郑州市新生儿非衍生化法氨基酸和酰基肉碱参考区间的制定

目的制定符合郑州市出生新生儿的氨基酸和酰基肉碱参考区间,为诊断氨基酸代谢病、脂肪酸β氧化障碍、有机酸代谢病提供依据,为评价氨基酸和肉碱营养状态提供基础数据。方法利用非衍生化串联质谱法对2016年8月至2019年9月在郑州市出生的足月新生儿61199例足跟血样本中氨基酸和酰基肉碱进行检测,通过SPSS 19.0软件,单样本Kolmogorov-Smirnov检验判断数据是否符合正态分布,根据是否符合正态分布来确定参考范围区间。结果郑州市新生儿遗传代谢病筛查11种氨基酸和31种肉碱为非正态分布,95%参考区间分别为(μmol·L^-1):丙氨酸(Ala)(191.973~525.634),精氨酸(Arg)(1.091~31.615),瓜氨酸(Cit)(8.509~26.006),甘氨酸(Gly)(292.654~936.183),亮氨酸(Leu+Ile)(112.876~292.379),蛋氨酸(Met)(11.488~36.253),鸟氨酸(Orn)(53.421~213.755),苯丙氨酸(Phe)(40.067~92.042),脯氨酸(Pro)(126.468~329.280),酪氨酸(Tyr)(55.688~244.478),缬氨酸(Val)(95.491~244.857),游离肉碱(C0)(10.218~38.323),乙酰基肉碱(C2)(8.594~38.262),丙酰基肉碱(C3)(0.703~3.918),丙二酰基肉碱(C3DC/C4OH)(0.036~0.248),丁酰基肉碱(C4)(0.092~0.332),甲基丙二酰基肉碱(C4DC/C5OH)(0.159~0.472),异戊酰基肉碱(C5)(0.057~0.257),甲基巴豆酰基肉碱(C5∶1)(0.002~0.049),戊二酰基肉碱(C5DC/C6OH)(0.054~0.227),己酰基肉碱(C6)(0.018~0.077),己二酰基肉碱(C6DC)(0.016~0.043),辛酰基肉碱(C8)(0.036~0.157),辛烯酰基肉碱(C8∶1)(0.049~0.241),癸酰基肉碱(C10)(0.034~0.182),癸烯酰基肉碱(C10∶1)(0.028~0.149),癸二烯酰基肉碱(C10∶2)(0.005~0.095),十二烷酰基肉碱(C12)(0.026~0.207),十二烯酰基肉碱C12∶1(0.013~0.150),十四烷酰基肉碱(C14)(0.070~0.316),十四烯酰基肉碱(C14∶1)(0.032~0.249),十四二烯酰基肉碱(C14∶2)(0.006~0.058),3-羟基十四烷酰基肉碱(C14OH)(0.004~0.030),十六烷酰基肉碱(C16)(0.802~5.460),十六烯酰基肉碱(C16∶1)(0.037~0.334),3-羟基十六烷酰基肉碱(C16OH)(0.007~0.053),3-羟基十六烯酰基肉碱(C16∶1OH)(0.014~0.061),十八烷酰基肉碱(C18)(0.301~1.290),十八烯酰基肉碱(C18∶1)(0.575~2.071),十八二烯酰基肉碱(C18∶2)(0.077~0.481),3-羟基十八烷酰基肉碱(C18OH)(0.003~0.024),3-羟基十八烯酰基肉碱(C18∶1OH)(0.007~0.032)。结论非衍生化法测定干血斑中氨基酸和酰基肉碱浓度,建立合理参考区间,可为郑州市新生儿群体筛查提供参考依据,更好地促进郑州市群体筛查的管理。

