非转移性黑素瘤糖蛋白基因沉默抑制黑素小体形成的机制探讨

目的:探讨非转移性黑素瘤糖蛋白[glycoprotein(transmembrane)nonmetastatic melanoma proteinb,GPNM]B基因沉默抑制黑素小体形成的作用机制。方法:以黑素细胞系PIG1为研究对象,采用小干扰RNA(siRNA)干扰法下调GPNMB基因的表达,以实时定量反转录(RT)-PCR和Western blot法检测GPNMB-siRNA转染对GPNMB、酪氨酸酶(Tyr)、酪氨酸相关蛋白1(Trp1)、OA1和Pmel17的影响,进一步采用Tyr-siRNA转染PIG1细胞下调Tyr基因的表达以验证GPNMB与Tyr之间的相互作用,并检测GPNMB基因沉默对小眼畸形相关转录因子(MITF)的影响。结果:GPNMB-siRNA转染对GPNMB、Tyr、Trp1、Pmel17和OA1等黑素小体蛋白的表达均有显著抑制作用;GPNMB与Tyr之间无相互作用;GPNMB-siRNA转染或中波紫外线(UVB)单独作用能够上调MITF的表达,但两者共同作用却能显著抑制MITF的表达。结论:GPNMB基因沉默对黑素小体形成的抑制作用不依赖于MITF。

血清糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B对表皮生长因子受体扩增伴随突变的非小细胞肺癌预后的预测作用

目的评估游离的糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B(GPNMB)对表皮生长因子受体(EGFR)扩增伴随突变的非小细胞肺癌(NSCLC)患者的耐药和预后的预测价值。方法选取2018年3月至2019年9月在唐山市人民医院接受治疗的55例EGFR扩增伴随突变的NSCLC患者作为观察组,患者均应用EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)作为一线治疗方案;随机选取同期体检中心67例健康人群血液样本作为对照组。比较2组游离GPNMB表达水平;采用t检验或χ2检验分析GPNMB表达和患者临床病理特征的相关性;结合临床疗效,评估其作为耐药标志物的价值。随访患者的无进展生存时间(PFS),并采用多因素Cox回归分析影响EGFR扩增伴随突变NSCLC患者生存的独立危险因素。结果与对照组相比,观察组游离GPNMB表达水平显著升高。观察组游离GPNMB水平和EGFR-TKI的临床疗效显著相关(P=0.016),GPNMB高表达患者的耐药程度更强,PFS也更短(P=0.032)。游离GPNMB高水平(HR=4.029,95%CI:1.942~8.358,P<0.001)是影响患者生存的独立危险因素。结论EGFR扩增伴随突变的NSCLC患者游离GPNMB表达水平显著上调;且其高表达与患者耐药程度的增强及不良预后显著相关,是影响患者生存的独立危险因素。

非转移性黑素瘤糖蛋白B对黑素瘤细胞增殖、迁移及黑素形成的影响

目的探讨非转移性黑素瘤糖蛋白B（GPNMB）对黑素瘤细胞增殖、迁移及黑素形成的影响。方法以人原代黑素细胞、黑素瘤细胞系M14、G-361为研究对象，采用免疫荧光法检测GPNMB表达量。细胞分为三组，实验组加入GPNMB—siRNA，阴性对照组加入阴性对照-siRNA，空白对照组为未经处理的细胞。实时定量逆转录（RT）-PCR检测GPNMB—siRNA的转染效率，以噻唑蓝法和Transwell小室法分别检测细胞的增殖及侵袭能力，并用分光光度计检测黑素水平，结果进行t检验分析。结果GPNMB—siRNA转染下调了GPNMBmRNA及蛋白的表达水平，并显著抑制黑素瘤细胞的增殖和迁移能力。其中黑素瘤M14细胞和G361细胞的增殖能力分别降低35％和40％，迁移能力分别降低49％和51％；同时，黑素细胞、黑素瘤M14细胞和G361细胞黑素形成分别降低73％、82％和69％。结论GPNMB缺失能抑制黑素瘤的增殖、迁移以及黑素瘤中黑素的形成，表明GPNMB在黑素瘤的发生发展中起重要作用。

糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B与免疫治疗

糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B(glycoprotein non-metastatic melanoma protein B,GPNMB)是一种I型跨膜蛋白,多富集在癌细胞表面,在巨噬细胞和小胶质细胞中呈高表达。GPNMB在肿瘤进展及免疫反应中发挥了重要作用,其胞外结构域与整合素相互作用,能促进免疫抑制,并能促进血管生成细胞募集到肿瘤微环境,从而影响肿瘤的免疫反应,有可能可作为免疫治疗及靶向治疗的潜在靶点。

糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B对人肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响及其分子机制

目的:研究糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B(glycoprotein nonmetastatic melanoma protein B,GPNMB)对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响及其分子机制。方法:以人HepG2细胞为研究对象,构建GPNMB的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)以及过表达载体,转染入细胞后分别采用MTT法、流式细胞术和Transwell小室法观察其对HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果:增殖实验结果表明GPNMB可促进HepG2细胞的增殖;流式细胞术检测发现GPNMB对HepG2细胞凋亡几乎无影响;细胞侵袭结果表明GPNMB可促进HepG2细胞的侵袭;当整合素β1亚基基因被siRNA沉默后,GPNMB对HepG2细胞增殖和侵袭的促进作用均受到明显抑制。结论:GPNMB可能通过与整合素β1亚基相互作用促进肝癌细胞的增殖和侵袭能力,提示GPNMB可以作为治疗肝癌的潜在靶点。

非转移性黑色素瘤糖蛋白B在增生性玻璃体视网膜病变及视网膜色素上皮细胞中的作用

目的研究非转移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein non-metastatic melanoma protein b,GPNMB)在增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)及视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞中的作用。方法首先,采用免疫荧光法对18例PVR患者行玻璃体切除术时切除的视网膜进行定量分析;酶联免疫吸附试验检测PVR患者血清中GPNMB的含量;然后,以人RPE细胞为研究对象,构建GPNMB的siRNA以及过表达载体,转染入细胞后采用MTT法和流式细胞仪观察其对RPE细胞增殖、细胞周期的影响。结果免疫荧光实验表明,随着PVR增生膜病变程度的加重,其GPNMB的荧光强度加强,A、B、C级PVR的增生膜中GPNMB阳性荧光总量分别为5.07、11.21、19.34;酶联免疫吸附试验结果显示,PVR患者血清中GPNMB的含量远高于对照组;细胞增殖实验结果表明,GPNMB过表达可以显著促进RPE细胞的增殖,其OD值是对照组的3.7倍;然后以GPNMB过表达的人RPE细胞为研究对象,结果表明GPNMB-siRNA转染组可以显著抑制RPE细胞的增殖;流式细胞仪检测发现GPNMB对RPE细胞周期有显著影响。结论 GPNMB作为RPE细胞中的一个关键分子,通过细胞周期调控途径影响其增殖,为进一步研究GPNMB在PVR中的作用及机制奠定了基础。

非转移性黑色素瘤糖蛋白B在不同类型肿瘤中的作用

恶性肿瘤是危害人类健康的重大疾病之一，虽然目前临床上有多种治疗手段，如手术、化疗、放疗等，但其发病率和病死率仍然居高不下。近年来，一种新型疗法——肿瘤分子靶向治疗因其具有疗效高、副作用低的特点而备受瞩目。肿瘤分子靶向治疗是利用特异性的分子封闭或抑制相关分子靶点，从而抑制肿瘤细胞的生长、转移或诱导其凋亡。

非转移性黑色素瘤糖蛋白B对脑缺血再灌注小鼠的神经保护作用

目的探讨非转移性黑色素瘤糖蛋白B(GPNMB)对脑缺血再灌注小鼠的神经保护作用。方法将20只雄性C57小鼠随机分为磷酸缓冲盐溶液(PBS)组和GPNMB组,每组10只。采用线栓法栓塞大脑中动脉建立脑缺血小鼠模型,栓塞2 h后再灌注,GPNMB组经栓塞侧颈内动脉内注射4μL的50 ng/μL GPNMB,PBS组经颈内动脉给予注射等量的PBS。给予小鼠药物干预并再灌注24 h后处死,处死前进行行为学缺陷评分,制作脑组织切片,计算梗死体积。结果GPNMB组的脑梗死体积小于PBS组,栓塞再灌注后2 h、给药干预再灌注后24 h的行为学缺陷评分均低于PBS组(均P<0.05)。结论GPNMB可以减小脑缺血再灌注小鼠的脑梗死体积,并改善其梗死后行为学缺陷。

非转移性黑色素瘤糖蛋白B与肥胖及相关疾病的研究进展

非转移性黑色素瘤糖蛋白B(Gpnmb)是一种在低转移潜能黑色素瘤细胞系中首次发现的Ⅰ型跨膜糖蛋白。近年来研究发现,肥胖可促进脂肪组织Gpnmb的表达及分泌,同时,Gpnmb可通过增加体质量、促进脂质合成、加重胰岛素抵抗导致肥胖及其相关疾病的发生,因此,Gpnmb有望成为预测和治疗肥胖及相关疾病的新靶点,本文就其与肥胖及相关疾病研究进展进行综述。

