胰岛素样生长因子-1基因原核表达载体的构建及表达蛋白的生物学活性

目的构建人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因原核表达载体,并检测表达的重组人IGF-1(rhIGF-1)蛋白的生物学活性。方法以pUC57-hIGF-1质粒为模板,PCR扩增hIGF-1基因,克隆入pTEtrans载体,进行DNA序列分析后,亚克隆入表达载体pTE,转化大肠杆菌W3110,进行诱导表达,表达产物经阳离子交换层析和凝胶过滤层析纯化,并进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析。MTT法检测rhIGF-1促MCF-7细胞的增殖作用。结果转化质粒pTE-hIGF-1的大肠杆菌经诱导后,以可溶性形式表达相对分子质量约为7700的目的蛋白,表达量约占菌体总蛋白的8%。Western blot证实该蛋白具有良好的反应原性,Tricine-SDS-PAGE证实纯度达98%以上,MTT证实具有良好的促MCF-7细胞增殖的作用。结论已成功构建了含hIGF-1基因的原核表达载体,并获得具有生物学活性的高纯度rhIGF-1。

胰岛素样生长因子结合蛋白-6的核定位

目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)在细胞中的定位。方法用重叠PCR法构建IGFBP-6的核定位序列缺失体(pEGFP-C1-BP6ΔNLS)及突变体(pEGFP-C1-BP6-Mut)质粒,与野生型IGFBP-6质粒分别转染PC-3M细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察绿色荧光融合蛋白在细胞中的分布,并计算这些转染阳性细胞中绿色荧光强度的核质比(Fn/c)。结果激光扫描共聚焦显微镜观察显示,野生型IGFBP-6绿色荧光信号在细胞核内聚集分布,与转染EGFP空载体的对照组相比,Fn/c差异具有显著性(P<0.05)。过表达pEGFP-C1-BP6ΔNLS的细胞中,绿色荧光信号在细胞核内聚集的现象消失,在整个细胞呈均匀分布;过表达pEGFP-C1-BP6-Mut的细胞中,细胞核内绿色荧光信号也有所减弱;两者的Fn/c与转染野生型IGFBP-6的细胞相比差异均具有显著性(P<0.05)。结论IGFBP-6可以定位于细胞核内,它在细胞核内的分布与其核定位序列相关,为进一步研究IGFBP-6不依赖于胰岛素样生长因子的生物学活性提供了新的实验依据。

利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达人胰岛素样生长因子-1的研究

目的利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中研制有生物学活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子 1(rhIGF 1)。方法将 15kD人IGF 1(hIGF 1)前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)转移载体pBak PAK8中 ,经与野生型病毒DNA共转染家蚕细胞后 ,通过体内同源重组的方式获得重组病毒BmNPV/IGF 1。以Bm NPV/IGF 1感染 5龄家蚕幼虫 ,分别在感染后 2 4、48、72、96、10 8、12 0h提取家蚕血淋巴液 ,以ELISA法测定不同时象家蚕血中IGF 1浓度 ,采用Western blot分析鉴定IGF 1免疫学活性 ,MTT法观察其对NIH3T3细胞增殖的影响。结果ELISA测定显示 ,BmNPV/IGF 1感染家蚕幼虫后 ,72h起蚕血中IGF 1浓度随感染时间延长而逐渐增高 (19.0 9～ 2 3.36 μg/ml) ,12 0hIGF 1含量达到最高值 (2 3 .36 μg/ml) ,Western blot分析发现表达产物在蚕体内被加工成 7.5kD成熟hIGF 1,并对NIH3T3细胞具有良好促增殖效应 ,其促细胞增殖能力明显优于来源于E .coli的IGF 1标准品。结论具有免疫学活性和生物学活性的rhIGF

