非肥胖型多囊卵巢综合征大鼠模型的建立及评价研究

目的建立符合临床特征的、稳定的非肥胖型多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠模型。方法采用脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)皮下注射法建立PCOS大鼠模型。将3周龄雌性SD大鼠分为正常组、6 mg/kg DHEA造模组、60 mg/kg DHEA造模组,造模组每日按照相应剂量进行DHEA皮下注射,正常组每日给予甘油皮下注射,连续21 d,以卵巢组织病理学为金标准进行模型评价,明确DHEA致PCOS大鼠模型的最佳造模剂量。在此基础上,选取DHEA最佳造模剂量,分别设立停止造模组和继续造模组,进行28 d的模型观察,考察模型维持情况,其中停止造模组不再继续给予DHEA,继续造模模型组每48 h给予60 mg/kg DHEA皮下注射。评价指标包含大鼠体重、动情周期、空腹血糖和血清胰岛素、卵巢组织病理形态和血清性激素水平。结果(1)与正常组相比,6 mg/kg DHEA造模组与60 mg/kg DHEA造模组体重无显著性差异,但二者动情周期均失去规律性,卵巢组织中可见较多囊状扩张的大卵泡,少见成熟卵泡,颗粒细胞层数减少且排列稀疏无序,黄体数量减少;且60 mg/kg DHEA造模组血清T、E_(2)水平显著升高(P<0.05)。(2)停止造模组:模型组(A_(2)组)与正常组(A1组)相比,两周后恢复规律的动情周期,卵巢组织中可见各级生长卵泡和黄体,囊性卵泡减少,颗粒细胞层数增加,可见成熟卵泡,卵母细胞局部形态完整,且E_(2)、AMH水平降低(P<0.05)。(3)继续造模组:模型组(B2组)与正常组(B1组)相比,长期处于动情后期,卵巢组织中可见较多囊状扩张的大卵泡,少见成熟卵泡,颗粒细胞层数减少且排列稀疏无序,黄体数量明显减少,血清LH、LH/FSH、T水平升高(P<0.05)。结论连续21 d皮下注射60 mg/kg DHEA,能够成功构建符合临床特征的非肥胖型PCOS大鼠模型,在此基础上每48 h给予60 mg/kg DHEA皮下注射能够保持模型的稳定性。

