Th1、Th2细胞因子在非肥胖型糖尿病小鼠肺间质病变中的作用

目的探讨Th1细胞因子IL-2、IFN-γ及Th2细胞因子IL-4、IL-6在非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠肺内的表达水平以及在干燥综合征合并肺间质病变(SS-ILD)发病机制中的作用。方法根据肺与颌下腺的病理变化,将NOD鼠分成SS-ILD组、SS组。分别检测各组小鼠肺组织中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6的mRNA及血清ESR、CRP、C3、IgG、IgA、IgM表达水平,并分析其相关性。结果 SS-ILD组肺组织中IL-2、IFN-γ、IL-6 mRNA和血清ESR、CRP、免疫球蛋白IgG、IgA、IgM表达水平均比SS组和正常对照组明显增高,补体C3却明显降低。SS-ILD组Th1/Th2与ESR、CRP、IgG正相关,与补体C3负相关,但SS组未见其相关性。结论 Th1/Th2细胞因子的失衡可能是SS-ILD重要发病机制之一。

白细胞介素10基因对未发病非肥胖型糖尿病小鼠肝脏胰-十二指肠同源盒1表达的影响

背景:研究发现肝脏细胞在给予转入胰-十二指肠同源盒1基因后可合成胰岛素,抗CD20单克隆抗体可抑制产胰岛素的肝脏细胞发生自身免疫反应,但机制尚不明确。目的:了解腺病毒介导的小鼠白细胞介素10(Adenovirus vector-mediated murine interleukin,Ad-mI L-10)及抗CD20单克隆抗体联合干预未发病非肥胖糖尿病模型小鼠,对其肝脏细胞以及肝脏胰-十二指肠同源盒1表达的影响。方法:3-5周龄雌性未发病非肥胖糖尿病模型小鼠40只,随机分为抗CD20单克隆抗体组、抗CD20单克隆抗体+白细胞介素10组、白细胞介素10组和对照组,分别于第1,8,15,21天尾静脉注射抗CD20单克隆抗体、抗CD20单克隆抗体+Ad-m IL-10、Ad-mI L-10和生理盐水。结果与结论:12周后,与对照组相比,经抗CD20单克隆抗体和/或白细胞介素10治疗的未发病非肥胖糖尿病模型小鼠血糖水平明显降低,而血清和肝脏中胰岛素、白细胞介素10和CD20表达明显增加,同时肝脏中胰-十二指肠同源盒1表达水平增加;且经抗CD20单克隆抗体和白细胞介素10联合对上述指标的影响高于单独应用;但无论是联合干预还是单独干预均对小鼠肝脏炎症病变无明显影响。证实CD20单抗及白细胞介素10基因联合干预为促使非肥胖糖尿病模型小鼠肝脏胰-十二指肠同源盒1表达机制之一。

B10细胞与非肥胖型糖尿病小鼠自身免疫性糖尿病发生的关系研究

目的:研究B10细胞与非肥胖型糖尿病小鼠自身免疫性糖尿病发生的关系。方法:选择20只6周龄NOD/LT雌性小鼠进行常规培养至30周龄,根据小鼠血糖、血肌酐和体重情况将小鼠分为自身免疫性糖尿病未发生组和发生组。利用酶联吸附反应检测两组小鼠脾脏组织中IL-10水平。利用流式细胞分选术检测两组小鼠脾脏组织汇总B10细胞比例。将40只6周龄NOD/LT雌性小鼠分为对照组和B10组,B10组小鼠接种分离得到的B10细胞,每周一次,对照组接种同等体积生理盐水,分别于第10、15、20、25、30周龄时检测小鼠自身免疫性糖尿病发生情况。结果:发生组小鼠血糖和血肌酐水平显著高于未发生组(P<0.05),体重水平显著低于未发生组(P<0.05)。发生组小鼠脾脏组织中IL-10水平显著高于未发生组。自身免疫性糖尿病发生组小鼠脾脏组织中B10细胞含量显著高于未发生组。当小鼠处于第10、15周龄时,B10组小鼠中自身免疫性糖尿病发生率显著低于对照组,但第20、25、30周时,B10组小鼠中自身免疫性糖尿病发生率显著高于对照组。结论:B10细胞的过度积累,可能是进一步诱发NOD小鼠自身免疫性糖尿病发生的原因之一。

