非膜重组血红素加氧酶系中各分子对血红素降解的作用

利用高效液相色谱分别检测NADPH—细胞色素C还原酶、血红素加氧酶、胆绿素还原酶及三者混合物催化血红素降解的产物.发现由NADPH—细胞色素C还原酶和血红素加氧酶的联合活性使血红素氧化降解产生专一性的胆绿素Ⅸ_α.然后,这种胆色素又被胆绿素还原酶催化还原成胆红素Ⅸ_α,利用Sepharose-4B柱亲和层析,进一步证明上述三种酶之间存在强烈的相互作用,形成酶的三元复合物.这种复合物通过SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离产生原来的三种酶,浓度近似于等摩尔比.

血红素加氧酶系的共固定化及部分性质研究

为了检测血红素加氧酶系分子间的相互作用和共固定化酶系的反应动力学，利用２′，５′－ＡＤＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱对血红素加氧酶、ＮＡＤＰＨ－细胞色素ｃ还原酶和胆绿素还原酶进行非膜重组，再以纤维素为载体，用重氮化法固定此重组的酶复合物和共固定非重组的３种酶，发现固定化的重组酶系比非重组酶系能更好地发挥协同作用，在室温条件下可催化血红素一步合成胆红素．共固定化酶的最适ｐＨ为７．２，最适温度为３８℃，Ｋｍ值为０．９３μｍｏｌ／Ｌ．巯基试剂和金属卟淋对固定化酶有抑制作用，共固定化酶比游离酶系稳定性提高，３８℃下的操作半寿期可延长至４２０ｈ，在０～４℃保存两个月其酶活力无明显变化．