬网时间、支撑相时长、摆动速度呈现一定正相关(系数>0.5),表明UCⅡ可以改善db/db小鼠由于增龄带来的腓肠肌质量、骨密度的下降,提高其运动能力。

肌球蛋白轻链在肺动脉高压内皮祖细胞衰老中的作用机制

目的探讨非肌肉型肌球蛋白调节轻链（nmMLC20）在肺动脉高压内皮祖细胞（EPCs）衰老中的作用及机制.方法建立低氧诱导的肺动脉高压动物模型和体外EPC衰老模型,采用法舒地尔或基因沉默等进行干预.测定大鼠右心室收缩压（RVSP）,右心重构指数,肺血管重构,外周血EPCs衰老率,EPCs中NOX2mRNA和蛋白表达和p-nmMLC20水平等指标.结果肺动脉高压大鼠外周血来源EPCs衰老率明显增加伴随NOX2表达和p-nmMLC20水平升高.上述现象能被法舒地尔逆转;低氧处理后,EPCs衰老率增加伴随NOX2表达和p-nmMLC20水平升高,上述现象可被法舒地尔或MLC20 siRNA逆转.结论肺动脉高压时,nmMLC20以磷酸化形式促进NOX2表达,提高活性氧水平,进而加速了EPCs衰老.

沉默非肌肉肌球蛋白ⅡA的骨髓间充质干细胞对烟雾吸入性损伤大鼠早期肺损伤的影响

目的探讨沉默非肌肉肌球蛋白ⅡA（NMⅡA）的骨髓间充质干细胞（BMSC）对烟雾吸入性损伤大鼠早期肺损伤的影响。方法将40只SD大鼠按照完全随机法分为对照组10只、单纯损伤组10只、BMSC组10只和NMⅡA－BMSC组10只。对照组大鼠正常吸入空气，其余3组大鼠吸入烟雾制备烟雾吸入性损伤模型。伤后30 min，单纯损伤组大鼠尾静脉注射1 mL生理盐水，BMSC组大鼠注射1 mL 1×107个/mL的第5代BMSC，NMⅡA－BMSC组大鼠注射1 mL 1×107个/mL沉默NMⅡA的BMSC。伤后24 h，取各组大鼠腹主动脉血和右肺，血气分析仪检测PaO2、PaCO2和pH值，干湿质量法测定肺湿干质量比，HE染色观察肺病理变化；收集肺泡灌洗液（BALF），ELISA法检测TNF－α、IL－10含量。对数据行单因素方差分析、Kruskal－Wallis H检验、LSD检验。结果（1）伤后24 h，与对照组比较，单纯损伤组、BMSC组、NMⅡA－BMSC组大鼠PaO2明显降低（P值均小于0.05），PaCO2明显升高（P值均小于0.05）。与单纯损伤组比较，BMSC组、NMⅡA－BMSC组大鼠PaO2明显升高（P值均小于0.05），PaCO2明显降低（P值均小于0.05）。与BMSC组比较，NMⅡA－BMSC组大鼠PaO2明显升高（P〈0.05）。单纯损伤组大鼠动脉血pH值较对照组明显降低（P〈0.05）。（2）伤后24 h，对照组、单纯损伤组、BMSC组和NMⅡA－BMSC组大鼠肺湿干质量比分别为4.36±0.15、7.79±0.42、5.77±0.18、5.11±0.20。与对照组比较，其余3组大鼠肺湿干质量比明显升高（P值均小于0.05）。与单纯损伤组比较，BMSC组、NMⅡA－BMSC组大鼠肺湿干质量比明显降低（P值均小于0.05）。与BMSC组比较，NMⅡA－BMSC组大鼠肺湿干质量比明显降低（P〈0.05）。（3）伤后24 h，对照组大鼠肺泡结构完整，无异常。与单纯损伤组比较，BMSC组及NMⅡA－BMSC组大鼠肺损伤明显减轻，肺泡结构相对完整，肺泡壁未增厚，炎性细胞浸润明显减轻。（4）伤后24 h，与对照组比较，单纯损伤组、BMSC组大鼠BALF中TNF－α含量明显升高（P值均小于0.05）。与单纯损伤组比较，BMSC组和NMⅡA－BMSC组大鼠BALF中TNF－α含量明显降低（P值均小于0.05）。与对照组比较，单纯损伤组、BMSC组、NMⅡA－BMSC组大鼠BALF中IL－10含量明显升高（P值均小于0.05）。与单纯损伤组比较，BMSC组和NMⅡA－BMSC组大鼠BALF中IL－10含量明显升高（P值均小于0.05）。与BMSC组比较，NMⅡA－BMSC组大鼠BALF中IL－10含量明显升高（P〈0.05）。结论沉默NMⅡA的BMSC能够减轻烟雾吸入性损伤大鼠早期肺损伤，比单纯使用BMSC更为有效。

