正常成人血浆非酯化脂肪酸与红细胞膜流动性的研究

采用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）和荧光偏振技术及放射免疫分析法分析了４２例正常人血浆非酯化脂肪酸（ＮＥＦＡ）成分、红细胞膜微粘度和空腹血浆胰岛素（Ｉｎｓ），并进一步探讨了它们之间的关系。结果表明：正常人血浆ＮＥＦＡ主要由花生四烯酸（Ｃ２０∶４ｎ－６）、亚油酸（Ｃ１８∶２ｎ－６）、油酸（Ｃ１８∶１ｎ－９）、软脂酸（Ｃ１６∶０）、十四烷酸（Ｃ１４∶０）和硬脂酸（Ｃ１８∶０）等６种脂酸组成。其中油酸含量最高（为３９．６％），其次为软脂酸（２２．６％）。血浆ＮＥＦＡ总浓度与红细胞膜微粘度呈明显正相关，而与Ｉｎｓ呈明显负相关。提示血浆ＮＥＦＡ受Ｉｎｓ水平调节并可能对红细胞膜流动性具有影响。

NEFA对牛骨骼肌细胞线粒体功能及脂肪酸代谢相关基因的影响

【目的】明确非脂化脂肪酸(NEFA)胁迫对牛骨骼肌细胞线粒体功能及脂肪酸代谢过程的影响,为揭示围产期奶牛营养代谢病的作用机理提供参考依据。【方法】建立NEFA胁迫牛骨骼肌细胞模型,经最佳浓度—时间组合刺激后,采用透射电镜观察牛骨骼肌细胞线粒体的形态变化,通过油红O染色及BODIPY 493/503染色观察细胞内脂质沉积情况,采用流式细胞术检测线粒体膜电位,利用试剂盒检测细胞内的过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,并以实时荧光定量PCR检测线粒体功能及脂质代谢相关基因表达情况。【结果】综合NEFA对牛骨骼肌细胞存活率及其形态的影响,选取1.5 mmol/L NEFA刺激2 h作为后续试验的最佳浓度—时间组合。经1.5 mmol/L NEFA刺激2 h后,牛骨骼肌细胞线粒体体积变小、基质颜色加深,线粒体嵴排列紊乱,且趋向于融合现象,甚至部分呈空泡状;线粒体膜电位下降的细胞数量明显增多,较对照组(刺激0 h)显著提高38.08%(P<0.05,下同);细胞培养上清液MDA含量较对照组(刺激0 h)显著提高1.38倍,而细胞内的CAT活性极显著降低60.63%(P<0.01,下同),SOD活性显著降低34.21%。实时荧光定量PCR检测结果显示,经1.5 mmol/L NEFA刺激2 h后,调控线粒体基因复制与转录的NRF1和PGC-1α基因、调控线粒体融合的MFN2基因、线粒体呼吸链关键酶基因(除COV基因外)、含Patatin样磷脂酶域2蛋白基因(PNPLA2)及长链脂酸延伸酶6基因(ELOVL6)的相对表达量均极显著降低,而肉毒碱脂酰转移酶1B基因(CPT1B)的相对表达量极显著提高。【结论】高浓度的NEFA对牛骨骼肌细胞具有脂毒性,对线粒体形态、功能与膜电位均产生影响,能引发线粒体功能障碍及导致细胞脂肪酸代谢异常,产生氧化应激,进而诱导脂质异常沉积。

运输过程对泌乳奶牛血液非酯化脂肪酸和葡萄糖浓度的影响

血液中葡萄糖和非酯化脂肪酸(NEFA)浓度常用来确定奶牛的能量状态,而应激会对这2个指标产生影响。为研究血样采集前的常规运输过程对系统中血液葡萄糖和NEFA浓度是否会产生影响,本试验采集了2组泌乳奶牛的血液样品,对其中一组奶牛在产后11和46d进行常规运输。试验结果通过线性混合影响模型进行分析。与对照组相比,运输后的奶牛血液中NEFA和葡萄糖浓度显著升高,而产后46d经过运输的奶牛血液NEFA中脂肪酸组成发生改变。因此,泌乳奶牛血液样品采集前应尽量减少运输过程,从而减少对血液葡萄糖和NEFA浓度的影响,并降低之后错误估计奶牛能量状态可能性。

