非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析切割海马伞大鼠海马组织蛋白

目的 :应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统研究切割海马伞后大鼠海马组织蛋白的生化改变 ,为分离、纯化海马中诱导神经干细胞迁移和向神经元分化的信号物质奠定基础。方法 :取SD大鼠 ,行单侧切割海马伞术 ,于术后不同时期取切割侧海马和正常侧海马组织。进行 10 %的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。观察切割海马伞海马和正常海马的蛋白表达差异。结果 :两者在低分子量区存在一条差异性蛋白条带。其中正常海马组织的条带染色最浅 ,切割海马伞海马组织中 10天组和 2 0天组染色较深 ,14天组染色最深。结论 :结合我们过去实验 ,本研究中切割海马伞海马及正常海马组织蛋白出现的差异性条带中 。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法同时测定不同产地大蒜药材中的蒜酶与凝集素

目的:建立SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳同时测定不同产地大蒜药材中蒜酶与凝集素相对含量和相对分子质量的方法。方法:通过考察溶媒方法、样品前处理方法、供试品溶液浓度等因素,确定SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蒜酶与凝集素的最佳条件:以超纯水为溶媒,静置10 min为前处理方法,供试品溶液质量浓度为28 mg·m L-1;分别配制5%浓缩胶、12%分离胶,凝胶厚度为1 mm,浓缩胶电压为80 V,分离胶电压为100 V,进行不连续体系垂直板电泳,借助Gel-pro Analyzer软件分析凝胶电泳图谱。以标准蛋白为marker,建立标准曲线,将蒜酶和凝集素的比移值代入标准曲线方程,计算蒜酶和凝集素的相对分子质量。结果:标准曲线方程为lgM=-1.369 1X+2.184 7,r=0.966 6。大蒜药材中蒜酶相对分子质量为52.1~54.0 k Da,凝集素相对分子质量为11.0~11.8 k Da。不同产地大蒜药材中蒜酶和凝集素总相对含量为18.1%~77.2%,其中蒜酶的相对含量为5.60%~27.1%,凝集素的相对含量为12.5%~68.2%。新疆巴里坤市大蒜样品中蒜酶的相对含量最高为27.1%,新疆阿克苏拜城县大蒜样品中凝集素的相对含量最高为68.2%。不同产地大蒜药材中蒜酶、凝集素的相对含量存在差异,凝集素相对含量普遍高于蒜酶相对含量。结论:与其他测定蛋白质含量的方法相比,本文建立的方法操作简便,样品用量少,能够准确测定大蒜药材中蒜酶及凝集素的相对分子质量与相对含量。不同产地大蒜中蒜酶与凝集素相对总含量均达50%以上,证明蒜酶和凝集素是大蒜中的主要蛋白质。大蒜中的蒜酶与蒜氨酸相对含量的相关性并不显著。

法夫酵母银染mRNA差异显示技术的建立

对影响银染DDRT-PCR方法的主要因素如RNA投入量、引物浓度、MgCl2浓度、dNTPs浓度以及二次扩增的退火温度进行优化.实验结果表明:适宜分析法夫酵母mRNA差异显示的银染DDRT-PCR的条件是总RNA投入量为0.4μg、引物浓度为1.5μmol/L、dNTPs浓度为0.25 mmol/L、MgCl2浓度为1.7 mmol/L、二次扩增的退火温度为40℃.

镉对河南华溪蟹卵黄磷蛋白在卵巢中表达含量的影响及ELISA法的建立

为了探究镉对河南华溪蟹(Sinopotamon henanense)的卵子发生的影响,通过凝胶过滤层析法纯化了成熟卵巢中的卵黄磷蛋白(Vitellin,Vn),采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳确定了Vn亚基数量及分子量,以纯化的Vn为抗原制备了Vn多克隆抗血清并建立了可靠的Vn含量测定的ELISA方法。采用氯化镉体外亚慢性染毒的方法,运用Vn-ELISA方法检测镉暴露对卵巢组织中Vn含量的影响。实验设对照组和5.8 mg/L镉处理组,处理时间分别为10、15和20d。结果显示,(1)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明该蛋白由分子量为102、84和70 k D的3个亚基组成,同时Western-blotting检测表明,抗血清对该蛋白具有较强的免疫特异性;(2)在Vn-ELISA中,Vn抗体最佳稀释倍数为1︰100000,该方法的工作浓度范围为125—2000 ng/m L,定性检测的灵敏度可达到15.62 ng/m L;卵巢中Vn含量测定的结果中各批次间没有显著差异,且平均变异系数分别仅为7.81%,表示该法具有较高的稳定性和重复性;(3)镉引起卵巢组织中Vn含量的显著降低,与镉处理时间具有时间-效应关系,说明了镉暴露可影响河南华溪蟹卵母细胞的成熟并对卵子发生产生抑制作用,进而影响卵巢的正常发育。