非转移性黑色素瘤糖蛋白B对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭影响的研究

目的研究非转移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein(transmembrane)nonmetastatic melanoma protein b,GPNMB)对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭的影响。方法采用RT-PCR及Western blot法检测口腔鳞癌组织、口腔鳞癌细胞中GPNMB的表达变化;构建GPNMB-siRNA载体,转染细胞后分别采用MTT法、Transwell小室法观察其对Tca-8113细胞增殖、侵袭的影响。结果 GPNMB在口腔鳞癌组织及口腔鳞癌细胞中均呈现高表达;增殖实验结果表明GPNMB-siRNA可显著抑制Tca-8113增殖;细胞侵袭结果表明GPNMB-siRNA可显著抑制Tca-8113侵袭。结论 GPNMB在口腔鳞癌细胞的增殖和侵袭中起着重要作用。

GPNMB与非小细胞肺癌患者肿瘤免疫浸润和预后的相关性

目的探讨糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B(GPNMB)表达在非小细胞肺癌(NSCLC)中的临床意义。方法选取2016年4月—2018年4月唐山市人民医院NSCLC患者124例。收集所有患者的癌组织和癌旁组织(距离肿瘤边缘2~3 cm)样本,采用免疫组化法检测癌组织和癌旁组织CPNMB表达水平,同时检测癌组织样本中CD44、CD206、F4/80的表达情况,依据3项指标的表达情况将所有患者分为高免疫浸润组和低免疫浸润组。收集所有患者的临床病理资料。对所有患者进行随访,随访时间为4.5~36.0个月。采用Kaplan-Meier生存曲线和Log-rankχ^(2)检验评估NSCLC患者的生存情况。结果与癌旁组织比较,癌组织GPNMB表达显著上调(P<0.001)。不同TNM分期的NSCLC患者之间GPNMB表达差异有统计学意义(P<0.001),不同年龄、性别和组织分型的NSCLC患者之间GPNMB表达差异均无统计学意义(P>0.05)。高免疫浸润组GPNMB高表达的比例显著高于低免疫浸润组(P<0.001)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,GPNMB高表达组、中表达组、低表达组总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)逐渐延长,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NSCLC患者GPNMB呈高表达,且与肿瘤免疫浸润程度和预后不良有关。

非小细胞肺癌P-糖蛋白及耐药相关蛋白的表达与临床意义

化疗成为晚期肺癌的主要治疗方法。然而非小细胞肺癌(NSCLC)对化疗多不敏感,多药耐药的产生是化疗失败的主要原因。研究发现多药耐药糖蛋白的过度表达与MDR具有相关性,但在临床中发现有部分P-糖蛋白(Pgp)表达阴性的患者仍有MDR产生。

GPNMB、ERK、MMP3和MMP9在肾癌原发灶和骨转移灶中的表达及相关性分析

目的探讨GPNMB、ERK、MMP3和MMP9在肾癌原发灶和骨转移灶中的表达及意义并分析其表达的相关性。方法免疫组织化学法检测肾癌原发灶和骨转移灶中GPNMB、ERK、MMP3和MMP9的表达,并分析其结果与患者的临床指标之间的关系。结果 GPNMB在肾癌原发灶和骨转移灶中的表达量分别为3.65±1.87和5.91±3.68。GPNMB高表达组患者中发生中轴骨转移、四肢骨转移、中轴骨和四肢骨均转移的例数分别是4例、1例、3例,低表达组患者中的例数分别为10例、5例、0例(P=0.035)。ERK、MMP3和MMP9在GPNMB原发灶高表达组和低表达组中的表达量分别是7.25±2.55 vs.2.47±0.64、5.25±1.91 vs.2.33±0.49和7.00±2.98 vs.2.27±0.46(均P<0.05)。在GPNMB骨转移灶高表达组和低表达组中的表达量分别是7.45±3.67 vs.3.75±1.66、6.45±2.62 vs.3.25±0.75和7.27±3.66 vs.3.42±0.67(均P<0.05)。结论肾癌原发灶中GPNMB的表达可在一定程度上预测肾癌骨转移的范围,肾癌原发灶和骨转移灶中GPNMB的高表达与ERK、MMP3和MMP9高表达相关。