新诊断2型糖尿病患者血清视黄醇结合蛋白4和游离脂肪酸水平变化及其与胰岛素敏感性的关系研究

目的探讨新诊断2型糖尿病(T2DM)患者血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)和游离脂肪酸(FFA)的表达水平以及二者与胰岛素敏感性的关系。方法选取新诊断T2DM患者76例(T2DM组)及健康体检者30例(对照组)。观察各组空腹血清RBP4和FFA水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感性指数(ISI)用以评价各组胰岛素敏感性。结果 (1)T2DM组患者血清RBP4和FFA水平显著高于对照组(P<0.01)。(2)单因素相关分析显示,血清RBP4与体质指数(BM I)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、HOMA-IR、FFA呈正相关,与ISI、HOMA-β呈负相关(P<0.05)。(3)多元逐步回归分析发现,HOMA-IR、FFA作为独立危险因素影响血清RBP4水平,常数项为零。结论 T2DM患者血清RBP4、FFA水平均显著升高;RBP4水平升高与糖脂代谢有关,从而导致胰岛素抵抗,进而参与T2DM的发生、发展。RBP4与FFA在胰岛素抵抗中可能起协同作用。

高脂饮食诱导胰岛素抵抗大鼠模型游离脂肪酸和胰岛素敏感性的变化

目的:观察经高脂饮食诱导胰岛素抵抗大鼠模型的胰岛素敏感性及血清游离脂肪酸的变化情况。方法:实验于2002-04/08在重庆医科大学动物中心及附属第一医院内分泌实验室完成。选择6周龄Wistar大鼠24只,随机分为2组,即正常饲养组和高脂饲养组,每组12只。正常饲养组及高脂饲养组饲料的热量分别为13.53,18.71kJ/g。喂养6周后,应用葡萄糖钳夹技术评价胰岛素抵抗大鼠模型(葡萄糖输注率60～120越低,胰岛素抵抗越严重),血清游离脂肪酸水平应用生化比色法测定,血清三酰甘油、总胆固醇、低、高密度脂蛋白胆固醇水平应用生化酶法测定。比较两组大鼠体质量、葡萄糖输注率以及血清游离脂肪酸等的变化情况。结果:实验过程中两组各死亡2只,进入结果分析两组各10只大鼠。①两组大鼠喂养6周后血脂、游离脂肪酸水平比较:高脂饲养组大鼠的三酰甘油、游离脂肪酸水平显著高于正常饲养组[(1.24±0.34,0.61±0.12),(0.43±0.13,0.24±0.10)mmol/L(t=2.84,P<0.05;t=3.36,P<0.01)]。②两组大鼠喂养6周后体质量、血糖、胰岛素水平及葡萄糖输注率60～120比较:高脂饲养组大鼠体质量、血浆胰岛素水平显著高于正常饲养组(t=3.49,4.25,P<0.01),葡萄糖输注率60～120显著低于正常饲养组[(9.89±3.28,28.03±8.02)mg/(kg·min)](t=5.91,P<0.01)。结论:高脂饲养大鼠的葡萄糖输注率明显降低,提示高脂饮食可导致机体产生严重胰岛素抵抗,是建立胰岛素抵抗大鼠模型的有效手段。该模型同时伴有脂代谢异常,其胰岛素抵抗的形成可能与游离脂肪酸水平升高有关。