蜥蜴及其伪品石龙子鉴别方法比较

目的比较蜥蜴Eremias argus Peters及其伪品石龙子Eumeces chinensis(Gray)的鉴别方法。方法采用薄层色谱法(TLC)、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Native-PAGE)对不同来源的10批蜥蜴药材和3批石龙子药材进行对比研究。结果不同来源蜥蜴药材及其伪品石龙子薄层色谱在相同位置出现相同颜色的斑点,不能对两者进行区分;SDS-PAGE结果显示,不同来源的蜥蜴有3条共有谱带,其中1条是区别于石龙子的特征谱带,且3批石龙子样品在14.6 kDa处的蛋白条带染色程度明显高于蜥蜴;Native-PAGE结果显示,10批蜥蜴样品3条共有谱带中1条是区别于石龙子的特征谱带,3批石龙子样品7条共有谱带中有3条特征谱带,二者特征谱带位置差别很大,进行遗传距离聚类分析,SDS-PAGE法不能将蜥蜴和石龙子完全分开,Native-PAGE法可将2种药材聚为2类。结论 Native-PAGE法可作为中药蜥蜴与其伪品石龙子的快速鉴别方法。

纳豆激酶分离纯化与鉴定

为了提高纳豆激酶的溶栓活性 ,从纳豆粗提物中分离纯化了纳豆激酶。采用Butyl Toyopearl柱层析对纳豆粗提物进行了分离纯化 ,以试管法确定和收集了活性部位 ,用纤维蛋白平板法测定了活力 ,并用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (SDS PAGE)对分离纯化的效果进行了检验。考察了纳豆激酶粗提物在不同温度和湿度条件下的稳定性。结果表明在SDS PAGE中观察到三条明显的蛋白谱带 ,其中相对分子质量为 192 75和 2 710 1的区带具有与文献报道类似的纳豆激酶的相对分子质量和纤溶活性 ,而相对分子质量为 14 4 0 0的蛋白区带与文献报道的纳豆激酶的相对分子质量大有差异。纯化倍数为 5 0倍 ,活性回收率为 75 .5 7%。初步稳定性实验结果表明 :其外观在 4 0℃和 6 0℃保存条件下发生变化 ,纤溶活力在 6 0℃保存条件下发生显著变化。而 4℃条件下活力和外观却很少有变化 ;纳豆粗提物在不同湿度条件下均具有较强吸湿性。纳豆粗提物对高温和高湿稳定性较差。

地衣芽孢杆菌产碱性蛋白酶发酵条件优化

碱性蛋白酶是一类重要的工业用酶,广泛应用于洗涤、制革、酿造等行业,发挥着重要作用。为提高地衣芽孢杆菌的产酶活力,在单因素实验的基础上,采用3因素3水平的响应面分析法,以蛋白酶活力为响应值,对影响地衣芽孢杆菌20203产碱性蛋白酶的因素进行研究分析,得到了最佳发酵条件为:葡萄糖1.5%,豆粕6%,乳糖4%,磷酸铵1.2%,KCl 0.03%,CaCl2 0.07%,MgSO4 0.02%,吐温80 0.05%,初始pH9.0,培养温度37℃,摇瓶转速300r/min,5d后发酵液酶活为2382u/mL。通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法得到该蛋白酶的分子量为35ku。