糖尿病肾病病人血清胰岛素样生长因子的测定

①目的 探讨血清胰岛素样生长因子 (IGF1)与 2型糖尿病肾病的关系。②方法 采用放射免疫法分别测定 2型糖尿病早期、临床期和肾衰竭期 3组糖尿病肾病病人各 15例的IGF1,胰岛素样生长因子结合蛋白 3(IGFBP3)和生长激素 (GH)水平 ,正常人 15例为对照组。③结果 3组糖尿病肾病病人血清IGF1水平低于正常对照组 (F =5 9.84 ,q =13.6 7～ 16 .10 ,P <0 .0 1) ,且与肾小球滤过率 (GFR)无显著相关 (r =0 .2 5～ 0 .4 1,P >0 .0 5 )。早期糖尿病肾病组的GH与GFR水平呈正相关 (r =0 .6 7,P <0 .0 1) ,且与对照组差异有显著性 (F =3.0 2 ,q=2 .85 ,P <0 .0 5 ) ;早期糖尿病肾病组和临床期糖尿病肾病组的血清IGFBP3明显低于正常对照组和肾衰竭组 (F=9.92 ,q =3.70～ 6 .73,P <0 .0 5 ,0 .0 1) ;除肾衰竭组外 ,其他各组的IGF1与IGFBP3均呈正相关 (r =0 .5 2～ 0 .72 ,P <0 .0 5 ,0 .0 1)。④结论 血清IGF1对 2型糖尿病肾病的致病无重要作用 ;血清生长激素可能存在对 2型糖尿病肾病肾小球硬化的作用 ;IGFBP3为IGF1的主要结合蛋白 ,与其血清浓度一致。

格列吡嗪控释片对2型糖尿病病人血清胰岛素样生长因子的影响

目的 :探讨格列吡嗪控释片对 2型糖尿病病人血糖、胰岛素及胰岛素样生长因子Ⅰ ,Ⅱ (IGF Ⅰ ,Ⅱ )的影响。方法 :糖尿病组初次诊断的 2型糖尿病病人 6 8例 ,对照组健康体检者 4 3例。糖尿病组予格列吡嗪控释片 5～ 10mg ,每日 1次 ,早餐前服用 ,疗程 4wk。观察治疗前后空腹血糖 (FBG)、糖化血红蛋白 (HbA1c)、空腹胰岛素 (FINS)、IGF Ⅰ和IGF Ⅱ的情况。结果 :与对照组比 ,糖尿病组治疗前FINS ,IGF Ⅰ ,IGF Ⅱ水平较低 ,FBG和HbA1c水平较高 (均P <0 .0 1)。治疗后 ,FBG和HbA1c下降 ,FINS ,IGF Ⅰ ,IGF Ⅱ升高 (P <0 .0 1)。结论 :每日服用 1次格列吡嗪控释片可以改善 2型糖尿病病人的糖代谢及血清IGF Ⅰ和IGF Ⅱ的水平。

结肠癌合并2型糖尿病患者胰岛素样生长因子-I表达与淋巴结转移的关系

[目的]探讨结肠癌合并2型糖尿病（T2DM）患者胰岛素样生长因子-I（IGF-I）表达与淋巴结转移的关系.[方法]采用免疫组织化学方法检测38例结肠癌合并T2DM患者和单纯结肠癌患者结肠癌组织中IGF-I表达情况.[结果]结肠癌合并T2DM患者组IGF-I阳性表达率（71.43%）明显高于无糖尿病组（DM）（47.22%）（ P 〈0.05）.有淋巴结转移者占IGF-I阳性表达者中60.6%（20/33）,显著高于IGF-I阴性表达中有淋巴结转移者的比例（37.5%,9/24）.[结论]T2DM可能增加结肠癌淋巴结转移几率.

利用杆状病毒载体高效表达人胰岛素样生长因子-1及其纯化的研究

目的 :利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中研制有生物学活性的重组人胰岛素样生长因子 1(rhIGF 1)。方法 :将 15kDhIGF 1前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)转移载体pBakPAK8中 ,构建重组病毒BmNPV/IGF 1。用BmNPV/IGF 1感染家蚕幼虫 ,提取家蚕血淋巴液 ,采用亲和层析法纯化rhIGF 1,ELISA法测定rhIGF 1含量 ,用SDS PAGE和Western blot分析鉴定rhIGF 1纯度及免疫学活性 ,MTT法观察其对MCF 7细胞增殖的影响。结果 :ELISA测定显示 ,BmNPV/IGF 1感染家蚕幼虫 12 0hrhIGF 1含量达最高值 ( 2 3 36 μg/ml)。rhIGF 1纯度为 4 0 % ,Western blot分析发现主要纯化产物为 7 5kD成熟hIGF 1。细胞活性刺激实验显示 ,纯化后rhIGF 1对MCF 7细胞促增殖能力明显优于来源于大肠杆菌的rhIGF 1产品。结论 :实现了具有免疫学活性及生物学活性rhIGF 1在杆状病毒表达系统的高效表达 ,并使rhIGF