四物汤对非酒精性脂肪性肝病小鼠的作用机制研究

目的研究四物汤对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠的作用机制。方法将60只C57健康雄性小鼠适应性喂养5 d后,按照随机数字表法分为5组,分别为正常对照组,模型组,四物汤低、中、高剂量组,每组各12只。正常对照组小鼠予正常饲料喂养,其余4组小鼠予高脂饲料喂养,自由进食,连续4周,建立NAFLD模型。造模成功后,正常对照组及模型组小鼠予0.9%氯化钠注射液0.2 m L/100 g灌胃,四物汤低、中、高剂量组小鼠分别予0.05、0.10、0.20 m L/100 g四物汤药液灌胃,均每日2次,连续6周。然后取各组小鼠血清标本,检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;取肝组织,检测游离脂肪酸(FFA)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及超氧化物歧化酶(SOD)活性,并对肝脏组织形态学进行观察。结果与正常对照组相比,模型组小鼠血清TG、TC、ALT、AST水平均增高(P<0.05),HDL-C水平降低(P<0.05)。与模型组相比,四物汤低、中、高剂量组小鼠血清TG、TC、ALT、AST水平均显著降低(P<0.05),HDL-C水平增高(P<0.05),且与正常对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组相比,模型组肝组织MDA、FFA活性均升高(P<0.05),GSH-Px、SOD活性均降低(P<0.05);与模型组相比,四物汤低、中、高剂量组肝组织MDA、FFA活性均降低(P<0.05),GSH-Px、SOD活性均增高(P<0.05),且与正常对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论四物汤可通过调节血脂水平,改善脂质代谢紊乱,提高肝脏抗氧化能力,从而起到控制NAFLD进展以及其恶化程度的作用。

八肽胆囊收缩素对游离脂肪酸损伤胰岛β细胞氧化应激的影响

目的观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)对游离脂肪酸(FFAs)损伤的小鼠胰岛β细胞(本文为NIT-1细胞株)氧化应激及细胞增殖的影响,探讨CCK-8对胰岛β细胞保护作用的机制。方法将培养良好的NIT-1细胞分为对照组、FFAs组(加入0.25mmol/L油酸+0.25mmol/L软脂酸)、CCK-8组(FFAs组基础上同时加入1×10-8 mmol/L CCK-8),分别培养48h和72h,观察细胞生长状态,MTT比色法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,检测细胞培养上清液总抗氧化能力(TAOC),谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)活性。结果 FFAs组显微镜下可见较多细胞碎片,CCK-8组细胞碎片明显减少;与FFAs组比较,48h和72hCCK-8组的光密度(OD)570值显著增高(均P<0.01),与CCK-8处理48h比较,72h组OD570值明显增高(P<0.01);与FFAs组比较,CCK-8组细胞上清液CAT、T-AOC、SOD及GSH-Px活性均明显增高,MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);72hCCK-8组较48h组CAT、SOD活性增加,MDA含量降低。结论 CCK-8对FFAs损伤的胰岛β细胞具有一定的抗氧化应激作用,同时CCK-8能够显著刺激NIT-1细胞的增殖。

添加胆固醇对非酯化脂肪酸介导的犊牛肝细胞脂质沉积的差异蛋白组成分析

为了研究胆固醇在非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acid, NEFA)介导的犊牛肝细胞脂质沉积中的作用,揭示胆固醇对能量负平衡奶牛肝脂代谢的调控机制,采取体外分离培养犊牛肝细胞,添加NEFA的同时添加不同浓度(20、50和100 mmol/L)的胆固醇,模拟能量负平衡状态下的高NEFA环境,构建脂肪沉积模型。依据细胞生化指标的变化特征确定添加胆固醇的最佳浓度及时间,6 h后以最佳浓度胆固醇继续培养至12 h,确定胆固醇最佳处理时间;收集NEFA组(N组)以及最佳浓度和时间培养的胆固醇+NEFA(N+CHOL组)处理组犊牛肝细胞,利用同位素标记相对、绝对定量(iTRAQ)技术和生物信息学分析方法分析组间的差异蛋白。结果显示:通过对不同方法处理的各组细胞的生化指标进行对比,发现胆固醇处理的最佳浓度为50 mmol/L,最佳时间为6 h;组间差异蛋白共66个,其中有41个蛋白表达上调(比率≥1.2,P<0.05),25个蛋白表达下调(比率≤0.83,P<0.05),这些差异蛋白与黄体酮反应、雌二醇反应、生长激素反应和糖酵解过程有关,相关分子功能有胆固醇结合、钙依赖性蛋白结合、钙依赖性磷脂结合、和D-葡萄糖跨膜转运,其富集的主要代谢通路有Rap1信号通路、氨酰基-tRNA生物合成。