α-转移葡萄糖苷酶的纯化及酶学特性研究

α 转移葡萄糖苷酶是生产低聚异麦芽糖的关键酶。文中探讨了一种黑曲霉所产α 转移葡萄糖苷酶粗酶的分离提纯方法 ,并研究了纯酶的部分酶学特性。该酶可用葡聚糖凝胶G 2 0 0柱层析法分离 ,粗酶液含有多种杂蛋白 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定纯酶的分子质量为 1 3 0ku。该酶既有水解特性 ,又有较强的转移能力。

禽多杀性巴氏杆菌C_(48-1)外膜蛋白H基因真核表达载体的构建

应用限制性内切酶BamHⅠ将片段ompH从重组质粒pMDT-omp H切下,非定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经酶切分析、PCR鉴定及序列测定,证实成功构建了禽多杀性巴氏杆菌C48-1外膜蛋白H基因的重组真核表达质粒pcDNA3-ompH。将重组表达质粒转染至 COS7 细胞,经RT-PCR、SDS-PAGE及Western-blotting检测,证明了外膜蛋白H基因获得了瞬时表达。

牙骨质附着蛋白的提取及纯化

目的探讨提取和纯化牙骨质附着蛋白的实验方法。方法拔除2龄牛健康牙齿，刮下牙骨质，分别制取牙骨质基质醋酸和胍2种提取物。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析2种提取物的蛋白组分。用刀片将牙骨质基质胍提取物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后M65000的蛋白条带切下，经洗脱和浓缩后，即得到牙骨质附着蛋白，鉴定纯度。结果得到纯度>95％的牙骨质附着蛋白。结论所采用的牙骨质附着蛋白提取及纯化方法是可行的，且较以往的方法有所简化。

陆地棉体胚发育过程中特异蛋白质的表达

对陆地棉愈伤组织诱导及体细胞胚胎发生过程中的可溶性蛋白质含量变化及利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对特异蛋白质进行了研究。结果表明,各个时期的可溶性蛋白质含量是不同的,在愈伤组织形成初期较低,随着愈伤组织的生长及胚状体的形成,可溶性蛋白质含量逐渐上升,在经过两次继代时达最大值,以后又逐渐降低;外植体、非胚性愈伤组织、胚性愈伤组织阶段各有其特异表达的蛋白质,并且不同品种之间外植体所表达的蛋白质也有所不同,与其再生能力可能有重要关系。

患出血病鲫鱼主要组织可溶性蛋白质变化的研究

采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)对正常和患出血病的鲫鱼心、肝、肾、鳃、脑、肌肉、肠、眼8种组织中可溶性蛋白质进行比较分析。结果表明:病鱼的心、肝、肾、鳃、脑、肌肉6种组织的蛋白质电泳谱带与正常鱼相比有较大变化,心和肾各缺失5条谱带;肝新诱导出1条谱带,另有1条谱带缺失;鳃中新诱导出2条谱带,有2条谱带缺失;脑中增加了4条新谱带,1条谱带缺失;肌肉新增5条谱带。说明鱼在遭受病原菌侵袭后,蛋白质的合成代谢受到较大影响。这些变化可作为辅助疾病诊断的生化指标。

蛇毒血凝酶纯度分析方法研究

目的:建立蛇毒血凝酶纯度测定方法。方法:分别采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和等电聚焦法(IEF),对凝胶考染并扫描;采用体积排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC),使用TSK G3000SW(7.8 mm×300 mm)凝胶柱,流动相为55 mmol.L-1柠檬酸钠-0.01%Tween 80溶液;流速0.5 mL.min-1,检测波长280 nm;采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),使用C8Vydac(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%三氟乙酸溶液(A)-含0.1%三氟乙酸的90%乙腈(B),梯度洗脱,流速0.8 mL.min-1,;柱温为45℃,检测波长:280 nm。结果:4种方法测得蛇毒血凝酶的纯度分别为89.3%,88.5%,95.4%,87.4%。结论:对于蛇毒血凝酶纯度测定,非还原SDS-PAGE、IEF及RP-HPLC法均可准确地反映其样品纯度。

