南宁地区种猪源非解乳糖链球菌的分离鉴定及其益生性研究

研究旨在从健康种猪新鲜粪便分离鉴定非解乳糖链球菌,并研究其益生特性,为该菌种的应用提供依据。通过16S rRNA的方法鉴定出非解乳糖链球菌,用平板打孔法研究其抑菌性能,以IPEC-J2为细胞模型研究非解乳糖链球菌的粘附性,并利用酸性培养基、胆盐培养基和模拟胃肠液来研究其抗逆能力。结果表明,从26份种猪粪便样品中分离鉴定到12株非解乳糖链球菌,其中RU-6和M-11菌株具有较好的益生性。两个菌株在MRS培养基上均为白色光滑、圆形凸起、不透明的菌落,在显微镜下的细胞呈卵圆形。RU-6对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、荧光假单胞菌的抑制能力较好,M-11对大肠埃希氏菌、荧光假单胞菌和单核细胞增生李斯特氏菌的抑制能力较好,抑菌圈直径均达到10 mm以上。两株菌在pH 2.0的环境下能够存活,能耐受0.5%胆盐浓度,RU-6菌株对猪小肠上皮细胞IPEC-J2粘附率为15.21(CFU/个细胞)。由此可见,RU-6菌株具有作为益生菌应用的潜力。

非解乳糖链球菌FGM对大肠杆菌感染肉鸡肠道健康的影响

本试验旨在研究非解乳糖链球菌FGM对大肠杆菌感染肉鸡肠道健康的影响。选用150只1日龄白羽肉鸡,随机分为3组,每组50只,试验期21 d,饲喂基础日粮。1~10日龄时,空白对照组(BG)和模型组(EG)每只鸡每日灌服0.2 mL的生理盐水,非解乳糖链球菌(FGM)组每只鸡每日灌服0.2 mL浓度为1×10^9 CFU/mL的FGM菌液。FGM组和EG组鸡于14日龄时,灌服1次0.2 mL浓度为6×10^8 CFU/mL大肠杆菌O78菌液。分别于攻毒后第0、1、3和7天,观察各试验组鸡十二指肠肠绒毛结构,检测十二指肠sIgA含量、MPO、GSH-PX和SOD活力及T-AOC含量。结果显示,FGM组鸡十二指肠肠绒毛较EG组完整,MPO活力显著低于EG组(P<0.05),sIgA含量显著高于EG组(P<0.05),GSH-PX和SOD活力与T-AOC含量高于EG组。结果提示,分离于鸡盲肠的非解乳糖链球菌可通过保护肠绒毛结构、调节肠道免疫力与抗氧化能力,增强鸡抗感染力,发挥保护肠道健康的效果。

益生菌FGM葡萄糖激酶基因(glcK)在黄芪发酵中的表达

旨在分析益生菌FGM在黄芪发酵过程中的生长动态,为阐述其作用机理奠定基础。采用平板计数法对益生菌FGM在黄芪发酵中的生长动态进行检测,同源克隆法克隆糖酵解途径中的限速酶葡萄糖激酶glcK基因序列,并运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术分析其在黄芪发酵不同阶段的表达水平。结果表明:成功克隆得到glcK基因一段382bp的片段(GenBank登录号JX976291),其序列一致性为83%～85%。实时荧光定量PCR结果显示,在FGM发酵6h内,glcK基因表达上调且呈逐渐上升趋势,至对数期后期6h表达水平达到最高(4.63倍);稳定期初期8h时表达水平显著下降(P<0.05),10h至发酵结束基因表达下调。可见:在黄芪发酵6h内FGM处于对数生长期,葡萄糖经糖酵解途径代谢产生ATP供细菌生长代谢利用,10h后开始进入稳定期并进行次级代谢。

响应面法优化益生菌FGM发酵黄芪多糖的提取工艺

为确定益生菌FGM发酵黄芪多糖的最佳提取工艺,本试验以发酵黄芪多糖含量为考察指标,采用响应面法对工艺的提取参数进行优化,并建立回归模型。结果显示,提取时间、提取温度和料液比对发酵黄芪多糖的含量影响显著,并且两两因素间存在一定的交互作用;影响发酵黄芪多糖提取含量的工艺因素按主次顺序排列为:料液比>提取温度>提取时间;乳酸菌发酵黄芪液多糖提取最佳工艺为:提取时间65min、提取温度80℃、料液比为1∶9,在此条件下,发酵黄芪多糖的含量为6.72mg/mL。试验证明该工艺可行,可为新兽药开发提供参考。