非转移性黑色素瘤糖蛋白B在急性肾缺血再灌注损伤中的表达及与巨噬细胞表型的关系

目的观察非转移性黑色素瘤糖蛋白B（glycoprotein non—metastatic melanoma protein B，Gpnmb）在急性肾缺血再灌注损伤（IRI）肾脏和尿液中的表达，分析其与M1、M2表型巨噬细胞的相关性，探讨其在IRI免疫炎性反应损伤中的作用。方法C57BL／6J小鼠被随机分为3组：正常对照组（n=4）、假手术组（n=4）、IRI组（n=12）。以双侧肾蒂血管阻断30min建立IRI模型。PAS染色观察肾脏病理改变；免疫荧光双染色及流式细胞术检测Gpnmb和巨噬细胞标志物F4／80蛋白的表达及分布；实时荧光定量PCR检测Gpnmb及M1型巨噬细胞表型（CD40、CCR7）及M2型巨噬细胞表型（CDl63、MMR）在肾脏中的mRNA表达；Western印迹和ELISA法检测小鼠尿液中Gpnmb的表达。结果IRI小鼠肾脏。肾小管上皮细胞脱落，肾间质内可见大量炎性细胞浸润。实时荧光定量PCR结果显示，与正常对照组、假手术组比较，IRI组小鼠肾脏GpnmbmRNA于造模后第1天和第2天升高，差异有统计学意义（P〈0．01），第3天下降至接近正常水平。免疫荧光双染色及流式细胞术检测结果均显示Gpnmb蛋白主要表达在F4／80阳性的巨噬细胞内。GpnmbmRNA表达与M1型巨噬细胞表型（CD40、CCR7）的mRNA表达无相关性，与M2型巨噬细胞表型（CDl63、MMR）的mRNA表达呈正相关。Western印迹和ELISA结果示IRI组小鼠在造模后第1天尿液中的Gpnmb表达显著升高，与正常对照组和假手术组比较差异有统计学意义（P〈0．01），第3天降至接近正常水平。结论Gpnmb在IRI肾脏的巨噬细胞和尿液中呈高表达，并与M2型巨噬细胞相关，提示Gpnmb可能参与了巨噬细胞的分型和急性肾损伤的炎性反应过程，临床上也可用作AKI早期诊断的生物学标志物。

糖蛋白非转移性黑色素瘤B在小鼠慢性肠道纤维化中的表达及意义

目的探讨糖蛋白非转移性黑色素瘤B(Gpnmb)在小鼠慢性肠道纤维化中的作用。方法12只BALB/c小鼠随机平均分为模型组和对照组,模型组给予含2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)的饮用水建立慢性肠道纤维化模型,对照组不做处理。计算小鼠的体质量、结肠长度、结肠组织形态学评分和组织学损伤评分。采用HE染色评估结肠炎症程度,Masson染色评估结肠纤维化程度,免疫组织化学法和Western blot测定结肠组织中Ⅰ型胶原蛋白α2(Col1α2)、Gpnmb及其受体CD44蛋白表达水平,荧光定量PCR检测Col1α2和Gpnmb mRNA表达水平。采用t检验比较两组上述指标的差异。结果与对照组相比,模型组小鼠的结肠更短,结肠组织形态学评分更高,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。HE染色显示,模型组结肠黏膜中肠腺排列紊乱,萎缩减少,杯状细胞减少,黏膜和黏膜下层可见水肿,中性粒细胞和淋巴细胞浸润;对照组黏膜正常,无炎症发生。与对照组相比,模型组小鼠结肠的组织学损伤评分更高,纤维化面积更大,Col1α2、Gpnmb、CD44蛋白的表达更高,Col1α2和Gpnmb mRNA的表达更高,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论Gpnmb可能通过CD44促进DSS诱导的小鼠慢性肠道纤维化的发生发展。

三阴性乳腺癌转化医学药物领域研究进展

三阴性乳腺癌内脏转移率和脑转移率较高,一旦被确诊,患者的存活率极低。根据分子标记和遗传变异,三阴性乳腺癌可分为多种类型。目前已有较多的转化医学领域药物开始在临床上应用。该文主要对抗表观遗传药物、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶抑制剂药物、非转移性黑色素瘤糖蛋白B抗体药物、Src蛋白激酶抑制剂药物、抗雄激素药物、抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路药物和铂类化疗药物进行综述。虽然目前三阴乳腺癌的临床化学疗法和其他HER2类型的乳腺癌治疗方法一样,但是相信在不久的将来随着转化医学药物的研发,二者的治疗方案将会明显不同。