人GLP-1(7-36)酰胺促进非肥胖型糖尿病小鼠胰腺导管上皮细胞分化

目的探讨人胰高糖素样肽1(GLP-1)对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胰腺导管上皮细胞分化与增殖的影响。方法 GLP-1治疗组小鼠用微型渗透泵皮下持续泵入人GLP-1,对照组小鼠泵入生理盐水,4周后将其胰腺组织分别做导管细胞角蛋白(DCK)/胰岛素双重免疫荧光染色、胰腺十二指肠同源异型盒基因(PDX-1)/胰岛素双重免疫荧光染色及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)/DCK双重免疫染色,显微镜下观察胰腺导管上皮细胞的分化和增殖。结果在GLP-1治疗组胰腺导管上皮中可见较多胰岛素阳性细胞及PDX-1/胰岛素双阳性细胞,而在对照组几乎看不到;GLP-1治疗组小鼠BrdU阳性的导管上皮细胞的百分数与对照组小鼠相比明显增高(P<0.001)。结论人GLP-1持续刺激NOD小鼠后,可促进胰腺导管上皮细胞分化与增殖。

非肥胖型糖尿病及严重联合免疫缺陷小鼠体内成人脂肪源Flk1^+CD31^-CD34^-细胞的多向分化

目的:探讨成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞用于移植的可能性。方法:将男性成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞按106个/只剂量经尾静脉输入10只6～8周龄、接受亚致死剂量射线照射的非肥胖型糖尿病及严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内(实验组),对照组10只输注等体积的RPMI1640培养基,2个月后处死动物,检测植入情况。结果:在实验组小鼠体内,脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞不仅有助于造血重建及体内微血管损伤的修复,参与血管新生,还能分化为消化道上皮细胞;而对照组小鼠则在2周内全部死亡。结论:脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞极有可能成为一种理想的种子细胞用于移植。

人GLP-1(7-36)酰胺对非肥胖型糖尿病小鼠胰岛炎的影响

目的通过观察人胰高糖素样肽1(GLP-1)刺激后非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胰岛组织形态学的变化,研究GLP-1对NOD 1型糖尿病小鼠胰岛炎的影响。方法 GLP-1治疗组小鼠用微型渗透泵皮下持续泵入人GLP-1,对照组小鼠泵入生理盐水,4周后将其胰腺组织做HE染色、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Br-dU)/胰岛素双重免疫染色及导管细胞角蛋白(DCK)/胰岛素双重免疫荧光染色,观察小鼠胰岛炎的变化及胰岛β细胞的复制和胰腺导管上皮β细胞的新生。结果与对照组相比,GLP-1治疗组NOD小鼠胰岛单核细胞浸润明显减轻,胰岛炎评分明显下降(P<0.001)。GLP-1治疗组胰岛可见较多BrdU阳性的β细胞和胰岛素阳性的导管上皮细胞,而在对照组几乎看不到。结论人GLP-1持续刺激NOD小鼠后,可使1型糖尿病小鼠胰岛炎减轻并促进β细胞再生。

人GLP-1(7-36)酰胺对非肥胖型糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡的影响

目的探讨人胰高糖素样肽1(GLP-1)对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胰岛β细胞凋亡的影响。方法 GLP-1治疗组小鼠用微型渗透泵皮下持续泵入人GLP-1,对照组小鼠泵入生理盐水,4周后将其胰腺组织做HE染色、TUNEL/胰岛素双重免疫荧光染色,显微镜下观察小鼠胰岛炎的变化及胰岛β细胞的凋亡情况。结果与对照组相比,GLP-1治疗组小鼠胰岛单核细胞浸润明显减轻,胰岛炎评分明显下降(P<0.001)。在对照组小鼠胰腺组织切片中观察到较多凋亡β细胞,而在GLP-1治疗组却很少见到。GLP-1治疗组小鼠胰岛β细胞凋亡率与对照组小鼠相比明显下降(0.07±0.01%vs0.26±0.02%,P<0.001)。结论人GLP-1持续刺激NOD小鼠后,可使1型糖尿病小鼠胰岛炎减轻并抑制β细胞凋亡。