不同临床发病特征子痫前期孕妇胎盘组织中LCHAD表达与氧化应激、炎性反应及血清游离脂肪酸和甘油三酯水平的相关性

目的探讨不同临床发病特征的子痫前期孕妇胎盘组织中长链脂肪酸氧化酶表达与氧化应激、炎性反应及其与血清游离脂肪酸（FFA）、甘油三酯（TG）水平的相关性。方法采用前瞻性队列研究方法，选择2012年1月1日至5月31日在北京市海淀区妇幼保健院行产前检查的单胎孕妇，于孕22～24周行B超检查，发现有子宫动脉舒张早期切迹（简称切迹）的101例孕妇纳入有切迹组，无切迹的377例孕妇为无切迹组，随访两组孕妇的妊娠结局及妊娠期高血压疾病发病情况。检测两组孕早中期血清FFA、TG水平，采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶（LCHAD）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶P47-phox亚基（NADPH P47-phox）、p38丝裂原活化蛋白激酶α（p38MAPK-α）和环氧合酶2（COX-2） mRNA和蛋白的表达；分析孕妇血清FFA、TG水平与胎盘组织中LCHAD、NADPH P47-phox、p38MAPK-α和COX-2 mRNA 和蛋白表达的相关性。结果（1）有切迹组发生早发型子痫前期9例，晚发型子痫前期15例，妊娠期高血压10例；无切迹组发生晚发型子痫前期8例，妊娠期高血压18例。随机选取两组孕妇中血压正常者各15例共计30例为对照组。（2）有切迹组早发型子痫前期、晚发型子痫前期及妊娠期高血压孕妇TG水平分别为（2.0±0.8）、（1.8±0.6）及（1.9±0.7）mmol/L，FFA水平分别为（0.68±0.26）、（0.52±0.10）及（0.52±0.17）mmol/L；无切迹组晚发型子痫前期及妊娠期高血压孕妇TG水平分别为（1.6±0.6）及（1.4±0.4）mmol/L，FFA水平分别为（0.49±0.11）及（0.48±0.05）mmol/L；对照组TG及FFA水平分别为（1.4±0.5）及（0.52±0.06）mmol/L；有切迹组孕妇TG水平均显著高于对照组（P〈0.05）；有切迹组早发型子痫前期孕妇FFA水平显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.05）。（3）有切迹组早发型子痫前期孕妇胎盘组织中LCHAD mRNA表达水平均显著低于有切迹组和无切迹组的晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期胎盘组织中NADPH P47-phox mRNA表达水平均显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期胎盘组织中p38MAPK-α mRNA表达水平均显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期胎盘组织COX-2 mRNA表达水平显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。（4）有切迹组早发型子痫前期、晚发型子痫前期、妊娠期高血压孕妇胎盘组织中LCHAD蛋白表达水平均显著低于对照组（P〈0.01）；有切迹组早发型子痫前期显著低于无切迹组晚发型子痫前期（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期胎盘组织中NADPH P47-phox蛋白表达水平高于无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.05）。有切迹组早发型子痫前期孕妇胎盘组织中p38MAPK-α蛋白表达水平显著高于有切迹组晚发型子痫前期、无切迹组晚发型子痫前期及对照组（P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期、晚发型子痫前期及妊娠期高血压孕妇，及无切迹组孕妇胎盘组织中COX-2蛋白表达水平均显著高于对照组（P〈0.01）。（5）有切迹组早发型子痫前期孕妇血清FFA 水平与胎盘组织中LCHAD mRNA 和蛋白表达呈显著负相关（r=-0.810、-0.932，P〈0.01），两组孕妇血清TG水平与胎盘组织中LCHAD mRNA和蛋白表达均无显著相关性（P〉0.05）。（6）有切迹组早发型子痫前期孕妇胎盘组织中LCHAD mRNA表达水平与NADPH P47-phox mRNA、COX-2 mRNA 表达呈显著负相关（r=-0.877、-0.762，P〈0.05）；对照组胎盘组织中 LCHAD mRNA表达水平与COX-2 mRNA表达呈显著负相关（r=-0.565，P〈0.01）。有切迹组早发型子痫前期孕妇胎盘组织中LCHAD蛋白表达水平与NADPH P47-phox蛋白表达呈显著负相关（r=-0.818， P〈0.01）；对照组胎盘组织中LCHAD蛋白表达水平与COX-2蛋白表达呈显著负相关（r=-0.502，P〈 0.01）。结论不同临床发病特征子痫前期孕妇胎盘组织中长链脂肪酸氧化酶mRNA和蛋白表达水平不同，伴有切迹的早发型子痫前期孕妇的长链脂肪酸氧化酶mRNA和蛋白表达水平较晚发型降低更为明显，且与早中孕期升高的血清FFA水平以及显著增强的氧化应激和炎性反应有负相关性，与血清TG水平无相关性。