人胰岛素样生长因子Ⅰ在大肠杆菌中的表达

胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)是一种含有70个氨基酸的单链碱性多肽,主要由肝脏合成,大部分存在于血液中。IGF-Ⅰ在神经营养、胚胎发育、生长迟滞和代谢调控等方面具有广阔的临床应用前景,特别是在神经系统变性疾病如肌萎缩侧索性神经炎的应用中,国外已进入Ⅱ、Ⅲ期临床。但是血浆中IGF-Ⅰ含量很低(【1mg/100L血浆),靠纯化天然IGF-Ⅰ根本无法满足基础研究和临床应用。

成纤维细胞生长因子19是胰岛素非依赖性的促餐后肝糖原和蛋白质合成激活剂

成纤维细胞生长因子19（Fibroblast growth factor,FGF19,在啮齿动物称为FGF15）有胰岛素样作用,促进餐后肝糖原和蛋白质合成。在整体动物,血糖正常的野生型小鼠给予FGF19,肝脏组织Western blot检测发现,FGF19促ERK1/2（Thr202/Tyr204）、丝裂素活化蛋白激酶作用激酶1,Mnk1（Thr197/202）、

类胰岛素生长因子结合蛋白IGFBP-3的研究进展

类胰岛素生长因子(Insulin-like growth factor,IGF)信号系统是进化上非常保守的信号转导途径,包括2个IGF配体、2个IGF受体和6个IGF结合蛋白(IGF binging protein,IGFBP)。IGFBP能结合IGF并调节其作用。IGFBP-3是血液中主要的IGF载体蛋白。离体(in vitro)实验研究发现,IGFBP-3可以抑制或促进IGF的作用,在缺乏IGF受体的细胞中IGFBP-3仍然具有活性。由此可见,IGFBP-3除了具有IGF依赖性作用,还具有IGF非依赖性作用。此外还发现IG-FBP-3能定位于细胞核并与类视黄醇X受体-α(Retinoid X receptor-α,RXRα)结合。越来越多的研究结果显示出IGFBP-3在生物体内作用的复杂性,使探讨IGFBP-3体内(in vivo)作用机制的研究成为热点。本文综述了IGFBP-3的功能、作用机制,与肿瘤、血管生成的关系,以及正常状态下IGFBP-3的生理功能。

瘦素、胰岛素样生长因子-I与阴虚热盛、气阴两虚型2型糖尿病关系的探讨

目的:探讨阴虚热盛、气阴两虚型2型糖尿病与瘦素、胰岛素样生长因子-Ⅰ的关系。方法:设立阴虚热盛组、气阴两虚组和正常对照组,分别检测各组的瘦素和胰岛素样生长因子-Ⅰ的含量。结果:2型糖尿病阴虚热盛型和气阴两虚型患者瘦素水平均明显高于正常对照组,其中气阴两虚组>阴虚热盛组,而且男女各组相同。2型糖尿病阴虚热盛型和气阴两虚型患者的胰岛素样生长因子-Ⅰ水平均明显低于正常对照组,其中气阴两虚组<阴虚热盛组。结论:瘦素、胰岛素样生长因子-Ⅰ是阴虚热盛、气阴两虚型2型糖尿病的辨证依据之一。也为气病是糖尿病的基本病机提供了依据。

非小细胞肺癌化疗 热疗前后胰岛素抗生长因子 肿瘤坏死因子的变化

肺癌是常见的恶性肿瘤之一，近年来其发病率和病死率持续上升，随着免疫学、分子生物学、基因工程技术的飞速发展，肺癌的发病机制日益受到关注。联合化疗是目前治疗晚期肺癌的重要方法之一，大量的临床实践与生物实验表明热疗联合放疗或化疗有明显的互补与增敏效果。本研究通过检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者化疗、热疗＋化疗前后血清中胰岛素样生长因子（IGF）和肿瘤坏死因子（TNV）的水平。并与健康对照进行比较，寻找其变化规律。现报告如下。