腺病毒介导的IL-10基因对1型糖尿病发病早期NOD鼠胰岛β细胞的保护作用

目的：观察腺病毒介导的IL-10（Ad-mIL-10）基因干预对1型糖尿病（T1DM）发病早期的非肥胖型糖尿病（ NOD）鼠胰岛β细胞的保护作用。方法选取17～20周龄近期发病（诊断为T1DM不超过3 d）的雌性NOD小鼠12只，随机分为A、B组（各6只），A组发病后立即予腹腔注射0．1 mL的Ad-mIL-10，B组未予任何干预；另选取相同周龄未发病的NOD鼠6只为C组，未予任何干预。实验前及实验开始后的第1、2、3周记录小鼠体质量、尿糖及血糖；第3周时处死全部小鼠，摘眼球法取全血并测血清 IL-10、IFN-γ、IL-4和 C肽；取胰腺做病理切片，HE及免疫组化染色，观察小鼠胰岛炎性浸润程度及IL-10基因在胰腺的表达情况。结果与B组相比，A组胰腺局部IL-10高表达、血清IL-10水平升高（P＜0．01）；A组血清IFN-γ水平较B组降低、IL-4及IL-10水平较B组升高、IFN-γ／IL-4较B组降低，两组相比， P均＜0．01；A组血清C肽水平较B组升高，两组相比，P＜0．01。结论 Ad-mIL-10基因干预可对自然发病NOD小鼠发挥一定的免疫调节作用，一定程度上改善其胰岛β细胞功能。

口服胰岛素对1型糖尿病小鼠预防与治疗作用

目的 探索口服胰岛素引起的免疫耐受对 1型糖尿病的预防与治疗作用。方法 将 4周龄雌性非肥胖型糖尿病 (NOD)小鼠随机分成 4组 ,任选 3组从鼠龄 4周、8周和 12周起开始灌胃给予 1mg胰岛素 ,对照组从鼠龄 4周起灌胃给予PBS。 4组均持续灌胃到鼠龄 35周。结果 各胰岛素给药组小鼠的 1型糖尿病累计发病率均显著低于对照组 (P <0 0 1) ,生存率显著高于对照组 (P =0 0 0 9)。结论 口服胰岛素对 1型糖尿病具有预防与治疗作用。

NOD小鼠1型糖尿病的自然发病特性

1型糖尿病由于自身免疫的损害造成胰岛β细胞破坏,引起胰岛素绝对缺乏,呈现高血糖症状。目前仍无有效的根治方法。非肥胖型糖尿病小鼠(NOD)能自然发生1型糖尿病,是目前研究1型糖尿病的主要动物模型。该品系小鼠有独特H2g7单倍体(Kd、I Ag7、I Enull、Db),通常于4～5周龄开始出现胰岛炎,进行性破坏胰岛β细胞,于12周龄时出现明显糖尿病症状,至30周龄时雌性小鼠累计发病率可达到80%,而雄性小鼠则不到20%。

山奈酚对非肥胖型糖尿病小鼠的治疗作用

目的:观察山奈酚(KA)对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠的治疗效果,并探讨其作用机制。方法:选取血糖≥11.1mmol.L-1NOD小鼠,连续灌胃低剂量(50mg.kg-1)和高剂量(200mg.kg-1)KA10周,于治疗前和治疗后均采用血糖仪检测血糖变化,酶联免疫吸附(ELISA)法检测谷氨酸脱羧酶-65抗体(GAD-65Ab)阳性率、γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素10(IL-10)的变化水平。结果:未经治疗的NOD小鼠血糖随着鼠龄的增高明显上升;经KA治疗10周后,血糖明显下降,并接近正常值(≤11.1mmol.L-1)。治疗前,NOD小鼠GAD-65Ab阳性率为100%,血清中IFN-γ含量高,而IL-10含量低;治疗后,GAD-65Ab转阴率明显上升,IFN-γ含量显著下降,IL-10含量显著上升(P<0.05,P<0.01),并以200mg.kg-1KA治疗最佳。结论:KA可明显降低NOD小鼠血糖值,其作用机制可能是通过下调GAD-65Ab及平衡1型和2型T辅助细胞亚群(Th1/Th2),从而抑制自身反应性免疫应答。