异氟醚控制性降压对颅内动脉瘤夹闭术病人脑脊液游离脂肪酸浓度的影响

目的探讨异氟醚控制性降压对颅内动脉瘤夹闭术病人脑脊液游离脂肪酸（FFAs）浓度的影响。方法择期行颅内动脉瘤夹闭术病人30例,ASAⅠ级或Ⅱ级,随机分为2组（n=15）：对照组（A组）和控制性降压组（B组）。2组均在术中持续吸入异氟醚维持麻醉,A组术中呼气末异氟醚浓度为1．2％；B组切开硬脑膜时开始行异氟醚控制性降压,平均动脉压（MAP）下降幅度为基础值的30%～40%,夹闭动脉瘤即刻开始降低异氟醚吸入浓度停止控制性降压,使血压回升至降压前水平。分别于麻醉诱导前（T0）、硬脑膜切开即刻（T1）、硬脑膜切开后10、20、30min（T2-4）、动脉瘤夹闭后即刻（T5）、动脉瘤夹闭后10、20、30min（T（6～8））记录血液动力学指标；于T1、L5动脉瘤夹闭后2、4h（T（9．10））取脑脊液,测定FFAs浓度。结果（1）B组硬脑膜切开后MAP由（96±9）mm Hg降至（62±4）mm Hg（P＜0．05或0．01）,夹闭动脉瘤后MAP恢复至（78±11）mm Hg,心输出量和心率无明显变化（P＞0．05）。（2）B组在T5、T9、T（10）时脑脊液FFAs浓度增高（P＜0．05）,B组FFAs浓度增高的程度高于A组（P＜0．05）。结论异氟醚控制性降压可以增加颅内动脉瘤夹闭术病人脑脊液中FFAs的浓度。