非胰岛素依赖型糖尿病肾病肾组织中EGF,EGF-R和IGF-1R的检测及意义

应用免疫组化定量分析法,首次对12例非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)肾病患者肾活检组织中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)受体、表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EGF-R)进行了观察,并结合患者病程、糖尿病肾病分期和肾功能进行了比较。发现NIDDM肾病患者肾小管上EGF和EGF-R的量明显高于正常人。正常人肾小球内EGF染色阴性,4例NIDDM肾病患者肾小球系膜区EGF阳性,且均伴明显系膜细胞和系膜基质增生。正常人和NIDDM肾病患者肾小球内IGF-1受体均为阴性,肾小管上IGF-1受体的量在二者之间也无明显差异。上述结果表明,肾小管上EGF和EGF-R含量增加可能参与NIDDM肾病的发病过程,而肾小球内EGF的出现则提示其与系膜细胞和系膜基质增生有关。

IGFBP-3高效可溶表达、纯化及生物学活性初步研究

克隆胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)的cDNA片段,构建原核表达载体pET-DsBA-IGFBP3。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS中,诱导表达IGFBP-3融合蛋白(简称D-IGFBP3)。经检测融合蛋白主要以可溶形式表达。表达产物用His亲和层析柱纯化,获得了纯度超过95%的重组IGFBP-3融合蛋白。Western-blot结果表明在相应分子量处有一条特异性条带。细胞活性研究显示它对MCF-7细胞生长具有一定的抑制作用,且在体外具有与IGF-I结合的活性。

骨松康含药血清对成骨细胞生物学活性的影响

目的观察骨松康对体外培养成骨细胞增殖和分化的影响。方法分离培养乳鼠颅骨成骨细胞,加入中药骨松康吸收后血清,流式细胞仪和碱性磷酸酶活性检测、骨钙素免疫组化染色、矿化结节计数分析其对成骨细胞增殖和分化的影响。结果以含药血清培养的成骨细胞,S期细胞比例增多,说明细胞DNA的合成增加;碱性磷酸酶活性及骨钙素表达增强;形成矿化结节数及分泌胰岛素样生长因子I(IGF-1)的含量均明显高于对照血清组(P<0·01)。结论骨松康含药血清能直接促进体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、分泌和矿化,提高了成骨细胞骨形成功能。

蛇毒神经生长因子的应用研究进展

神经生长因子（nerve growth factor，NGF）是神经营养因子（neurotrophic factors）家族的典型代表。神经营养因子家族成员众多，除NGF外，还有成纤维细胞生长因子、睫状神经营养因子、白血病抑制因子、胶质源神经营养因子、胰岛素样生长因子等。它们在氨基酸序列上具有高度的同源性，有相似的生物学活性。

血清胰岛素样生长因子-Ⅱ与2型糖尿病外周神经病变的关系研究

目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)与2型糖尿病外周神经病变的关系。方法将2005年6月至2006年1月浙江大学医学院附属第一医院内分泌科收治的71例2型糖尿病非外周神经病变患者(A组)、77例2型糖尿病外周神经病变患者(B组)及30名健康对照者(C组)纳入研究,测定3组血清IGF-Ⅱ。A、B组加测静脉空腹血糖、胰岛素等相关临床指标及神经电生理检查。结果B组血清IGF-Ⅱ低于A组和C组,差异有显著性意义(P<0.05),C组和A组间血清IGF-Ⅱ差异无显著性意义(P>0.05);血清IGF-Ⅱ与神经传导速度呈正相关(P<0.05);血清IGF-Ⅱ是2型糖尿病外周神经病变的主要相关因素(P<0.05)。结论2型糖尿病外周神经病变患者血清IGF-Ⅱ明显下降,且IGF-Ⅱ降低与2型糖尿病外周神经病变的发生有关。

胰岛素样生长因子结合蛋白-3与生长发育关系的研究进展

胰岛素样生长因子结合蛋白-3(insulin-like growth factor binding protein-3,IGFBP-3)是血清中IGF的主要结合蛋白,近年来有关IGFBP-3的研究取得重要进展,IGFBP-3不仅通过调控IGF的生物学活性对生长发育起影响,而且其自身也有促细胞分裂作用。本文就IGFBP-3与生长发育关系的研究进展作一综述。