非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链B羧基端多肽单克隆抗体的制备及鉴定

为了得到能够特异性识别非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链B(NMHCⅡ-B)的单克隆抗体,根据Marc-145细胞上NMHCⅡ-B羧基端的蛋白质序列,合成多肽,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA方法筛选阳性克隆;制备腹水并纯化;用间接ELISA和间接免疫荧光试验检测纯化抗体的特异性。结果显示,获得2株能稳定传代并分泌特异性抗体的杂交瘤细胞系;单克隆抗体的特异性鉴定显示,2株细胞系所产生的抗体能够特异性地与NMHCⅡ-B羧基端蛋白反应而且能与Marc-145细胞产生特异性的结合。这2株单抗的制备及鉴定为研究易感细胞上NMHCⅡ-B与猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的关系奠定了基础。

非肌肉肌球蛋白重链ⅡA(NMHCⅡA)生理病理功能研究进展

非肌肉肌球蛋白重链ⅡA(NMHCⅡA)是Ⅱ型非肌肉肌球蛋白的主要亚型,近年来NMHCⅡA基因及蛋白功能的研究日益增多,引起国内外学者的广泛重视。已证实NMHCⅡA基因突变导致多种遗传性疾病,临床多见巨大血小板减少,并逐渐发展为伴有听力障碍、白内障和肾功能损伤;NMHCⅡA参与胞质分裂、细胞吞噬、细胞运动、血栓形成、炎症、肿瘤转移、视网膜变性、听力、肾脏功能调节等病理生理过程。MYH9不同位点的基因突变,NMHCⅡA蛋白构象的变化,表达量的改变,在细胞内分布的变化,磷酸化的强弱以及其结合蛋白的改变都可能成为影响肿瘤、心血官疾病发生发展的重要机制之一。本文就近年来NMHCⅡA主要生理病理功能做一综述。

非肌肉肌球蛋白ⅡA通过c-jun氨基末端激酶信号途径调控胃癌细胞的迁移与侵袭

目的 使用c-jun氨基末端激酶（JNK）/c-Jun信号通路的激活剂茴香霉素,观察对胃癌细胞迁移与侵袭的影响,探讨非肌肉肌球蛋白ⅡA（NMⅡA）是通过JNK/c-Jun信号通路米调控胃癌细胞的迁移与侵袭.方法 使用噻唑蓝（MTT）法分别测定0、5、10、20、40、80μg/L茴香霉素浓度对胃癌细胞的生长影响;使用RNA干扰（RNAi）干扰NMⅡA的表达,在胃癌细胞中加入JNK/c-Jun信号通路的激活剂茴香霉素,利用Western blot检测NMⅡA及JNK/c-Jun信号通路的相关蛋白表达水平.利用细胞划痕和Transwell实验来测定胃癌细胞的迁移和侵袭.结果 与对照组比较（0μg/L）,茴香霉素的浓度大于40 μg/L时,茴香霉素对胃癌细胞SGC-7901有明显抑制作用（P＜0.01）;Western blot结果显示,干扰NMⅡA的表达后,加入茴香霉素,可以增强JNK和c-Jun的磷酸化水平;划痕实验显示SGC-7901 Con对照组的组细胞划痕宽度由（600±25）μm降为（35 ±5）μm;而SGC-7901 RNAi干扰组的组细胞划痕宽度由之前的（610 ±30） μm降为（325 ±55） μm;当用茴香霉素处理SGC7-901 RNAi干扰组的细胞时,迁移距离由之前的（615 ±25）μm降为（90±35） μm;与干扰组比较,对照组和茴香霉素处理的实验组的迁移距离显著降低（P＜0.01）.Transwell实验结果茴香霉素处理的实验组,与干扰组比较,细胞迁移数目显著增多（P＜0.01）. 结论 在对胃癌细胞中NMⅡA通过JNK/c-Jun信号通路来调控胃癌细胞的迁移与侵袭.

非肌肉肌球蛋白ⅡA的相互作用蛋白研究进展

非肌肉肌球蛋白ⅡA(NMⅡA)是肌球蛋白超家族的成员之一,其生物学功能已引起国内外学者的广泛重视。研究发现,NMⅡA可作为分子马达为细胞内分子运动提供动力;还可通过与其他蛋白质发生相互作用而参与细胞黏附与迁移、细胞吞噬、胞质分裂等多种生理病理活动。本文综述了与NMⅡA存在相互作用的蛋白质及其产生的生物学效应,以期为全面了解NMⅡA的生理病理功能,深入探讨肿瘤等重大疾病的发病机制及新药研发提供一定线索和依据。