孕妇血清游离脂肪酸水平及胎盘线粒体氧化应激损伤程度变化与子痫前期发病的关系

目的探讨孕妇血清游离脂肪酸（FFA）水平及胎盘线粒体氧化应激损伤程度变化在子痫前期发病中的作用。方法选择2010年8月-2011年5月于福建省妇幼保健院住院分娩的60例重度子痫前期孕妇，按发病时孕周不同分为早发型子痫前期组（发病时孕周〈34周）和晚发型子痫前期组（发病时孕周〉134周）各30例；另选同期健康晚期妊娠孕妇60例，也根据孕周不同分为对照1组（孕周〈34周）和对照2组（孕周≥34周）各30例。应用改良铜试剂比色法检测孕妇血清FFA水平；紫外比色法检测胎盘组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活性、过氧化氢酶（CAT）活性、胎盘线粒体膜丙二醛（MDA）水平及线粒体通透转运孔（町孔）开放水平；应用超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒检测胎盘组织中SOD活性的水平；实时荧光定量PCR技术检测胎盘线粒体DNA（mtDNA）的表达水平。结果（1）早发型及晚发型子痫前期组孕妇血清FFA的水平分别为（1．6±0．5）及（1．5±0．4）mmo]／L，对照1组及对照2组分别为（1．0±0．5）及（0．9±0．5）mmol／L，4组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；但早发型与晚发型子痫前期组比较、对照1组与对照2组比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。（2）早发型及晚发型子痫前期组孕妇胎盘组织中GPX活性水平分别为（47±6）、（67±6）U／rag，均低于对照2组的（80±3）U／mg，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；早发型及晚发型子痫前期组孕妇胎盘组织中CAT活性水平分别为（19±5）、（20±4）U／rag，均低于对照2组的（55±3）U／mg，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；早发型及晚发型子痫前期组孕妇胎盘组织中SOD活性水平分别为（62±13）、（96±17）U／rag，均低于对照2组的（123±19）U／mg，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（3）早发型及晚发型子痫前期组孕妇胎盘线粒体膜MDA水平分别为（1154-22）、（90±17）nmol／mg，均高于对照2组的（52±11）nmol／mg，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；早发型及晚发型子痫前期组孕妇胎盘线粒体PT孔开放水平分别为0．086±0．013、0．069±0．014，均高于对照2组的0．052±0．012，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；早发型及晚发型子痫前期组孕妇胎盘mtDNA表达水平分别为3．0±0．7、2．8±0．7，均高于对照2组的2．6±0．6，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05），但早发型与晚发型子痫前期组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。（4）早发型及晚发型子痫前期组孕妇胎盘线粒体膜MDA水平与血清FFA水平均呈明显正相关（r值分别为0．703、0．457，P〈0．05）；对照2组孕妇胎盘线粒体膜MDA水平与血清FFA水平无相关性（尸〉0．05）。（5）早发型子痫前期组孕妇胎盘线粒体膜MDA水平与胎盘组织GPX、CAT、SOD活性水平均呈明显负相关（r值分别为-0．652、-0．787、-0．952，P〈0．05）；晚发型子痫前期组孕妇胎盘线粒体膜MDA水平与胎盘组织中GPX、CAT、SOD活性水平均呈明显负相关（r值分别为-0．378、-0．689、-0．854，P〈0．05）；对照2组孕妇胎盘线粒体膜MDA水平与胎盘组织中GPX、CAT、SOD活性水平无相关性（P均〉0．05）。结论血清FFA水平升高及胎盘线粒体氧化应激损伤增强可能是子痫前期发病的重要因素，血清FFA水平升高及胎盘组织中抗氧化酶活性下降可能是胎盘线粒体氧化应激损伤程度增强的原因。