吴茱萸碱调节Nod样受体蛋白3信号通路对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织损伤的影响

目的探讨吴茱萸碱调节Nod样受体蛋白3(NLRP3)信号通路影响非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织损伤情况。方法2022年5—11月选取大鼠喂食高脂饲料8周后,通过随机数字表法将大鼠分为模型组、吴茱萸碱低剂量组(吴茱萸碱4 mg/kg)、吴茱萸碱中剂量组(吴茱萸碱8 mg/kg)、吴茱萸碱高剂量组(吴茱萸碱16 mg/kg)、阳性药组(多烯磷脂酰胆碱200 mg/kg)和NLRP3组(吴茱萸碱16 mg/kg+1 mg/kg NLRP3信号通路激活剂尼日利亚菌素),每组各10只,另有10只大鼠喂食普通饲料作为对照组,所有大鼠均给予相对应药物干预,给药4周;生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、胆固醇、三酰甘油(TG);HE染色观察肝组织病理;油红O染色观察肝组织脂肪沉积;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测大鼠肝脏组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(caspase-1)表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠肝组织肝小叶结构紊乱,肝细胞增大,可见明显颗粒状脂滴以及脂质积累,并伴有炎症细胞浸润,肝组织脂肪变性明显,大鼠体质量[(582.65±16.25)g比(476.29±10.62)g]、肝指数[(3.79±0.25)%比(2.48±0.18)%]、血清GPT[(79.62±3.59)U/L比(36.22±2.15)U/L]、GOT[(185.25±5.18)U/L比(71.69±3.56)U/L]、胆固醇[(2.93±0.19)mmol/L比(1.72±0.12)mmol/L]、TG[(1.19±0.11)mmol/L比(0.56±0.07)mmol/L]、TNF-α[(162.48±4.25)ng/L比(41.76±2.49)ng/L]、IL-18[(135.75±3.37)ng/L比(23.52±2.02)ng/L]、IL-1β[(201.88±4.67)ng/L比(92.64±2.99)ng/L]水平,肝组织NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA表达以及NLRP3、ASC、活化胱天蛋白酶-1(cleaved caspase-1)蛋白表达均明显升高(P<0.05);与模型组相比,吴茱萸碱低、中、高剂量组和阳性药组大鼠肝组织损伤、肝脏脂肪变性、炎症细胞浸润和脂滴积累明显减轻,大鼠体质量[(551.37±15.72)g、(530.52±15.49)g、(509.48±15.18)g、(517.71±12.73)g比(582.65±16.25)g]、肝指数[(3.41±0.20)%、(3.13±0.16)%、(2.81±0.17)%、(3.02±0.213)%比(3.79±0.25)%]、血清GPT[(68.16±3.41)U/L、(55.94±3.05)U/L、(46.45±2.72)U/L、(48.71±2.34)U/L比(79.62±3.59)U/L]、GOT[(161.32±4.73)U/L、(138.64±4.50)U/L、(113.57±4.05)U/L、(121.48±4.11)U/L比(185.25±5.18)U/L]、胆固醇[(2.58±0.17)mmol/L、(2.25±0.16)mmol/L、(1.91±0.13)mmol/L、(1.99±0.15)mmol/L比(2.93±0.19)mmol/L]、TG[(1.01±0.10)mmol/L、(0.83±0.08)mmol/L、(0.62±0.07)mmol/L、(0.70±0.09)mmol/L比(1.19±0.11)mmol/L]、TNF-α[(137.15±3.69)ng/L、(113.53±3.34)ng/L、(79.37±2.92)ng/L、(85.61±3.07)ng/L比(162.48±4.25)ng/L]、IL-18[(111.34±3.05)ng/L、(72.98±2.66)ng/L、(47.61±2.438)ng/L、(51.59±2.55)ng/L比(135.75±3.37)ng/L]、IL-1β[(171.52±4.34)ng/L、(152.23±4.02)ng/L、(129.95±3.51)ng/L、(517.71±12.73)ng/L比(136.76±3.73)ng/L]水平,肝组织NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA表达以及NLRP3、ASC、cleaved caspase-1蛋白表达均明显降低(P<0.05);NLRP3信号通路激活剂尼日利亚菌素的加入明显减弱了吴茱萸碱对NAFLD大鼠肝组织的保护作用。结论吴茱萸碱可通过抑制NLRP3信号通路明显改善NAFLD大鼠肝组织损伤、脂肪病变和炎症反应。

人牙龈间充质干细胞通过减少滤泡B细胞比例预防非肥胖糖尿病小鼠糖尿病

【目的】1型糖尿病是由于慢性免疫炎症破坏了胰岛β细胞,导致血糖升高。间充质干细胞可以预防及治疗糖尿病及其并发症的发生,然而对牙龈间充质干细胞(GMSCs)预防糖尿病的效果和潜在机制知之甚少。本研究旨在研究GMSCs在预防小鼠1型糖尿病的机制,寻找临床治疗糖尿病的靶点。【方法】我们将人GMSCs注射到NOD小鼠体内,观察血糖的变化趋势,通过免疫组化染色观察胰岛β细胞的存活情况,并通过流式分析检测小鼠脾脏中T细胞、B细胞及巨噬细胞的比例变化。最后,将NOD小鼠脾脏淋巴细胞回输至NOD-SCID小鼠,观察NOD-SCID小鼠的血糖水平及糖尿病发病率。【结果】GMSCs明显降低了NOD小鼠的糖尿病发病率,对照组小鼠在27周龄时有64%患糖尿病,而GMSC组只有35%,P=0.013。GMSCs处理的小鼠脾脏中滤泡B细胞比例从(52.2±4.1)%下降到(43.2±5.3)%,P=0.008,而其他类型的免疫细胞没有明显变化。免疫组化结果显示,GMSCs可以有效地提高胰岛β细胞的存活率,使其能够持续产生胰岛素以控制血糖。最后,我们发现患病小鼠脾脏淋巴细胞回输治疗能够促进NOD-SCID小鼠糖尿病的发生。【结论】GMSCs可以通过减少脾脏中的滤泡B细胞比例来预防NOD小鼠的糖尿病发生。