沉默非肌肉肌球蛋白Ⅱ骨髓间充质干细胞移植对内毒素/脂多糖诱导急性肺损伤大鼠肺细胞外基质的影响

目的探讨沉默非肌肉肌球蛋白Ⅱ(NMⅡ)基因的骨髓间充质干细胞(BMMSC)对内毒素/脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺细胞外基质(ECM)和肺纤维化的影响。方法采用实验研究方法。取4只1周龄雄性SD大鼠股骨和胫骨骨髓腔细胞并经流式细胞术鉴定为BMMSC。取第3代BMMSC用于后续实验。取细胞,分为用含NMⅡ基因的小干扰RNA序列的pHBLV-U6-ZsGreen-Puro质粒转染的沉默NMⅡ组,转染空载质粒的空载组及未进行任何处理的空白对照组,采用蛋白质印迹法检测干预后72 h的NMⅡ的蛋白表达(样本数为3)。取细胞,于倒置相差显微镜下观察形态;另取细胞,用氯甲基苯甲酰胺(CM-DiⅠ)标记,于倒置荧光显微镜下观察体外细胞标记情况。取20只4周龄雄性SD大鼠,按随机数字表法分为空白对照组、单纯ALI组、ALI+BMMSC组及ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组,每组5只大鼠。对空白对照组不进行任何处理,其余3组大鼠均给予LPS诱导ALI。造模后即刻,单纯ALI组大鼠经尾静脉注射1 mL生理盐水,ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠分别经尾静脉注入1 mL 1×10^(7)个/mL CM-DiⅠ标记的BMMSC、NMⅡ基因沉默的BMMSC,空白对照组大鼠于相同时间点通过尾静脉注射1 mL生理盐水。干预后24 h,取肺组织于倒置荧光显微镜下观察BMMSC肺内归巢情况。干预后24 h、1周、2周,取肺组织行苏木精-伊红染色观察肺部炎症情况,行Masson染色观察肺纤维化程度并采用改良Ashcroft评分法对干预后2周肺纤维化程度进行评分(样本数为5)。采用免疫组织化学法检测干预后2周α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9的含量(样本数均为3),采用酶联免疫吸附测定法检测干预后24 h超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、髓过氧化物酶(MPO)活性(样本数均为3),采用免疫荧光染色法检测干预后1周CD11b和含表皮生长因子样模块黏蛋白样激素受体1(EMR1)蛋白表达(样本数均为3)。对数据行单因素方差分析、Bonferroni法及Kruskal-Wallis H检验。结果干预后72 h,沉默NMⅡ组细胞NMⅡ蛋白表达水平显著低于空白对照组和空载组(P值均<0.01)。BMMSC呈长梭形,簇状生长形如旋涡;CM-DiⅠ体外成功标记BMMSC。干预后24 h,ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺内细胞归巢现象较ALI+BMMSC组更明显,而空白对照组和单纯ALI组大鼠肺内未见CM-DiⅠ标记的细胞。空白对照组大鼠干预后各时间点肺组织中均未见明显炎症细胞浸润,ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠干预后24 h肺组织炎症细胞浸润较单纯ALI组明显减少,且2组大鼠干预后1、2周肺泡壁变薄,局部肺组织有少量淤血。干预后1、2周,单纯ALI组、ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织胶原纤维沉积均较空白对照组明显加重,但ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织胶原纤维沉积均较单纯ALI组显著改善。干预后2周,单纯ALI组、ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺纤维化改良Ashcroft评分分别为(2.36±0.22)、(1.62±0.16)、(1.06±0.26)分,均明显高于空白对照组的(0.30±0.21)分(P<0.01),ALI+BMMSC组和ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺纤维化改良Ashcroft评分均明显低于单纯ALI组(P<0.01),ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺纤维化改良Ashcroft评分明显低于ALI+BMMSC组(P<0.01)。干预后2周,与单纯ALI组比较,ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织α-SMA含量均显著下降(P<0.05或P<0.01)。4组大鼠肺组织MMP-2含量均相近(P>0.05)。与空白对照组比较,单纯ALI组大鼠肺组织MMP-9含量显著升高(P<0.01);与单纯ALI组比较,ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织MMP-9含量均显著降低(P<0.01)。干预后24 h,与空白对照组比较,单纯ALI组、ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织丙二醛、SOD、MPO活性均显著升高(P<0.01);与单纯ALI组比较,ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织丙二醛活性显著升高(P<0.05),ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织SOD活性均显著升高(P<0.01);与ALI+BMMSC组比较,ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织SOD活性显著降低(P<0.01)。与单纯ALI组比较,ALI+BMMSC组、ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织MPO活性均显著降低(P<0.01);与ALI+BMMSC组比较,ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织MPO活性显著降低(P<0.01)。干预后1周,与其他3组比较,ALI+沉默NMⅡ的BMMSC组大鼠肺组织CD11b蛋白表达显著增加(P<0.05或P<0.01);4组大鼠肺组织EMR1蛋白表达均相近(P>0.05)。结论移植沉默NMⅡ基因的BMMSC能更明显改善LPS所致ALI大鼠肺组织ECM成分的活性,重塑其完整性,增强其抗氧化能力,减轻肺损伤和肺纤维化。