不同链长脂肪酸对胎盘滋养细胞氧化应激和炎症反应的影响

目的探讨不同链长脂肪酸对胎盘滋养细胞氧化应激和炎症反应的影响。方法体外培养胎盘滋养细胞，将细胞分为5组，每组加入不同链长的脂肪酸孵育细胞，即分别为无游离脂肪酸（FFA—free，FFFA）组、短链脂肪酸（SC—FFA）组、中链脂肪酸（MC—FFA）组、长链脂肪酸（LC—FFA）组、极长链脂肪酸（VLC—FFA）组。每组再分别以DMEM培养基、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶抑制剂（NADPH—I）和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂（p38MAPK—I）孵育细胞。采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测各组细胞p38MAPK和环氧合酶2（COX-2）mRNA和蛋白的表达变化。结果（1）LC—FFA组＋DMEM、VLC—FFA组＋DMEM、LC—FFA组＋NADPH—I、LC—FFA组＋p38MAPK—I、VLC—FFA组＋NADPH—I、VLC—FFA组＋p38MAPK—I胎盘滋养细胞p38MAPKmRNA的表达量分别为4．56±0．28、22．65±2．40、0．87±0．06、1．02±0．15、19．87±1．93、10．22±0．75，蛋白的表达量分别为0．79±0．02、0．93±0．10、0．43±0．06、0．44±0．19、0．79±0．10、0．81±0．14。LC—FFA组＋DMEM、VLC—FFA组＋DMEM细胞p38MAPKmRNA和蛋白的表达量升高（P〈0．05）。与LC—FFA组＋DMEM比较，LC—FFA组＋NADPH-I、LC—FFA组＋p38MAPK—I细胞p38MAPKmRNA和蛋白的表达量明显降低（P〈0．05）。与VLC—FFA组＋DMEM比较，VLC—FFA组＋NADPH—I细胞p38MAPKmRNA和蛋向的表达量差异无统计学意义（P〉0．05）；VLC—FFA组＋p38MAPK—I细胞p38MAPKmRNA的表达量明显降低（P〈0．05），而蛋白的表达量无差异（P〉0．05）。（2）LC—FFA组＋DMEM、VLC—FFA组＋DMEM、LC—FFA组＋NADPH—I、LC—FFA组＋p38MAPK—I、VLC—FFA组＋NADPH—I、VLC—FFA组＋p38MAPK—I细胞COX-2mRNA的表达量分别为3．97±0．03、39．08±0．63、0．99±0．13、0．98±0．18、20．93±3．70、13．46±2．31，蛋白的表达量分别为1．32±0．20、1．33±0．25、0．594-0．13、0．58±0．30、0．88±0．18、0．91±0．24。与其他组比较，COX-2mRNA和蛋白的表达量在LC—FFA组＋DMEM、VLC—FFA组＋DMEM细胞明显升高（P〈0．05）。与LC—FFA组＋DMEM比较，LC—FFA组＋NADPH—I、LC—FFA组＋p38MAPK—I细胞COX-2mRNA和蛋白的表达量明显降低（P〈0．05）。与VLC—FFA组＋DMEM比较，VLC—FFA组＋NADPH—I、VLC—FFA组＋p38MAPK—I细胞COX-2mRNA和蛋白的表达量均降低（P〈0．05）。（3）相关性分析显示，在LC—FFA组中p38MAPK与COX-2在mRNA和蛋白水平上均呈正相关（r=0．657、0．916，P〈0．05）。在F．FFA、SC—FFA、MC—FFA、VLC—FFA组中，p38MAPK与COX-2在mRNA水平上无相关性（P〉0．05），而在蛋白水平上呈正相关（P〈0．05）。结论Lc—FFA和VLC—FFA刺激下的胎盘滋养细胞中存在氧化应激和炎症反应，该过程有p38MAPK信号通路参与。

银杏叶提取物对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨银杏叶提取物对内皮细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将孵育好的人脐静脉内皮细胞分成5组:内皮细胞组(对照组);内皮细胞+游离脂肪酸(FFA)组(实验1组);内皮细胞+FFA+10μl银杏叶提取物0.35mg/L组(实验2组);内皮细胞+FFA+10μl银杏叶提取物3.5mg/L组(实验3组);内皮细胞+FFA+10μl银杏叶提取物35mg/L组(实验4组)。分别测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX-1)以及细胞凋亡率。结果与对照组比较,实验1组内皮细胞上清液中SOD和GPX-1含量显著降低(P<0.01),而MDA则显著升高(P<0.01);与实验1组比较,实验2、3、4组内皮细胞上清液中SOD和GPX-1含量显著升高(P<0.01),MDA显著降低(P<0.01)。实验1组FFA诱导的内皮细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01);经银杏叶提取物注射后,实验2、3、4组内皮细胞凋亡率显著低于实验1组(P<0.01)。结论银杏叶提取物可通过改善血管内皮细胞的氧化应激水平而抑制其凋亡。

围生期能量负平衡奶牛胰岛素抵抗的研究进展

围生期奶牛能量负平衡可引起脂代谢紊乱并常伴有胰岛素抵抗,而胰岛素抵抗又进一步促进了脂代谢紊乱和能量负平衡。胰岛素抵抗是奶牛能量代谢性疾病酮病和脂肪肝的病理学基础,胰岛素抵抗奶牛主要临床特征是高非酯化脂肪酸血症、高酮血症和低胰岛素敏感性指数。高产奶牛易发生能量代谢性疾病,造成巨大经济损失。炎症、内质网应激和线粒体功能紊乱参与了胰岛素抵抗的发生。文章综述了奶牛胰岛素抵抗与能量代谢障碍性疾病之间的研究进展。