Th1、Th2细胞因子在非肥胖型糖尿病小鼠肺间质病变中的作用

目的探讨Th1细胞因子IL-2、IFN-γ及Th2细胞因子IL-4、IL-6在非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠肺内的表达水平以及在干燥综合征合并肺间质病变(SS-ILD)发病机制中的作用。方法根据肺与颌下腺的病理变化,将NOD鼠分成SS-ILD组、SS组。分别检测各组小鼠肺组织中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6的mRNA及血清ESR、CRP、C3、IgG、IgA、IgM表达水平,并分析其相关性。结果 SS-ILD组肺组织中IL-2、IFN-γ、IL-6 mRNA和血清ESR、CRP、免疫球蛋白IgG、IgA、IgM表达水平均比SS组和正常对照组明显增高,补体C3却明显降低。SS-ILD组Th1/Th2与ESR、CRP、IgG正相关,与补体C3负相关,但SS组未见其相关性。结论 Th1/Th2细胞因子的失衡可能是SS-ILD重要发病机制之一。

白细胞介素10基因对未发病非肥胖型糖尿病小鼠肝脏胰-十二指肠同源盒1表达的影响

背景:研究发现肝脏细胞在给予转入胰-十二指肠同源盒1基因后可合成胰岛素,抗CD20单克隆抗体可抑制产胰岛素的肝脏细胞发生自身免疫反应,但机制尚不明确。目的:了解腺病毒介导的小鼠白细胞介素10(Adenovirus vector-mediated murine interleukin,Ad-mI L-10)及抗CD20单克隆抗体联合干预未发病非肥胖糖尿病模型小鼠,对其肝脏细胞以及肝脏胰-十二指肠同源盒1表达的影响。方法:3-5周龄雌性未发病非肥胖糖尿病模型小鼠40只,随机分为抗CD20单克隆抗体组、抗CD20单克隆抗体+白细胞介素10组、白细胞介素10组和对照组,分别于第1,8,15,21天尾静脉注射抗CD20单克隆抗体、抗CD20单克隆抗体+Ad-m IL-10、Ad-mI L-10和生理盐水。结果与结论:12周后,与对照组相比,经抗CD20单克隆抗体和/或白细胞介素10治疗的未发病非肥胖糖尿病模型小鼠血糖水平明显降低,而血清和肝脏中胰岛素、白细胞介素10和CD20表达明显增加,同时肝脏中胰-十二指肠同源盒1表达水平增加;且经抗CD20单克隆抗体和白细胞介素10联合对上述指标的影响高于单独应用;但无论是联合干预还是单独干预均对小鼠肝脏炎症病变无明显影响。证实CD20单抗及白细胞介素10基因联合干预为促使非肥胖糖尿病模型小鼠肝脏胰-十二指肠同源盒1表达机制之一。

B10细胞与非肥胖型糖尿病小鼠自身免疫性糖尿病发生的关系研究

目的:研究B10细胞与非肥胖型糖尿病小鼠自身免疫性糖尿病发生的关系。方法:选择20只6周龄NOD/LT雌性小鼠进行常规培养至30周龄,根据小鼠血糖、血肌酐和体重情况将小鼠分为自身免疫性糖尿病未发生组和发生组。利用酶联吸附反应检测两组小鼠脾脏组织中IL-10水平。利用流式细胞分选术检测两组小鼠脾脏组织汇总B10细胞比例。将40只6周龄NOD/LT雌性小鼠分为对照组和B10组,B10组小鼠接种分离得到的B10细胞,每周一次,对照组接种同等体积生理盐水,分别于第10、15、20、25、30周龄时检测小鼠自身免疫性糖尿病发生情况。结果:发生组小鼠血糖和血肌酐水平显著高于未发生组(P<0.05),体重水平显著低于未发生组(P<0.05)。发生组小鼠脾脏组织中IL-10水平显著高于未发生组。自身免疫性糖尿病发生组小鼠脾脏组织中B10细胞含量显著高于未发生组。当小鼠处于第10、15周龄时,B10组小鼠中自身免疫性糖尿病发生率显著低于对照组,但第20、25、30周时,B10组小鼠中自身免疫性糖尿病发生率显著高于对照组。结论:B10细胞的过度积累,可能是进一步诱发NOD小鼠自身免疫性糖尿病发生的原因之一。