利用人源化小鼠研究组织工程材料的体内免疫原性

目的建立并利用人源化小鼠模型,研究组织工程材料的体内免疫原性。方法利用NOD/SCID小鼠(非肥胖型糖尿病鼠与重症联合免疫缺陷鼠反交鼠模型),通过腹腔注射人外周血单个核细胞(PBMC)(100×106)建立人源化小鼠,在人源化小鼠皮下植入异体人皮肤(阳性对照)、人体脂肪干细胞与脱钙骨构建的组织工程骨(实验组)、单纯脱钙骨材料(阴性对照)。在植入后1周、2周、3周、4周,取小鼠尾静脉血,流式细胞仪检测人CD4+和CD8+淋巴细胞比例。4周后,取小鼠的移植局部皮肤进行HE染色分析,同时检测脾细胞人CD4+和CD8+淋巴细胞比例。结果NOD/SCID小鼠腹腔注射人PBMC4周内,在外周血和脾中均可测到人CD4+和CD8+淋巴细胞。病理分析结果显示:在人源化小鼠皮下植入的组织工程材料及成体干细胞构建的组织工程骨组未见炎性细胞浸润;而单独植入人皮肤组可见明显的炎性细胞浸润。结论人源化小鼠可作为组织工程材料体内免疫原性的研究的良好模型。

TLR9依赖的p38MAPK信号通路对鼠原发性舍格伦综合征的影响

目的:在动物模型NOD(非肥胖型糖尿病)鼠中,观察研究Toll样受体9(Toll Like Receptor 9,TLR9)依赖的p38MAPK信号通路在原发性舍格伦综合征发病机制中的作用。方法:实验选取5周龄的雌性NOD小鼠,分别给予3种抑制剂:ODN2088、VX-792、羟氯喹。利用流式细胞学技术检测小鼠外周血淋巴细胞的情况。利用免疫组化检测小鼠下颌下腺TLR9及p-p38 MAPK的表达情况。利用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠外周血中血浆抗体的表达。利用Tunel方法检测小鼠下颌下腺腺上皮细胞的凋亡。同时,观察小鼠刺激性唾液流率的改变以及下颌下腺病理学改变。结果:只有ODN2088组的NOD小鼠的唾液流率显著增加。在所有被给予羟氯喹的NOD鼠和未接受治疗的NOD鼠中,下颌下腺均有淋巴细胞浸润灶的出现。但在ODN2088组中,只有1只NOD小鼠出现下颌下腺的淋巴细胞浸润灶。在VX-702组中,所有NOD小鼠均未发现淋巴细胞浸润灶。所有实验组的外周血淋巴细胞的数目显著减少。ODN2088组NOD小鼠的抗SSA/Ro抗体和抗SSB/La抗体的浓度是所有实验组中最低的。结论:TLR9依赖的p38MAPK信号通路的抑制,能一定程度上减轻原发性舍格伦综合征动物模型NOD鼠的临床表现。