靶向沉默CaMKK-AMPK通路对NEFAs介导肝脂损伤的调控机制

为探究Ca^(2+)/钙调素依赖性蛋白激酶(CaMKK)-AMP依赖蛋白激酶(AMPK)对非酯化脂肪酸(NEFAs)介导的AML12细胞肝脂损伤的调控机制,本试验通过添加高浓度的NEFAs刺激AML12细胞,RNA靶向沉默CaMKK,检测不同分组细胞内AMPK及固醇调节原件结合蛋白(SREBP1)的蛋白表达水平以及利用流式细胞术检测活性氧(ROS)的产生水平,同时利用激光共聚焦检测细胞内脂滴变化情况。结果显示,siCaMKK+NEFAs组AMPK蛋白表达水平较空白对照组及NEFAs组均显著降低,而SREBP1蛋白表达水平、ROS水平及脂滴数量均显著高于其他各组。结果表明,CaMKK通过AMPK信号通路调控SREBP1及线粒体脂质氧化可调节NEFAs诱导的肝脂损伤过程。

Orai1对NEFA诱导内质网应激引起犊牛肝细胞脂质沉积的影响

为探究Orai1是否参与非酯化脂肪酸(nonestesterifiedfatty acid,NEFAs)诱导内质网应激引起犊牛肝细胞脂质沉积,本试验首先通过体外添加高浓度NEFAs,运用Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,测定NEFAs对内质网应激标志分子GRP78表达量以及脂肪从头合成ACC1、FAS的表达水平的影响。而后又添加Orai1抑制剂2APB与RNA靶向沉默Orai1。结果显示,抑制或沉默Orai1后NEFAs刺激可明显降低GRP78、Orai1、ACC1、FAS的表达水平以及脂滴含量。结果表明,Orai1参与NEFA诱导的内质网应激引起犊牛肝细胞脂质沉积。

老年人不同甲状腺功能状态下脂代谢特征与氧化应激的关系

目的探讨老年人不同甲状腺功能状态下脂代谢特征与氧化应激的关系。方法初诊老年甲状腺疾病患者86例[甲状腺功能亢进（甲亢）47例，甲状腺功能减退（甲减）39例]、非老年甲状腺疾病患者83例（甲亢43例，甲减40例）和老年健康对照组20例。检测空腹血浆丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD），氧化型低密度脂蛋白（OX-LDL）水平，同时测定血脂指标及甲状腺功能，计算SOD／MDA比值。结果老年甲亢组血脂各组分均高于非老年甲亢组、低于老年对照组（P〈0．05或P％0．01）；老年甲亢组与非老年甲亢组、老年对照组比较，丙二醛[分别为（10．23±6．29）、（7．37±4．58）μmol／L和（3．66±2．53）μmol／L]、游离脂肪酸（FFA）[分别为（0．86±0．58）、（0．61±0．46）mmol／L和（0．45±0．12）mmol／L]和SOD显著升高（P〈0．01或P〈0．05）。老年甲减组与非老年甲减组和老年对照组比较，MDA[（9．03±5．98）、（6．59±3．18）μmol／L和（3．66±2．53）μmol／L]、OX-LDL[（387．36±71．04）、（355．22±45．01）μg／L和（324．53±56．19）μg／L]及部分血脂组分均显著增高（P〈0．05或P〈0．01）。老年甲亢组、甲减组SOD／MDA比值均低于老年对照组和非老年组（均为P〈0．01）。多元回归分析，甲亢组游离甲状腺素（FT4）和FFA是影响MDA的因素，甲减组非HDL-C和LDL-C与MDA独立相关。结论初诊老年甲亢和甲减患者氧化应激增强，氧化损伤程度与脂代谢紊乱有关。