非肥胖型糖尿病及严重联合免疫缺陷小鼠体内成人脂肪源Flk1^+CD31^-CD34^-细胞的多向分化

目的:探讨成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞用于移植的可能性。方法:将男性成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞按106个/只剂量经尾静脉输入10只6～8周龄、接受亚致死剂量射线照射的非肥胖型糖尿病及严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内(实验组),对照组10只输注等体积的RPMI1640培养基,2个月后处死动物,检测植入情况。结果:在实验组小鼠体内,脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞不仅有助于造血重建及体内微血管损伤的修复,参与血管新生,还能分化为消化道上皮细胞;而对照组小鼠则在2周内全部死亡。结论:脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞极有可能成为一种理想的种子细胞用于移植。

人GLP-1(7-36)酰胺促进非肥胖型糖尿病小鼠胰腺导管上皮细胞分化

目的探讨人胰高糖素样肽1(GLP-1)对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胰腺导管上皮细胞分化与增殖的影响。方法 GLP-1治疗组小鼠用微型渗透泵皮下持续泵入人GLP-1,对照组小鼠泵入生理盐水,4周后将其胰腺组织分别做导管细胞角蛋白(DCK)/胰岛素双重免疫荧光染色、胰腺十二指肠同源异型盒基因(PDX-1)/胰岛素双重免疫荧光染色及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)/DCK双重免疫染色,显微镜下观察胰腺导管上皮细胞的分化和增殖。结果在GLP-1治疗组胰腺导管上皮中可见较多胰岛素阳性细胞及PDX-1/胰岛素双阳性细胞,而在对照组几乎看不到;GLP-1治疗组小鼠BrdU阳性的导管上皮细胞的百分数与对照组小鼠相比明显增高(P<0.001)。结论人GLP-1持续刺激NOD小鼠后,可促进胰腺导管上皮细胞分化与增殖。

不同剂量谷氨酸脱羧酶对非肥胖型糖尿病小鼠发生1型糖尿病的影响

目的不同剂量谷氨酸脱羧酶(GAD)对非肥胖型糖尿病小鼠(NOD)糖尿病免疫干预效果的影响。方法将3周龄40只体重(10.0±0.9)g雌性NOD小鼠分为4组分别腹腔注射GAD0.3mU和不完全弗氏佐剂(IFA)50μL、GAD3mU+IFA50μL、GAD0.03mU+IFA50μL、IFA50μL。8周龄时注射环磷酰胺200mg/kg加速糖尿病,定期检测血糖,眼内眦取血分离血清检测细胞因子白细胞介素(IL)4和干扰素(IFNγ)的变化,动态观察各组糖尿病发生发展的过程。28周时,全部处死,取脾、胸腺作淋巴细胞亚群测定,胰腺作病理组织学观察。结果GAD3mU+IFA50μL组小鼠无一只发生糖尿病,28周时血糖为(5.0+1.1)mmol/L;胰岛个数最多(8.2+2.3)个/张(P<0.01),胰岛炎评分最低(0.33+0.12)(P<0.01);血清中IL4的水平最高为(80+6)ng/L(P<0.01),IFNγ水平最低为(327±48)ng/L;CD8+/CD4+比值最大(P<0.01),在脾脏中为0.524±0.133,胸腺中为0.428±0.021。结论NOD小鼠在3周龄时腹腔注射CAD3mU+IFA50μL混合物比其他剂量组免疫调节效果好,较好地通过调节胸腺,脾淋巴细胞亚群分类,并通过淋巴细胞分泌Th1类因子和Th2类因子来调节Th0细胞的转化,从而抑制NOD小鼠胰岛炎,胰岛β细胞破坏减少,GAD3mU剂量组免疫干预NOD小鼠糖尿病的发生效果最好。