免疫球蛋白和T细胞受体基因克隆性重排两种临床检测方法的比较

非霍奇金淋巴瘤是一种原发于淋巴结及其他淋巴组织的恶性肿瘤,克隆性免疫球蛋白重链（IgH）、轻链（IgL）基因重排被认为可作为B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）的辅助诊断方法;T细胞受体（TCR）基因克隆性重排则可作为T细胞非霍奇金淋巴瘤（T-NHL）的辅助指标.由于反应性增生的淋巴细胞为多克隆性来源,每个正常淋巴细胞的IgH/IgL和TCR的基因编码均为多克隆性基因重排,而NHL起源于单个恶性转化的淋巴细胞,所有的肿瘤细胞具有单克隆性的基因重排方式[1].因此,准确了解基因重排方式能有效协助诊断.我们比较了聚合酶链反应（PCR）＋基因扫描法和PCR＋聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测29例淋巴细胞增生性疾病石蜡标本的IgH、IgΚ和TCRG基因重排结果一致性,目的在于找到操作简便、敏感度高且准确可靠的方法应用于临床检测.

不同方法测定聚乙二醇化重组人干扰素α-2b注射液的纯度

目的：建立聚乙二醇化重组人干扰素α-2b（PEG—rhIFNα-2b）注射液纯度测定方法。方法：采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE），对凝胶银染并扫描；采用体积排阻高效液相色谱法（SEC—HPLC），使用TSKG3000SW（7．8min×300mm）凝胶柱，流动相：0．2mol·L-1PB．0．2mol·L-1NaCl-异丙醇（48．5／48．5／3，v／v）；流速：0．6ml·min-1；检测波长：280nm；采用反相高效液相色谱法（RP．HPLC）．使用C8（4．6min×250mm）色谱柱，流动相：A液：0．1％三氟乙酸溶液；B液：95％乙腈的A液，梯度：0％～100％B（30min）；流速：1mL·min-1；检测波长：214nm。结果：三种方法测得PEG—rhIFNα-2b的纯度分别为100％、100％、98．90％。结论：三种方法均适用于PEG-rhIFNα-2b注射液纯度测定，检测结果符合生物制品质量控制规定。

西洋参鲜品与干品蛋白质、维生素C、维生素E、挥发油成分及超氧化物歧化酶活性的比较

目的:对西洋参鲜品和干品蛋白质、维生素C、维生素E、挥发油成分及超氧化物歧化酶活性进行比较,为西洋参的合理应用提供参考。方法:蛋白质分析采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法;维生素C、维生素E含量测定采用分光光度法;挥发油成分分析采用GC-MS的方法;超氧化物歧化酶(SOD)活性测定采用邻苯三酚自氧化法;并对测定结果进行t检验。结果:西洋参鲜品与西洋参干品的蛋白质电泳谱带有所不同,但鲜品蛋白质含量高于干品;维生素C、维生素E含量、SOD活性西洋参鲜品极显著高于干品(P<0.01),挥发油含量、成分种类西洋参鲜品多于干品,且成分有所不同。结论:西洋参鲜品与干品的蛋白质、维生素C、维生素E、挥发油成分有所不同,SOD活性有所差异,这可能是二者药性及作用不同的原因之一。

结核分枝杆菌H_(37)Rv株菌体抗原及分泌抗原分析

目的对比分析人型结核枝杆菌(结核菌)H37Rv株固体培养菌、液体培养菌及分泌蛋白中抗原成分的差异,寻找结核菌的主要免疫抗原。方法应用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术、免疫印迹技术及单克隆抗体技术分析人型结核菌H37Rv株固体培养、液体培养及其分泌蛋白中的抗原成分。结果固体培养菌与液体培养菌具有基本一致的多肽抗原成分,其主要成分分子量为79000、64000、54000、50000、28000～38000、23000等,而分泌蛋白差异稍大,其主要成分分子量为66000、63000～65000、55000、42000、32000～34000、24000、16000等。单克隆抗体进一步证明66000、55000、16000为分泌蛋白。多克隆抗体免疫印迹分析表明,菌体主要免疫原有79000、54000、38000～50000、28000蛋白成分,而分泌蛋白主要免疫原为分子量66000、55000～64000、30000～34000、24000、16000成分。结论人型结核菌H37Rv株菌体蛋白和分泌蛋白具有不同的主要免疫原,将有助于认识HRv株的总体蛋白组成及寻找与结核病相关的特异性抗原成分。