黑素细胞中GPNMB与Tyr相互作用的探讨

目的:探讨非转移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein(transmembrane)nonmetastatic melanomaprotein b,GPNMB)与酪氨酸酶(tyrosinase)的相互作用。方法:以黑素细胞系PIG1为研究对象,分别构建GPNMB和Tyr的siRNA以及过表达载体,转染入细胞后采用实时定量RT-PCR、Western blot检测GPNMB表达下调和上调对Tyr的影响,以及Tyr表达下调和上调对GPNMB的影响;采用免疫共沉淀法检测它们之间的直接相互作用。结果:GPNMB表达下调和上调对Tyr有影响,而Tyr表达下调和上调对GPNMB几乎没有影响。结论:黑素细胞中GPNMB与Tyr之间不存在直接相互作用,为进一步研究GPNMB在黑素小体形成中的作用机制奠定了基础。

Pembrolizumab对1例晚期非小细胞肺癌伴腹水的治疗报告

非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）占肺癌的80%~90%[1]。以铂类药物为主的化疗仅对的30%的NSCLC患者有效[2],还有部分患者不能耐受。Pembrolizumab是一种新型人源化单抗,其通过干扰程序性细胞死亡分子1（programmed death 1,PD-1）提升人体免疫力,主要用于治疗接受ipilimumab（伊匹单抗）治疗后不可切除的或转移性黑素瘤,

大鼠Gpnmb基因表达线性回归模型在损伤时间推断中的应用

目的探讨非转移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein non-metastatic melanoma protein B,Gpnmb)mRNA表达受损伤时间、死亡时间及死后保存温度的影响,建立Gpnmb mRNA表达与损伤时间的线性回归模型,为损伤时间推断提供潜在指标。方法将SD大鼠麻醉后钝性挫伤,随机分为损伤后0h、4h、8h、12h、16 h、20 h和24 h组,每组18只,大鼠颈椎脱臼处死后各取6只分别保存在0℃、16℃、26℃中,在同一温度下于死后0 h、12 h、24 h重复收集大鼠后肢股四头肌损伤处肌肉组织样本,验证组大鼠分组与处理方式同上。使用RT-qPCR技术检测大鼠骨骼肌Gpnmb mRNA的表达。使用Pearson相关系数评价Gpnmb mRNA表达与损伤时间、死亡时间、死后保存温度的相关性,SPSS 25.0软件构建线性回归模型,验证组数据用于回代检验。结果Gpnmb mRNA的表达随损伤时间延长而持续增加,表达量与损伤时间高度相关(P<0.05),与死亡时间和死后保存温度基本不相关(P>0.05)。损伤时间(y)与Gpnmb mRNA相对表达量(x)的线性回归方程为y=0.611 x+4.489。回代检验结果证明该模型预测结果准确。结论Gpnmb mRNA的表达基本不受死亡时间及死后保存温度的干扰,而与损伤时间相关,因此可建立线性回归模型用于损伤时间推断。

紫外线b促进绵羊黑色素细胞中GPNMB和PMEL的表达

非转移性黑色素瘤糖蛋白b(glycoprotein non-metastatic melanoma protein b,GPNMB)及其同系物色素细胞特异性黑色素细胞蛋白(pigment cell-specific melanocyte protein,PMEL)对黑素体的形成和黑色素的生成具有重要的作用,而GPNMB和PMEL的功能还有待深入研究。本文旨在探索GPNMB和PMEL在不同毛色绵羊皮肤表达是否存在差异,确定紫外线b(UVB)对GPNMB和PMEL是否有影响。免疫组织化学结果表明,GPNMB在不同毛色绵羊皮肤的毛基质、内外毛根鞘、毛乳头等区域均有表达。Western印迹和qRT-PCR结果显示,黑色绵羊皮肤中GPNMB和PMEL表达量,高于白色绵羊皮肤。黑色素细胞经UVB照射后,GPNMB和PMEL的表达增高。UVB照射剂量为100 m J/cm2时,黑色素细胞活性最高;单次UVB辐射后,GPNMB和PMEL mRNA表达量在72h达到顶峰,两者的曲线变化趋势大致相同。UVB连续辐射后,GPNMB mRNA表达量在4 d达到顶峰,而PMEL mRNA表达量虽然在3 d升高,但且对GPNMB作用更明显。上述结果提示,GPNMB和PMEL在不同毛色绵羊皮肤存在差异性表达。UVB单次或者连续照射,均促进GPNMB和PMEL表达,且对GPNMB影响更显著。GPNMB和PMEL可能通过影响黑素体的成熟进而调节黑色素的生成。