人GLP-1(7-36)酰胺对非肥胖型糖尿病小鼠胰岛炎的影响

目的通过观察人胰高糖素样肽1(GLP-1)刺激后非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胰岛组织形态学的变化,研究GLP-1对NOD 1型糖尿病小鼠胰岛炎的影响。方法 GLP-1治疗组小鼠用微型渗透泵皮下持续泵入人GLP-1,对照组小鼠泵入生理盐水,4周后将其胰腺组织做HE染色、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Br-dU)/胰岛素双重免疫染色及导管细胞角蛋白(DCK)/胰岛素双重免疫荧光染色,观察小鼠胰岛炎的变化及胰岛β细胞的复制和胰腺导管上皮β细胞的新生。结果与对照组相比,GLP-1治疗组NOD小鼠胰岛单核细胞浸润明显减轻,胰岛炎评分明显下降(P<0.001)。GLP-1治疗组胰岛可见较多BrdU阳性的β细胞和胰岛素阳性的导管上皮细胞,而在对照组几乎看不到。结论人GLP-1持续刺激NOD小鼠后,可使1型糖尿病小鼠胰岛炎减轻并促进β细胞再生。

人GLP-1(7-36)酰胺对非肥胖型糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡的影响

目的探讨人胰高糖素样肽1(GLP-1)对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胰岛β细胞凋亡的影响。方法 GLP-1治疗组小鼠用微型渗透泵皮下持续泵入人GLP-1,对照组小鼠泵入生理盐水,4周后将其胰腺组织做HE染色、TUNEL/胰岛素双重免疫荧光染色,显微镜下观察小鼠胰岛炎的变化及胰岛β细胞的凋亡情况。结果与对照组相比,GLP-1治疗组小鼠胰岛单核细胞浸润明显减轻,胰岛炎评分明显下降(P<0.001)。在对照组小鼠胰腺组织切片中观察到较多凋亡β细胞,而在GLP-1治疗组却很少见到。GLP-1治疗组小鼠胰岛β细胞凋亡率与对照组小鼠相比明显下降(0.07±0.01%vs0.26±0.02%,P<0.001)。结论人GLP-1持续刺激NOD小鼠后,可使1型糖尿病小鼠胰岛炎减轻并抑制β细胞凋亡。

腺病毒介导的鼠IL-10基因对非肥胖型糖尿病小鼠胰岛β细胞的保护作用

目的探讨腺病毒介导的鼠IL-10(Ad-rIL-10)基因对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠1型糖尿病早期胰岛β细胞的保护作用。方法随机将46只NOD小鼠分为4组:生理盐水对照组10只、糖尿病对照组12只、空载体对照组12只、Ad-rIL-10组12只。除生理盐水对照组外,其他组腹腔注射环磷酰胺诱导糖尿病早期模型。成模后,Ad-rIL-10组立即给予腹腔注射含Ad-rIL-10的重组腺病毒液0.1 mL、空载体对照组给予含Ad-eGFP的重组腺病毒液0.1 mL,其他组给予等量生理盐水。每周检测小鼠体质量、血糖。3周后处死小鼠,留取小鼠血清标本,采用ELISA法测定血清C肽、IFN-γ、IL-4及IL-10水平;制作胰腺标本,免疫组化法观察小鼠胰腺炎症浸润程度和rIL-10局部表达情况。结果与生理盐水对照组相比,成模后其他组血糖水平、体质量变化有明显差异(P均<0.05),血清IFN-γ水平明显增高(P均<0.05),而IL-4、IL-10和C肽水平明显降低(P均<0.05)。糖尿病对照组、Ad-rIL-10组、空载体对照组血糖水平、体质量、胰岛炎症浸润程度及血清学指标变化不明显。结论 Ad-rIL-10基因对NOD小鼠1型糖尿病早期胰岛炎症无明显减轻作用,对残余胰岛β细胞无明显保护作用。