补肾清热育阴汤对非肥胖型糖尿病小鼠唾液分泌量及颌下腺IL-1β、IL-22含量的影响

目的:观察补肾清热育阴汤对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠唾液分泌量及颌下腺白细胞介素(IL)-1β、IL-22含量的影响。方法:将50只8周龄NOD小鼠随机分为模型组,羟氯喹组,中药低、中、高剂量组,每组10只。另设10只同周龄BALB/c小鼠作为正常组。中药低、中、高剂量组分别灌胃补肾育阴清热汤20、40、80 g/kg,羟氯喹组给予羟氯喹溶液80 mg/kg灌胃,正常组与模型组给予等量的0.9%氯化钠溶液,每日1次,持续给药12周。每2周评估1次小鼠唾液分泌量,采用ELISA法检测小鼠颌下腺IL-1β的含量,采用免疫组化法检测小鼠颌下腺IL-22水平。结果:实验第6周后,各给药组的唾液分泌量均显著多于模型组(P<0.05);实验第12周,与羟氯喹组比较,中药中、高剂量组的唾液分泌量显著增多(P<0.05)。与模型组比较,中药高剂量组小鼠颌下腺IL-1β含量显著降低(P<0.05),各给药组小鼠颌下腺IL-22含量显著降低(P<0.01)。结论:补肾清热育阴汤能够有效增加唾液分泌量,并且能下调颌下腺IL-1β、IL-22含量。

养阴益气活血方对干燥综合征NOD小鼠血清及颌下腺Th1/Th2免疫平衡的影响

目的观察养阴益气活血方对干燥综合征(Sjogren's Syndrome,SS)非肥胖型糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠血清及颌下腺干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、IL-2、IL-4、IL-10的表达及Th1/Th2免疫平衡的影响,探讨其作用机制。方法 32只NOD小鼠随机分为模型组、中药组[养阴益气活血方煎剂,0.4mL(100 g/kg)]、西药组[羟氯喹0.4 mL(60 mg/kg)]、联合组[养阴益气活血方煎剂(50 g/kg)+羟氯喹(60mg/kg)0.4 mL],每组8只,8只Balb/C小鼠作为正常对照(正常组)。实验进行8周后取血,摘取小鼠颌下腺组织,采用ELISA法检测小鼠血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平,SP法检测颌下腺组织IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10蛋白的表达。结果模型组小鼠血清和颌下腺组织IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平明显高于正常组(P<0.05)。中药组和联合组血清IFN-γ、IL-10水平均低于西药组(P<0.05)。联合组颌下腺IFN-γ、IL-2表达低于西药组(P<0.05)。模型组血清和颌下腺IFN-γ/IL-4比值均高于其他各组(P<0.05),且中药组和联合组IFN-γ/IL-4比值最接近正常组。结论养阴益气活血方能降低SS NOD小鼠血清和颌下腺Th1、Th2相关细胞因子的水平,下调血清和颌下腺IFN-γ/IL-4比值。养阴益气活血方可能通过调节SS小鼠Th1/Th2免疫平衡达到治疗作用。

改良胃旁路术对GK大鼠的降糖作用及其机制

目的:研究改良胃旁路术(gastric bypass,GBP)对非肥胖型2型糖尿病(Goto-Kakizaki,GK)大鼠的降糖效果及其机制.方法:♂GK大鼠20只,随机分为手术组和对照组,每组10只.对手术组大鼠行GBP,对照组大鼠在十二指肠球部远端0.5cm处切断吻合.测定各组术前1wk及术后8wk体质量、空腹血糖(FPG)、餐后30min血糖、血浆胰岛素(INS)、血浆胰高血糖素样肽-1(GLP-1)水平.结果:术后8wk,手术组FPG和餐后30min血糖较术前明显降低(4.013mmol/L±0.476mmol/L vs5.050mmol/L±0.395mmol/L;12.488mmol/L±1.173mmol/L vs22.790mmol/L±3.525mmol/L,均P<0.05),血浆INS和GLP-1较术前明显升高(873.630ng/L±115.920ng/L vs674.000ng/L±224.372ng/L;8508.750ng/L±l247.013ng/L vs6915.000ng/L±1566.860ng/L,均P<0.05).结论:改良GBP能降低GK大鼠血糖,其机制可能与术后GLP-1的升高,从而导致胰岛素分泌增多有关.

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0116960 利用学校验尿。福冈市糖尿病普查10年的总结[日]/黑丸龙一//诊药.-2000,37(3).-70～71 冀医情0116961 与 Pima 印第安人中较低的体质指数、血浆葡萄糖和Ⅱ型糖尿病流行相关的欧洲人的遗传混杂的个体估计/Williams R C//Am J Hum Genet.-2000。

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