非衍生化-气相色谱法测定人血清游离脂肪酸谱

目的 :建立非衍生化 气相色谱法 (GC)测定人血清游离脂肪酸 (FFA)谱的方法。 方法 :采用GC法测定血清FFA。色谱柱为化学键合相FFAP毛细管柱 (30m× 0 .32mmI.D ,涂层厚 0 .2 5 μm) ,火焰离子化检测器。血清样品前处理方法为 :以庚酸 (C7∶0 )和正十七酸 (C1 7∶0 )为内标 ,用正己烷 异丙醇 (4∶1 ,v/v)提取血清中FFA后直接进样。 结果 :除乙酸和丙酸外 ,其余脂肪酸的回收率在 81 .0 8%～ 1 1 8.2 9%。日内变异系数均 <8.95 % ,日间变异系数均 <8.4 7% ,用各FFA与内标色谱峰面积的比值对浓度做标准曲线 ,γ2 在 0 .992 5～ 0 .9998。 结论 :该方法简便可靠 ,符合生物样品的分析要求 。

应用串联质谱法建立正常儿童干血斑氨基酸及酰基肉碱的参考区间

目的确立本实验室串联质谱法正常儿童血斑中氨基酸及酰基肉碱指标的医学参考范围,为检测结果的判读提供依据。方法采用串联质谱检测试剂盒(非衍生化法),对郑州大学附属儿童医院儿保科送检的3642例儿童干血滤纸片进行遗传代谢病筛查。结果各种氨基酸及酰基肉碱的参考区间:C0为10.22~69.90μmol/L,C2为4.14~43.41μmol/L,C3为0.29~4.00μmol/L,C4为0.02~0.39μmol/L,C5为0.01~0.21μmol/L,C6为0.01~0.10μmol/L,C8为0.00~0.15μmol/L,C10为0.00~0.19μmol/L,C12为0.01~0.10μmol/L,C14为0.01~0.23μmol/L,C16为0.18~2.66μmol/L,C18为0.00~1.11μmol/L;Gly 92.39~717.56μmol/L,Ala 71.60~622.21μmol/L,Pro 61.12~297.14μmol/L,Val 47.21~303.31μmol/L,Leu 44.06~362.47μmol/L,Orn 36.30~276.85μmol/L,Met 2.82~50.79μmol/L,Phe 14.62~81.89μmol/L,Arg 0.71~58.95μmol/L,Cit 5.02~40.46μmol/L,Tyr 18.42~272.73μmol/L。结论建立了本实验室儿童的各种氨基酸及酰基肉碱的参考区间,为临床诊治和筛查遗传代谢病提供了参考依据。

串联质谱技术在新生儿遗传代谢性疾病筛查中的应用进展

遗传代谢性疾病多是由于单基因缺陷引起代谢途径阻断所致,多发生于儿童时期,呈进行性加重,对患儿危害极大,甚至病死。对于新生儿遗传代谢性疾病的筛查,串联质谱技术深受临床推崇,是新生儿筛查史的技术革新,以提升诊断水平,提高对新生儿遗传代谢性疾病筛查的准确性。本文通过阐述串联质谱技术的基本原理,分析其临床应用情况。

15-羟基十五烷酸合成环十五内酯体系定量分析方法比较

为探寻合适的15-羟基十五烷酸合成环十五内酯反应体系定量分析方法,采用液相色谱法、气相色谱非衍生化法和衍生化法分别对样品中15-羟基十五烷酸和环十五内酯进行分析。结果表明:液相色谱法15-羟基十五烷酸保留时间为6.21 min,环十五内酯保留时间为16.32 min,但在样品中的色谱峰不明显。采用SH-Stabilwax-DA酸性专用色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25μm)的气相色谱检测15-羟基十五烷酸,非衍生化法和衍生化法的RSD值分别为1.36%~2.23%和2.17%~3.44%。利用非衍生化法同时测定15-羟基十五烷酸和环十五内酯,RSD值分别为1.36%~2.23%、2.18%~3.48%。非衍生化法无需经过复杂的衍生化直接进样,可对15-羟基十五烷酸和环十五内酯同时分析,操作简便。