雷公藤多甙对非肥胖糖尿病小鼠胰腺和脾脏Fas及其配体表达的影响

目的观察雷公藤多甙(TWP)对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠1型糖尿病的早期干预作用及探讨可能的机制。方法用环磷酰胺加速发病的NOD小鼠1型糖尿病动物模型,TWP组(30只)小鼠于实验第0～3天和第13～16天每日2次、第4～12天和第17～26天每日1次腹腔注射TWP,每次5mg/kg;对照组(33只)腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。监测血糖,记录糖尿病发病率,采用末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测胰岛细胞凋亡,免疫组织化学法检测B细胞胰岛素含量,半定量逆转录聚合酶链反应检测胰腺和脾脏Fas及其配体(FasL)mRNA的表达。结果TWP组实验结束时的糖尿病发病率为43.3%,显著低于对照组的69.7%(P<0.05)。TWP组的凋亡指数为(5.06±0.85)%,显著低于对照组的(9.04±1.02)%(P<0.01)。TWP组胰岛素表达阳性细胞所占百分比为(57.25±11.69)%,略高于对照组的(46.50±11.25)%(P>0.05)。TWP组的胰腺组织FasmRNA半定量值为0.30±0.11,略低于对照组的0.35±0.05(P>0.05);TWP组的胰腺组织FasLmRNA半定量值为0.80±0.11,显著低于对照组的1.33±0.17(P<0.05)。TWP组的脾脏组织Fas和FasLmRNA半定量值分别为0.40±0.09和1.29±0.17,均显著高于对照组的0.27±0.06和1.06±0.10(P值均<0.05)。结论TWP可预防NOD鼠糖尿病的发生,其机制可能与增加脾脏T淋巴细胞Fas和FasL表达及凋亡,降低胰腺Fas和FasL表达,减少胰岛B细胞凋亡有关。

早期非肥胖性糖尿病小鼠视网膜细胞凋亡

目的:观察糖尿病早期视网膜细胞凋亡情况。方法:NOD雌鼠随机分为糖尿病组(n=10)和正常对照组(n=10),每组在4wk和12wk处死小鼠,摘除眼球并制作组织切片,用TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡。电镜观察视网膜超微结构改变。结果:视网膜神经元病变和微血管病变在糖尿病早期都有发生,糖尿病组视网膜神经节细胞和内皮细胞凋亡数目明显较对照组增多(P<0.01)。结论:视网膜神经元凋亡可促进视网膜神经元病变的发生和发展。

益气定眩饮通过Nod样受体蛋白-3炎性小体调节糖尿病合并缺血性脑卒中大鼠炎症因子的研究

目的:探讨益气定眩饮调节糖尿病合并缺血性脑卒中大鼠Nod样受体蛋白-3(NLRP3)炎性小体及白介素-18(IL-18)、IL-1β炎症因子的作用及机制。方法:将130只SD雄性大鼠复制糖尿病合并缺血性脑卒中动物模型并进行研究,成模后采用随机数字表法分为空白组、模型组、益气定眩饮组、丁苯酞胶囊组、益气定眩饮联合丁苯酞胶囊组。分别给予蒸馏水及相应药物干预3 d后,收集大鼠血清及脑组织。采用神经功能评分法评估大鼠神经功能变化;苏木精-伊红染色法观察脑组织形态结构;酶联免疫吸附测定检测血清炎症因子IL-18、IL-1β水平;逆转录PCR检测NLRP3炎症小体及半胱天冬酶-1(Caspase-1)表达。结果:与空白组比较,模型组均可改变大鼠脑组织结构,神经功能评分、IL-18水平、IL-1β水平、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表达升高(P<0.05);与模型组比较,用药组均可改善大鼠脑病变组织结构,神经功能评分、IL-18水平、IL-1β水平、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表达降低(P<0.05),且与单一用药比较,联合用药组IL-18水平、IL-1β水平、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表达降低(P<0.05)。结论:益气定眩饮可改善糖尿病合并缺血性脑卒中大鼠脑损害,降低脑NLRP3、Caspase-1蛋白及血清IL-18、IL-1β表达,减轻炎症状态,发挥治疗作用,且联合丁苯酞用药效果更佳。

非肥胖糖尿病鼠的致糖尿病T细胞与年龄的相关性

目的研究非肥胖糖尿病(NOD)鼠是否带有致糖尿病的T细胞及其致糖尿病能力是否随着NOD鼠年龄增长而增加。方法用NOD鼠和NOD背景的转基因鼠为动物模型,通过过继转移将不同周龄的NOD鼠T细胞转移到T细胞缺陷的NOD鼠(即NOD.scid鼠)和在β细胞上表达共刺激分子CD80的NOD.scid鼠(即NOD.scid.Rip.B7鼠)。观察过继转移后诱导受鼠糖尿病的发病率及各受鼠组发病率。结果 (1)80%的NOD.scid.Rip.B7鼠在转移脾细胞11 w后发生糖尿病,而NOD.scid受鼠在转移后20 w尚没有1例受鼠发生糖尿病;(2)在转移后同一时间,不同周龄的NOD供鼠在相同受鼠中诱导的糖尿病发病率差异显著(P<0.001);不同周龄的受鼠糖尿病发病率无统计学差异(P>0.05)。结论 (1)幼年NOD鼠的胰岛没有淋巴细胞浸润是因为β细胞特异性的T细胞数有限,其致糖尿病能力随着NOD供体鼠年龄的增长而增加;(2)在胰岛炎启动前,新生的和幼年的NOD.scid鼠就已经表达与疾病有关的β细胞自身抗原。

非肥胖性糖尿病小鼠的早期视网膜病变

目的:研究早期糖尿病视网膜病变的小鼠模型。方法:NOD小鼠随机分为正常对照组(4,12wk组,n=8)和糖尿病组(4,12wk组,n=12),每组取4wk和12wk处死小鼠,光镜和电镜观察视网膜结构的改变。结果:糖尿病组4wk时毛细血管基底膜增厚,可见内皮细胞、周细胞和神经节细胞超微结构改变。12wk时基底膜明显增厚,内皮细胞、周细胞和神经节细胞凋亡增加。结论:在糖尿病早期发生了视网膜神经元细胞超微结构病变和微血管病变。

霉酚酸酯对非肥胖性糖尿病小鼠胰岛炎和胰岛β细胞凋亡的保护作用

目的:探讨霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)对非肥胖性糖尿病小鼠(non-obese diabetic mice,NOD)胰岛炎和胰岛β细胞凋亡的保护作用。方法:8周龄NOD雌性小鼠22只分为两组,每组11只,干预组给予霉酚酸酯30mg/kg灌胃,对照组给予等量的生理盐水。两组小鼠饲养期间定期监测其血糖水平。30天实验结束时,每组取5只小鼠处死,行HE染色观察胰岛炎程度,TUNEL法检测胰岛β细胞凋亡率。余下小鼠观察到发生糖尿病或20周处死。结果:干预前两组小鼠血糖均在正常水平。干预期间和干预期满后,MMF干预组小鼠血糖与生理盐水对照组之间无差异(P>0.05);MMF组胰岛炎严重程度及胰岛β细胞凋亡率较生理盐水对照组明显减轻(P<0.01)。结论:MMF可以在早期抑制NOD小鼠的胰岛炎和胰岛β细胞凋亡,从而减轻胰腺损伤。如果在糖尿病发病前给予MMF可能延缓或防止糖尿病的发生。

非肥胖性糖尿病小鼠干眼模型的初步建立

目的:初步建立非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠蒸发过强型干眼模型,通过研究小鼠眼表组织病理变化,初步探讨其作为糖尿病性干眼模型的可行性。方法:选取40只雌性NOD小鼠,NOD小鼠自发糖尿病为实验组,同时选取未自发糖尿病的NOD小鼠作为正常对照组。实验组NOD小鼠置于40%以下湿度环境,每天皮下注射0.5mg/0.2mL氢溴酸菪胺,并置于可控干燥箱中,每天通风12h,制作蒸发过强型干眼模型。在造模后的第1、7、10、14d采用酚红棉线实验测量泪液分泌量,PAS染色检查结膜杯状细胞形态和数目;在造模后的第10d,进行角膜组织苏木精染色检测角膜上皮变化情况。结果:实验组NOD小鼠泪液分泌量随造模时间而逐渐降低,正常对照组未有明显变化。实验组的结膜杯状细胞体积变大,在造模后的第1d,杯状细胞密度较正常对照组减少(P=0.008),从造模后第7d开始,随时间延长,实验组杯状细胞数量逐渐减少,且较同一时间点正常对照组显著减少(均P<0.001)。此外,观察两组第10d的角膜上皮情况,实验组NOD小鼠角膜上皮层变薄,部分角膜上皮细胞变性、基底细胞水肿。结论:初步建立了NOD小鼠干眼模型,其眼表变化与临床上干眼症表现类似。